Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

CONTENIDOS
CALIBRACIN INSTRUMENTAL Y
METODOLGICA
GRFICAS DE CALIBRADO EN ANLISIS
INSTRUMENTAL
CORRELACCIN Y
REGRESIN
RECTA DE REGRESIN DE Y SOBRE
X
VALIDACIN DEL MODELO LINEAL: ANOVA DE LA
REGRESIN

REGRESIN PONDERADA
PROTOCOLOS DE CALIBRACIN
DATOS ANMALOS EN
REGRESIN

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

Curso Bsico de
Estadstica
y Quimiometra para
Qumica Analtica

Universidad de La Serena
Chile
Septiembre, 2007

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

CALIBRACIN INSTRUMENTAL
vs CALIBRACIN METODOLGICA

Instrumental

Metodolgica

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

Instrumental
Se refiere al correcto funcionamiento de un
instrumento analtico o un equipo de medida.

Metodolgica
Conlleva la caracterizacin de la respuesta de
un instrumento analtico de acuerdo a las
propiedades de un analito determinado o de un
conjunto de ellos.

Leccin 3
Instrumental
Definici
n

Chequear el
funcionamiento
correcto de
instrumentos

Objet
o

Aparatos o
instrumentos

Patr
n
Informacin

No
requerido
Analtica
No
analtica

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

Metodolgica
Caracterizar la respuesta
analtica de un
instrumento en funcin
de las propiedades de un
analito
Mtodo Analtico.
Obtencin de una
relacin inequvoca entre
la seal y las
caractersticas del
analito
Requerid

o
Analtic
a

Leccin 3

Cualitati
vo

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

Instrumental

Metodolgica

Instrumento:
Espectrofotmetro
Parametro:(max)

Polarografa
E1/2

Absolut
Gravimetra
o

Cuantitati
vo

pH-metro
Disoluciones
reguladoras

Estequiomtr
ico
Volumetra
Relativo
Anlisis
Instrumental

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

GRFICAS DE CALIBRADO EN ANLISIS

INSTRUMENTAL

LOS RESULTADOS OBTENIDOS EN

ANLISIS INSTRUMENTAL SON
EVALUADOS MEDIANTE MTODOS DE
CALIBRACIN

PROCEDIMIENTO DE CALIBRACIN EN ANLISIS

INSTRUMENTAL
PREGUNTAS ESTADSTICAS

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

GRFICAS DE CALIBRADO EN ANLISIS

INSTRUMENTAL

PROCEDIMIENTO DE CALIBRACIN EN ANLISIS

INSTRUMENTAL
El Qumico Analtico elige
adecuadamente un conjunto
de patrones de concentracin
perfectamente conocida

Este conjunto de referencias

analticas (patrones) son
medidas en el instrumento
analtico en las mismas
condiciones experimentales
que las que se emplearn en
la muestra real.
La concentracin de analito en
una muestra real se obtiene
por interpolacin.

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

GRFICAS DE CALIBRADO EN ANLISIS

INSTRUMENTAL
PREGUNTAS ESTADSTICAS

Qu tipo de grfica podemos emplear (recta,

curva)?
Qu recta es la mejor?Qu recta representa
mejor mis resultados experimentales?
Si se admite que la representacin es lineal Qu
errores y lmites de confianza se establecen para
la ordenada y para la pendiente?
Qu errores y lmites de confianza se establecen
para la la determinacin analtica de la
concentracin del analito?
Cul es el lmite de deteccin del mtodo?

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

Qu significa
Calibracin?

It
It is
is the
the process
process by
by means
means the
the answer
answer of
of aa
measurement
measurement system
system is
is transformed
transformed or
or
expressed
expressed in
in terms
terms of
of aa quality
quality or
or quantity
quantity of
of
interest.
interest.

Kowalski
Kowalski et
et al.
al.

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

Leccin 3

TIPOS DE CALIBRACIN
UNIVARIANTE
Regresin lineal

y = a + bx
Regresin
polinmica

y = a + bx + cx2 + dx3 +.
Polinmica
ortogonal

y = a + b(x - ) + c(x - 1) (x - 2) +.

No Ponderada
Ponderada

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

TIPOS DE CALIBRACIN
MULTIVARIANTE

y=

Regresin lineal
a + bmltiple
1x1 + b2x2 + .

Regresin por componentes

principales

Polinmica
ortogonal

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

Leccin 3

TIPOS DE CALIBRACIN

MTODOS ABSOLUTOS
MTODOS RELATIVOS
El modelo es conocido, por lo
tanto puede ser evaluado sin
medidas comparativas. El
modelo se basa en principios
fsicos y qumicos y constantes

El modelo no es conocido y
debe ser estadsticamente
estimado

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

Se ha llevado a cabo un conjunto de observaciones

(x,y). Algunas rplicas para el mismo valor de x
conducen a un valor medio de y
ASPECTOS CRTICOS

Los patrones de calibracin deben cubrir todo el

intervalo de concentraciones que se empleen en
el anlisis.
Es necesario incluir en la curva de calibrado un
valor para el blanco.
Todos los errores se cometen en la medida de la
y (seal)
Se asume una distribucin normal/gaussiana en
las medidas de la seal.

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

ETAPAS A SEGUIR
Seleccionar un modelo matemtico (ej. Lineal)
DESPUS DE LA REPRESENTACIN INICIAL DE LOS DATOS
OBTENIDOS)

Obtener los parmetros verdaderos del modelo

Validar el modelo
(anlisis de la varianza o anlisis de residuos)
Calcular los lmites de confianza para los
parmetros del modelo, la funcin de regresin
y el resultado analtico.

Leccin 3
CORRELACCIN Y
REGRESIN

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

CORRELACCIN: NO conlleva relacin funcional

(NO MODELO)
Mide el grado de asociacin de variables
(indicado a travs de un coeficiente de correlacin)

REGRESIN: S conlleva relacin funcional

(MODELO)
El inters radica en determinar
una variable dependiente
a travs de los parmetros de regresin
obtenidos por el modelo.

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

CORRELACIN Y
REGRESIN
Calibracin Metodolgica, en un amplio sentido,
trata de describir las relaciones cuantitativas
entre dos variables.
En particular, la calibracin est interesada
en cmo vara la seal (variable
dependiente) con la concentracin (variable
independiente)

Las tcnicas estadsticas que estudian la calibrac

se denomina Anlisis de Regresin

El principal objetivo del Anlisis de Regresin

es comprender qu modelo matemtico es adecu
con fines de descripcin o de prediccin

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

Leccin 3

Coeficiente de correlacin lineal: su

expresin

x y i y

x

2

r
1 r

n2

y

2

12

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

Coeficiente de correlacin lineal: su

significado

Leccin 3

CALIBRACIN
ETAPAS
A SEGUIR
METODOLGICA
UNIVARIANTE

RECTA DE REGRESIN DE Y SOBRE

X
Concepto de residuo

i yi y i
yi
y i

Mtodo de los mnimos

cuadrados

y i a bxi

Valor experimental de la variable

dependiente
Valor de la variable dependiente que predice el
modelo
Residuo=diferencia entre lo obtenido y lo
predicho

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

RECTA DE REGRESIN DE Y SOBRE

X
Mtodo de los mnimos
cuadrados

Minimiza la suma de los cuadrados de los

residuos
Contiene al centroide o centro de gravedad del
sistema

i yi y i

2
i

yi y i
i

x, y

Residuo
2

Suma de los
cuadrados de los
residuos

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

RECTA DE REGRESIN DE Y SOBRE

X
Seleccionar un modelo
matemtico (ej. lineal)
Regresin no ponderada

yi a bxi

i xi
y

Obtencin de la recta (ordenada y

pendiente)
Errores en la ordenada y en la
pendiente
Error en la prediccin de la
concentracin (interpolacin)

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

RECTA DE REGRESIN DE Y SOBRE

X
Mtodo de los mnimos
cuadrados

Requisitos/Hipte
sis

i a bxi
y

Modelo es lineal
La varianza de las seales es constante en todo el
intervalo de concentraciones (homocedasticidad)
Los errores slo existen en la medida de
la seal (no en las concentraciones)

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

RECTA DE REGRESIN DE Y SOBRE

X
Visualizacin de la varianza

Homocedasticidad

Heterocedasticidad

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

Leccin 3

RECTA DE REGRESIN DE Y SOBRE

X
Mtodo de los mnimos
cuadrados

Pendiente y Ordenada en el origen

x x y y
x x
i

a y bx

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

RECTA DE REGRESIN DE Y SOBRE

X
Mtodo de los mnimos
cuadrados

Estadstico Sy/x estima los errores aleatorios en el eje y.

Es el error de la recta.

Sy

yi

i 2
y

n2

DENOMINADOR:

Grados de
Libertad

NUMERADOR:

Cuadrado de
los residuos

Necesitamos dos
puntos para contener
una recta

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

Leccin 3

RECTA DE REGRESIN DE Y SOBRE

X
Mtodo de los mnimos
cuadrados

Errores en Pendiente y Ordenada en el origen: Intervalos de

Confianza

Sy

Sb

b tsb

Sa S y

xi

n xi x
i

a ts a

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

Leccin 3

RECTA DE REGRESIN DE Y SOBRE

X
Mtodo de los mnimos
cuadrados

Errores en la prediccin de la
concentracin.
Error en la interpolacin

S xo

Sy
b

y0 y
1 1

2
m n b2

x
i

x0 ts x0

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

Leccin 3

RECTA DE REGRESIN DE Y SOBRE

X
Errores en la prediccin de la concentracin: profundizando

Error de la recta

S xo

Pendiente

Seal media

Sy
b

Componente y
del centrodide

y0 y
1 1

2
m n b2

x
i

Nmero de
rplicas

Nmero de
puntos de la
recta

Componente x
del centrodide
Concentracin
de patrones

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

RECTA DE REGRESIN DE Y SOBRE

X
Hiprbolas de Error:
la forma del intervalo de confianza de la recta

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

El lmite de deteccin y de
determinacin
Interpolando en la recta

Seales

y LOD y B 3sB
y LOQ y B 10 s B
y LOD a 3s y x
y LOQ a 10 s y x

Concentracio
nes
Lmite de Deteccin
(LOD)
Lmite de
Cuantificacin
(LOQ)
Lmite de Deteccin
(LOD)
Lmite de
Cuantificacin
(LOQ)

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

Interpretacin estadstica del lmite de

deteccin

Error decir que SI hay analito cuando NO hay analito:

FALSO POSITIVO
Error decir que NO hay analito cuando SI hay analito.

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

Leccin 3

VALIDACIN DEL MODELO LINEAL: ANOVA DE LA

REGRESIN

ytotal

SSREG

i
y

yi

SSLOF

yij

SSPE

y i
Ci

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

Leccin 3

VALIDACIN DEL MODELO LINEAL: ANOVA DE LA

REGRESIN

VARIACIN TOTAL=VARIACIN DE LOS RESIDUOS +VARIACIN DE LA

REGRESIN

SSTOTAL

y
i

SSRESIDUAL

SSREGRESIN

y y ij y i ni y i y
2

ij

y
i

ij

2
2
yi ni yi y i

SSPE

SSLOF

SSRESIDUAL

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

Leccin 3

VALIDACIN DEL MODELO LINEAL: ANOVA DE LA

REGRESIN

H0= el modelo es lineal=las varianzas de la falta de

ajuste y del puro error no son significativamente
diferentes

SS LOF

Fcal

Varianza LOF

SS PE
Varianza PE

exp .

calculada

crtica

tabulada

h 2 CM LOF
CM PE
ni h
Se acepta Ho
El modelo es lineal

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

REGRESIN PONDERADA: el
concepto

Ponderaciones

si

2
2

si
n

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

Leccin 3
REGRESIN PONDERADA: las
ecuaciones

Centroide
(coordenadas
del centro de
gravedad
ponderado)
b

w x y
x
i

y wi yi / n
i

nx w y w

nx w

a w y w bx w

x i xi / n

bw tsbw
aw tsaw

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

Leccin 3
REGRESIN PONDERADA: las
ecuaciones

S( y

x)w

S xo w

S( y

w
y

y
i i i
i

n2

y0 y w
1 1

2
2
w n b2

w
x

n
x
i
w
0
i

x)w

x0 w ts x0 w

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

PROTOCOLOS DE CALIBRACIN: el concepto

Indirecto o de Calibracin externa:

externa las muestras
contienen un cantidad desconocida del analito y los
patrones tienen una cantidad perfectamente conocida
de analito. Los patrones contienen al analito pero ste
es EXTERNO al analito de la muestra
Adiciones Patrn o Calibracin Interna:
Interna el analito en s
mismo es usado para la calibracin interna. El analito de
la muestra es empleado en el protocolo de calibracin.
Patrn Interno : previo a la determinacin se aade una
cantidad conocida de una sustancia similar al analito
(patrn interno)

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

PROTOCOLOS DE CALIBRACIN: adiciones

estndar

El empleo ms habitual del Mtodo de las

Adiciones Patrn es para eliminar la existencia de
errores sistemticos generados por el efecto de
matriz por parte de la muestra.

En este sentido los efectos de matriz

son igualados en los patrones al
igual que existen en la muestra.

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

PROTOCOLOS DE CALIBRACIN: adiciones

estndar

S xE

Sy x 1
y2

2
2
b
n

b
x

i
i

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE
Pendiente Calibracin
Externa=
Pendiente Adiciones Patrn
No hay efectos de
matriz

Pendiente Calibracin
Externa <
Pendiente Adiciones Patrn
S hay efectos de matriz:
calibrado interno revela
exaltacin de la sensibilidad

Pendiente Calibracin
Externa>
Pendiente Adiciones Patrn
S hay efectos de matriz:
calibrado interno revela
inhibicin de la sensibilidad

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

PROTOCOLOS DE CALIBRACIN: adiciones

estndar
Dos diseos incorrectos en Calibracin
Interna

Intervalo de concentraciones
demasiado grande

Intervalo de concentraciones
demasiado pequeo

Leccin 3
Protocolos de Calibracin

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

Mtodo de las adiciones

estndar

Cada muestra requiere su propia calibracin.

Se necesitan grandes cantidades de
muestra.
La automatizacin es
difcil.

En trminos estadsticos es menos preciso

porque la determinacin se realiza por
extrapolacin.

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

PROTOCOLOS DE CALIBRACIN: patrn interno

Este mtodo corrige los errores aleatorios y

sistemticos.
Se emplea cuando existen prdidas incontroladas
en la cantidad analizada (inyeccin en
Cromatografa de Gases)
Patn Interno (IS):
caractersticas
Debe presentar compatibilidad con las muestras y con
los patrones (solubilidad).
Caractersticas fsicas y qumicas similares al analito.
Respuesta analtica distinguible del analito.

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

PROTOCOLOS DE CALIBRACIN: patrn

interno
Un compuesto similar al analito es aadido en una
cantidad perfectamente conocida a la muestra y a
los patrones.

Patn Interno (IS)

El patrn interno debe presentar un
comportamiento idntico al analito en todas las
etapas metodolgicas crticas.
Debe aadirse tan pronto como sea posible en el
procedimiento analtico.

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

PROTOCOLOS DE CALIBRACIN: patrn

interno

Una muestra es inyectada

despus de haberse
inyectado
individualmente los
analitos.

Una muestra es
inyectada, previa adicin
del IS, despus de
haberse inyectado
individualmente los
analitos con previa
adicin de IS.

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

Leccin 3

PROTOCOLOS DE CALIBRACIN: patrn

interno
Una muestra es
inyectada, previa adicin
del IS, despus de
haberse inyectado
individualmente los
analitos con previa
adicin de IS.
Seales Normalizadas

Analito
1
2
3

Tiempo
retencin
tN1 = t1 / tIS
tN2 = t2 / tIS
tN3 = t3 / tIS

rea
AN1 = A1 / AIS
AN2 = A2 / AIS
AN3 = A3 / AIS

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

Rectas de Regresin para comparar Mtodos

Analticos
La validacin de un nuevo mtodo frente a otro
conocido de referencia.
El objetivo principal ser de nuevo el hallazgo de
errores sistemticos.
Se utiliza este mtodo cuando el intervalo de
concentraciones es muy amplio (como ocurre en
Anlisis Instrumental)
Si las concentraciones son pequeas puede
emplearse los test estadsticos.

CALIBRACIN
Leccin 3
METODOLGICA

UNIVARIANTE
Rectas de Regresin para comparar Mtodos
Analticos

Si cada muestra proporciona el mismo resultado

por ambos mtodos, la recta de regresin tendr
como caractersticas:
Ordenada (a)=0
Pendiente (b)=1
Coeficiente de
correlacin (r)=1

Si 0 est incluido en a t Sa
Si 1 est incluido en b t Sb

NO HAY ERROR
SISTEMTICO
NO HAY DIFERENCIAS

Leccin 3

CALIBRACIN
METODOLGICA
UNIVARIANTE

DATOS ANMALOS EN
REGRESIN
Residuos uniformes en el tamao a
medida que aumenta el valor
predicho de y por el modelo
Residuos aumentan a medida que
aumenta el valor predicho de y por
el modelo
Indican un grfico de
regresin ponderada
Residuos son primero negativos,
despus cortan al cero y finalmente
aumentan
Indican un grfico curvilneo
Residuos uniformes en el tamao a
medida que aumenta el valor
predicho de y por el modelo