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Inmunologa

LA CITOMETRA DE FLUJO
En el estudio de las discrasias de clulas plasmticas.

INTEGRANTES:
BRIGITTE AGUILAR MORON
MARIA ARANZAMENDI ZENTENO
JOSELYN CHAMBI RIVEROS
YENKA CHEGNE GARCIA
MARIA EUGENIA TRELLES CANAZA

CONCEPTOS PREVIOS
1

Discrasia
Sangunea
Serie de procesos
patolgicos
que
son el reflejo de
un trastorno en la
proliferacin
de
las
clulas
productoras
de
las
inmunoglobulinas.

Lagammapata
monoclonales unaD.S
que cursa con una
produccin anormal
deIg y la aparicin de
un tumor
deplasmocitos. Este
trastorno
inmunoproliferativo es
un cuadro maligno
derivado dellinfocito B.

3
Elmieloma
mltiple(MM) es un
tipo decncerde laM.O
, en el que existe una
proliferacin anormal
declulas plasmticas.
Dichas clulas de la
sangre producen los
anticuerpos (Ig) que
defienden al organismo
de infecciones y otras
sustancias extraas
(Ag).

Escuela Profesional de Ingeniera

Biotecnolgica.

INTRODUCCION
AVANCES EN EL DIAGNOSTICO Y MANEJO CLNICO
DE LAS CLULAS PLASMTICAS
En
la
ultima
dcada,
la
supervivencia de los pacientes
afectados por discrasias de
clulas plasmticas se ha
incrementado, principalmente
por el mejor conocimiento de
las alteraciones celulares y
moleculares implicadas en cada
paciente.

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Biotecnolgica

DIAGNOSTICO

GAMMAPATIAS MONOCLONALES

II

III

IV

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Biotecnolgica

APLICACIONES DE LA CITOMETRIA DE
FLUJO EN EL ESTUDIO DE LAS
DISCRASIAS
DE
CELULAS
PLASMATICAS

Identificacin diferencial de clulas

plasmticas patolgicas

Gammapatia
monoclonal de
significado incierto
(GMSI)

MIELOMA MULTIPLE

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Biotecnolgica.

MARCADORES

CD138

Sindecano -1
Fam. Heparan
Sulfato
Factores de
creciemiento
Expresin
linfocitos B
(plasmoblasto)
Identificacin
de clulas
plasmticas

CD38

TEXT

TEXT

Expresion Cel.

Hematopoyeticas

Elevada
expression cel.
Plasmaticas
Menos en
celulas con
mileoma
multiple

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MARCADORES

CD56

78% MM

Natural Killer

(-) Personas sanas

CD19
Diferenciacin 97.5%

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MARCADORES CON
VALOR PRONOSTICO
CD28
CD28

Se
Seencuentra
encuentraen
en
clulas
T
clulas T
Se
Seexpresa
expresaun
un47.8
47.8%
%
Activacin
celular
Activacin celular
Secrecin
Secrecinde
de
citosinas
citosinas
Se
Seasocia
asociacon
conla
la
evolucin
de
una
evolucin de una
enfermedad
enfermedad

CD27
CD27

50
50%
%menos
menos
en
enclulas
clulas
plasmticas
plasmticas
La
Laprogresin
progresin
de
la
de la
enfermedad
enfermedad
CD27
CD27reduce
reduce
su
expresin
su expresin

CD45
CD45
Es
Esuna
unatirosina
tirosina
fosfatasa
fosfatasade
deexpresin
expresin
en
clulas
del
en clulas delsistema
sistema
hematopoytico
hematopoytico
ndice
ndicede
deproliferacin
proliferacin
Relacionado
Relacionadocon
conBcl-2
Bcl-2
(regula
apoptosis)
(regula apoptosis)
Su
Suausencia
ausenciafavorece
favorecela
la
activacin
de
la
activacin de la
protena-cinasa
protena-cinasaAKT
AKT

Ayuda a la superviviencia de la
celula mediadora por EGE-1 e
insulina
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Biotecnolgica

MARCADORES CON
VALOR PRONOSTICO
CD117
CD117

CD221
CD221

Las personas
Las personas
con
conCD221
CD221
tienen
tienen
supervivencia
supervivencia
mas
mascorta
corta
Su expresin
Su expresin
se
seasocia
asociacon
con
translocacin
translocacin

Se expresa de forma
Se expresa de forma
natural en clulas
natural en clulas
progenitoras en
progenitoras en
estirpe mieloide
estirpe mieloide
Se asocia con
Se asocia con
hiperdiploidea
hiperdiploidea
Ausencia de
Ausencia de
translocacin y
translocacin y
mejor pronostico
mejor pronostico

CD200
CD200
Es una
Es una
glicoprotena
glicoprotena
que
que
interacciona
interacciona
con
conCD200R
CD200Roo
OX-2R
OX-2R
Suprime la
Suprime la
respuesta
respuesta
dada
dadapor
porlas
las
clulas
T
clulas T

Ayuda a la superviviencia de la
celula mediadora por EGE-1 e
insulinq
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Biotecnolgica

Algunos
Algunos pacientes
pacientes con
con mieloma
mieloma mltiple
mltiple presentan
presentan
una
una poblacin
poblacin de
de clulas
clulas plasmticas
plasmticas
Patolgicas
Patolgicas que
que retienen
retienen marcadores
marcadores de
de linfocitos
linfocitos B
B como
como
CD20
CD20 yy rara
rara vez
vez con
con CD11
CD11

CD19
CD20
CD27

Se
Se relacionan
relacionan
con
reordenamiento
con reordenamiento
Ig
Ig H
H
yy ausencia
ausencia
de
de hiperdiploidea
hiperdiploidea

Se vincula con clulas plasmticas pequeas

CD33
CD34
CD44
CD49

Aun
Aun no
no han
han estudiado
estudiado su
su fenotipo
fenotipo

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Biotecnolgica

Estudio de la clonacin de las

clulas plasmticas

El
El estudio
estudio de
de las
las
inmunoglobulinas
inmunoglobulinas IGCit
IGCit
(kappa
(kappa yy lambda)
lambda)
O
O pesadas
pesadas
IgA
IgA IgD
IgD IgG
IgG IgM
IgM

Permite
Permite establecer
establecer la
la
clonalidad
clonalidad de
de las
las clulas
clulas
plasmticas
plasmticas patolgicas
patolgicas yy
diferenciarlas
diferenciarlas de
de las
las sanas
sanas

Para su correcta
identificacin
de una linea
de clular es necesario
incluir cadenas
ligeras y pesadas
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Biotecnolgica

INDICE DE PROLIFERACIN Y PLODA

DE LAS CELULAS PLASMTICAS

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MARCADORES CON
VALOR PRONOSTICO

CITOMETRA
CITOMETRADE
DE FLUJO
FLUJO

PRONSTICO
PRONSTICO

Identificacin de
mieloma mltiple.
50 70% mieloma
mltiple con
aneuplodas por
hiperdiploida con
ganancia de
cromosomas.

Ganancias:
Ganancias:Cr-9
Cr-9yy
-15
-15
Prdida:
Prdida:Cr-13
Cr-13

Hiperdiploida: mejor
Hiperdiploida: mejor
pronstico.
pronstico.
Hipodiplodas: mala
Hipodiplodas: mala
evoluciln.
evoluciln.
Diploida: efecto neutro,
Diploida: efecto neutro,
excepciones
excepcionest(11,14)=
t(11,14)=
BUENO
y
t(4,14)
BUENO y t(4,14)yy
t(14,16)
t(14,16)=MALO.
=MALO.

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ANLISIS CELULAR

Citometra: superior a 3% = pronstico

adverso.
Clulas en fase S y B2-microglobulinas,edd y
estado= realizar un buen estudio de
pronstico.

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VALOR PRONSTICO DEL NDICE

DE APOPTOSIS DE LAS CLULAS
PLASMTICAS

COMPORTAMIENTO
COMPORTAMIENTODE
DE MIELOMA
MIELOMAMULTIPLE
MULTIPLE

DIAGNSTICO
DIAGNSTICO

ESTADO INICIAL:
desregularizacin
ciclo celular, alta
proliferacin.
Solo un pequeo
porcentaje
proliferacin
patolgica:
prdidad apoptosis.

Bortezomid o
Bortezomid o
talidomida:
talidomida:
inductores
inductores
apoptosis.
apoptosis.

CITOMETRA: anlisis
CITOMETRA: anlisis
rpido
rpidoyysencillo:
sencillo:fosfatidilfosfatidilserina
(anexina-V).
serina (anexina-V).
Apoptosis mayor a 4,5%:
Apoptosis mayor a 4,5%:
supervivencia
supervivenciamedia
mediade
de38
38
meses.
meses.
Apoptosis menor a 4,5%:
Apoptosis menor a 4,5%:
16
16meses.
meses.
Talidomida y bortezomib.
Talidomida y bortezomib.

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Diagnstico diferencial entre mieloma

mltiple y otro tipo de gammapatas

Patologas
Mieloma multiple, mieloma multiple
quiescente.
Macroglobulinemia de Waldestrom,
Plasmocitoma.
Leucemia de clulas plasmticas.
Linfoma de la zona marginal y AL
amiloidosis.

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Dignostico
Diferencial

En cada caso
el
anlisis
del fenotipo
de
las
celulas
patolgicas,
mediante
citometra de
flujo,
permite
diferenciar
dichas
patologias

El parmetro
de
mejor
dicriminacin
es la relacin
entre
el
nmero
de
clulas
plasmticas
sanas
y
patolgicas..

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MARCADORES DE DIFERENCIACIN

MZL suele tener el fenotipo CD 19+

CD45+ CD56-

Mieloma multiple CDCD56+

CD45-

MW CD19++ CD45+ CD56-

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evada proporcion de pacientes con mieloma

ultiple (80%) es posible detectar clulas
asmticas patolgicas circulando en la sangre
erifrica.
La supervivencia global disminuye segn se
incrementa la cifras de clulas plasmticas
detectadas en sangre

estudio en sangre perifrica del grado de

ivacin de los linfocitos T tambin ha demostrado
r til en pacientes con linfomas y mielomas.

UTILIDA
D DEL
ESTUDIO
DE LA
SANGRE
PERIFRI
CA

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Monitoreo post tratamiento

Con citometria de flujo es posible detectar clulas
plasmticas tumorales tres meses despus del
transplante, en al menos 40% de los pacientes

A los que se les detectaron clulas plasmticas

patolgicas tienen supervivencia de 54% a los 5
aos
Los pacientes que no se les encontro nada en 6 meses
tuvieron una supervivencia del 100%

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Equipo antignico para estudiar

discrasias de clulas plasmticas
Subpoblaciones de
linfocitos T, clulas NK,
mieloides maduras e
inmaduras y monocitos

CD81 Y 2
microglobulina:
supervivencia de clular y
potencial invasivo de las
clulas plasmticas

Euroflow se centra en el estudio de marcadores de

diagnostico y pronstico de clulas plasmticas
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CONCLUSIONES
La citometra de flujo contribuye a la mejor
caracterizacin de las clulas plasmticas
patolgicas,
y
marcadores
de
valor
pronstico.
Parmetros de especial relevancia clnica para
los nuevos tratamientos con bortezomib y
talidomida.
Ayuda al tratamiento adaptados al pronostico
de la enfermedad y al aumento de la
supervivencia global
Su alta sensibilidad lo hace de gran utilidad
en la monitorizacin de la enfermedad pos
tratamiento.
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LOGO

GRACIAS!