Prctica Semana

N3
PREPARACIN DE MUESTRAS
TCNICAS DE COLORACIN
CLULAS PROCARIOTAS

Preparacin de frotis
bacteriano para coloracin
Antes de la tincin las bacterias suelen encontrarse en medio lquido.

Extensin:
En
un
portaobjeto
limpio se toma una
gota del medio y se
extiende hasta formar
una pelcula uniforme
y delgada.
Se deja que la pelcula
seque con el aire

Preparacin de frotis
bacteriano para coloracin
Fijacin: La fijacin coagula
las sustancias proteicas de las
clulas, lo cual hace que los
microorganismos
queden
pegados al portaobjetos. Puede
ser de 2 tipos: por sustancias
qumicas (licor de Hoffman,
formalina, metanol) o por calor
moderado (mtodo de Koch).

La lamina queda lista para la

coloracin correspondiente

Colorantes
La mayora de los colorantes son compuestos
orgnicos que tienen alguna afinidad especfica por los
materiales celulares.
Colorantes
bsicos
cargados
positivamente
(cationes), se combinan con intensidad con los
constituyentes celulares cargados negativamente
(cidos), como cidos nucleicos y polisacridos cidos.
Ejm: azul de metileno, cristal violeta, safranina, etc.
Colorantes
cidos
son
molculas
cargadas
negativamente (aniones), se combinan con los
constituyentes celulares cargados positivamente
(alcalinos), tales como algunas regiones celulares y
muchas protenas.
Ejm: Eosina, Fucsina cida, Rojo Congo, etc.

Tipos de coloracin
Coloracin simple: Es la tincin de los microorganismos
aplicando slo una solucin colorante. Pueden ser:
Positiva: Se tien los constituyentes celulares.
Ejm: Con fucsina bsica, azul de metileno o violeta de
genciana.
Negativa: Se tie el medio que rodea la clula. Lo que se
ve es el perfil de las clulas.
Ejm: Con tinta china o nigrosina.
Coloracin compuesta o diferencial: Se emplea ms de
un colorante para la tincin y permite diferenciar a las
clulas entre s o a sus estructuras. Puede ser:
Coloracin doble: Tincin con un colorante bsico y luego
con un colorante cido o de contraste.
Ejm: Coloracin Eosina/Hematoxilina, Gram, Ziehl-Neelsen
Coloracin neutra: Tincin con un colorante compuesto,
es decir, una mezcla de un colorante cido y otro bsico,
simultnea.
Ejm: Colorante Wright, Giemsa.

Factores que afectan la

coloracin
El mecanismo de coloracin de las
muestras
biolgicas
pueden
ser
afectados por:
Pureza del colorante.
Concentracin del colorante.
pH de la solucin del colorante.
Temperatura del medio ambiente.
Sustancias adicionales (mordientes).
Tiempo de coloracin.

Mordientes
El mordiente se combina con un
constituyente celular o el colorante y
lo altera de tal modo que mejorar la
tincin por favorecer la fijacin de
dicho colorante.
Ejm: Lugol, cido tnico.

Morfologa bacteriana

La
tcnica
de
Gram
nos
tambin permite
distinguir
bacterias por:
a)morfologa:
cocos,
bacilos,
espirilos,
cocobacilos,
vibrios.
b)agrupacin:
pares,
cadenas
ttradas, racimos,
sarcina.

Bacterias con tincin Gram

Clostridium
perfringens Bacilo
Gram (+)

Escherichia
coli Bacilo
Gram (-)

Bacterias con tincin Gram

Staphylococcus aureus
Estafilococo Gram (+)
Neisseria sp.
Coco Gram (-)

Bacterias con tincin Gram

Leptospirillum ferrooxidans
Espirilo Gram (-)
Streptococcus
mutans
Estreptococo Gram
(+)

Bacterias con tincin Gram

Bacillus subtilis
Bacilo Gram (+)

Pseudomonas aeruginosa
Bacilo Gram (-)

Bacterias con tincin Gram

Bacilos Gram (-) y cocos Gram (+)

Diplococos, sarcina Gram (-)

Practica guiada N3