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Fijacin y tcnicas de preparacin de

extendidos citolgicos

Introduccin
Citologa es parte de la biologa que estudia las clulas y sus
organelas, su desarrollo ha sido paralela al del microscopio.
Desde hace muchos aos ha sido de gran valor en el campo de
la medicina para la deteccin del cncer cervico-uterino y
de otros sitios del cuerpo.
Los laboratorios de citologa deben estar dotados de varias
reas de trabajo:
-Citologa ginecolgica
-Citologa de lquidos o derrames
-Puncin aspiracin con aguja fina(PAAF)

Interpretacin celular
Mtodos de recoleccin
Fijacin y fijadores
Preservacin de lquidos antes de ser

procesados
Preparacin de material citolgico para el
examen microscpico
Tincin y montaje de la muestra celular

Mtodos de recoleccin
Citologa ginecolgica:

Citologa convencional es
recolectada del crvix por el
personal mdico o enfermera

Puncin Aspiracin con aguja

Fina pueden ser recolectadas


por patlogos (as) con
experiencia en este campo.

Citologa de lquidos

corporales como orina y


esputo pueden ser
recolectada por el mismo
paciente siguiendo las
recomendaciones
mdicas o del laboratorio
Para la recoleccin de los
derrames como pleural,
peritoneal, LCR y otros ,
el paciente debe estar
ingresado y el medico
debe realizar la
recoleccin adecuada.

Puncin aspiracin con


aguja fina (PAAF=BAAF)

Derrames corporales

Toracocentesis y
paracentesis

Fijacin
La fijacin inmediata de las muestras es

necesaria para preservar los detalles


celulares en los extendidos citolgicos.
Si las muestras se dejan secar al aire antes
de la fijacin las clulas pueden sufrir
distorsin en su arquitectura.

Fijadores
Para preservar muestras ginecolgicas :
Alcohol al 95%- ter.
Alcohol 95% en atomizador o citospray.
Metanol al 100%
Propanol 80%
Isopropanol 80%
Pre-fijador para muestras de lquidos corporales:
alcohol 50%.
Para las PAAF se pueden utilizar:
Alcohol 95%
Formalina buferada al 10%
Secado al aire.

Liq. Pleural fijado en alcohol 95%

Liq. Pleural fijado en formalina al 10%

Muestra de liq. Peritoneal fijada en alcohol al 95%

Fijadores especiales
Solucin de formalina buferada neutral:

Formalina 37-40%100ml
Agua
900ml
Fosfato de sodio
monobsico . 4 g
Fosfato de sodio
bibsico 6.5 g.

Solucin de Bouin
Solucin acuosa de
cido pcrico 1.2 %50ml
Formol 37-40%

250ml

Acido actico glacial


50ml

Fijador de Carnoy
-Etanol 95%
60 ml
-Cloroformo
30 ml
-Acido actico
glacial
10 ml
(en este fijador la muestra no debe
permanecer ms de 15 min)
Vapor de formalina: este fijador hemolisa los
glbulo rojos y encoge las clulas
Fijador cido Pcrico
-Acido pcrico
1.3 g
-Alcohol etlico 70%
1000ml

Preservacin de Lquidos antes de ser


procesados
Preservar la morfologa celular hasta que la muestra

sea procesada es esencial para la correcta


interpretacin.
Los especimenes pueden ser sometidos al laboratorio
sin preservacin si se facilita la inmediata preparacin
de los extendidos.
El tiempo entre la recoleccin de la muestra y la
preparacin antes de sufrir dao celular depende del
PH, protenas, actividad enzimtica y la presencia o
ausencia de bacterias. Ejemplo: Lavado Gstrico

Preparacin del material citolgico para el


examen microscpico
Muestras lquidas como orina , derrames pleurales,
peritoneales o LCR., se deben someter al mtodo
de sedimentacin en centrifuga por 5 min a 1500
o 2000rpm , del material obtenido se realiza los
extendidos.
Muestras con alto contenido mucoso como Esputo,
aspirado bronquial o lquido de mucocele deben
realizarse los extendidos citolgicos directamente
seleccionando partculas slidas, decoloradas o
con sangre.

Mtodo de sedimentacin celular

Preparacin del extendido citolgico de esputo

Preparacin con filtro de membrana o


millipore
Los filtros de millipore son elaborados de celulosa

aproximadamente de 140milimicras,
especialmente utilizado en muestra con poco
contenido celular como LCR.

Preparacin de bloque celular


La tcnica de bloque celular o inclusin en

agar parafina se realiza a partir del sedimento


celular decantando liquido sobrenadante y
agregando agar lquido, este mtodo es til
para complementar diagnostico del
citolgico .

Tincin Papanicolaou
Tincin de rutina elaborada por el Dr. Georges

Papanicolaou, tienen un valor prctico en la


diferenciacin celular tanto citoplasmtica
como nuclear y sus modificaciones.
Para este mtodo se necesitan 3 soluciones
especificas: Hematoxilina de Harris
Orange 6 (OG6)
Eosina Azur 36, 50 65 (EA-50)
Cada una de estas soluciones deben de ser
filtradas antes de utilizarla.

Pasos de tincin Pap

Re fijacin en alcohol al 95% 10 min


Hidratacin en alcohol 80%, 70%, 50% agua una
sumersin en cada una
3. Tincin Nuclear en Hematoxilina de Harris 6 min
4. Enjuague en agua
5. Extraccin diferencial en cido clorhdrico al 0,25%.
6. Enjuague y deshidratacin en agua, alcohol 50%, 70%,
80% y 95%
7. Tincin citoplasmtica en Orange 6 1 min
8. 3 enjuague en alcohol al 95%
9. Tincin citoplasmtica en EA 36, 50 o 65 1 a 3 min.
10. Enjuague en 3 alcoholes 95%
11. Deshidratacin total en etanol absoluto
12. Clarificacin celular en Xilol
1.
2.

Tinciones especiales
Tincin para

evaluacin hormonal:
Tincin de Shorr

1. Alcohol al 50%100ml
2. Biebrich Scarlet 0.5 gr
3. Orange G-6
0.25gr
4. Fast-Green
0.075gr
5. Acido fosfotngstico

0.5gr
6. Acido fosfomolbdico 0.5gr
7. Acido actico
1.0ml

Mtodo de la tincin:

1. Teir la Mx., en
solucin de Shorr por
1 min.
2. Enjuagar en
alcohol al 70%, 95%
y alcohol absoluto
3. Aclarar en xilol y
montaje permanente

Otras tinciones
Mtodo de Rakoft:

Tincin para cromatina

sexual:

Light Green 83ml


Solucin acuosa de

eosina al 1 % 17ml
La muestra tomada de la
pared vaginal se coloca
en 2 cc., de solucin
salina y se le agrega 1
gota de la mezcla de
Rakoft, se deposita esta
muestra en la lamina.

1. Tincin de Biebrich
Scarlet-Fast-Green
2. Tincin de Orceina
actica
3. Tincin Cresil
Violeta

Montaje de la muestra procesada


Los medios de montajes crean un capa

permanente entre la lmina y el cubreobjetos


protegindola del medio ambiente, daos
mecnicos, disecacin celular, logrando as
almacenarlas luego de haber sido visualizadas o
diagnosticadas .
Se coloca una gota del medio de montaje sobre
la muestra
Se diluye con Xilol y antes de que se seque
colocar el cubre objeto tratando de que la
muestra quede protegida

Algunas recomendaciones
Muestras citolgicas hemorrgicas antes de

proceder a tincin deben de sumergirse por 5


seg., en solucin acuosa de cido actico al
2%
Extendidos citolgicos cervicovaginal sin fijar
se re hidrataran sumergiendo la laminilla en
glicerina al 50% por 2 seg., y luego sumergir
en alcohol al 95% .