GRADO EN QUMICA

Tema 4

Enzimas

2014-15

ESPONTANEIDAD DE UNA REACCIN

Toda reaccin qumica est
influida por dos fuerzas:
aA + bB

cC + dD

Adquirir el estado de enlace ms

estable, el de menor energa (menor
entalpa, H)

Conseguir el mayor grado de desorden

(mayor entropa, S)

Una reaccin ser favorable o

espontnea si G es negativa.

Energa libre de Gibbs

o energa libre (G):

G = H TS
(energa de un sistema capaz
de transformarse en trabajo)

Una reaccin termodinmicamente favorable no es

necesariamente una reaccin rpida.
O2
O2

O2
O2

Glucosa + 6O2

O2
O2

O2

G0= - 2867 KJ/mol (686 Kcal/mol)

C6H12O6
Glucosa

6CO2 + 6H2O

C6H12O6
no se modifica

Glucosa

Cul es la diferencia?
Reaccin catalizada
enzimticamente

vR = muy rpido

C6H12O6 + 6O2
Glucosa

6CO2 + 6H2O

CMO FUNCIONAN LAS ENZIMAS?

Las enzimas son catalizadores muy eficaces; aceleran la
velocidad de la reaccin, pero no afectan al equilibrio qumico.

Energa libre, G

Estado de transicin ()

Reaccin de
primer orden:

Keq = [P]/[S]
Estado
basal

G0= - RT ln Keq
Estado
basal

v= f(G)-1

Transcurso de la reaccin

G: Energa de activacin: Barrera que se debe superar para

iniciar la reaccin.
La velocidad de reaccin (v) depende de la magnitud de G.

Caractersticas de la actividad
cataltica de una enzima
1.- La enzima INCREMENTA LA VELOCIDAD DE LA
REACCIN: hace que la reaccin alcance ms
rpidamente el equilibrio.
2.- El enzima no modifica la constante de equilibrio
de
una
reaccin,
ni
las
caractersticas
-Si la reaccin es reversible,
lo seguir siendo.
termodinmicas
del sistema:
A
B
-Si la reaccin es irreversible, lo seguir siendo.
A

-Si la reaccin es posible termodinmicamente, lo

seguir siendo.
-Si la reaccin no es posible termodinmicamente, no
lo va a ser.

CMO FUNCIONAN LAS ENZIMAS?

Las enzimas disminuyen la energa de activacin
Energa libre, G

y, por tanto, aumentan la velocidad de la reaccin

Estado de transicin ()

intermedios Complejo
de reaccin enzima-sustrato

Complejo
enzima-producto

Transcurso de la reaccin

S
ES

E
EP

con menor
energa de
activacin

P
P

Caractersticas de las enzimas

1.- Enorme eficiencia cataltica:
Incrementan la velocidad de la reaccin que catalizan
en ms de un milln de veces (entre 105-1017).
2.- Especificidad:
Catalizan slo un tipo especfico de reaccin y actan
slo sobre un sustrato determinado o un n limitado
de ellos.
3.- Funcionan en condiciones de pH, temperatura y
medio acuoso fisiolgicos.
4.- Capacidad de regulacin: La actividad de los
enzimas se regula mediante diversos mecanismos
activadores e inhibidores para adecuarse a los
requerimientos celulares.

Enzimas: Tipos de especificidad

1.- Esteroespecificidad:
Slo actan sobre uno de los ismeros posibles:
Ej: Maltasa hidroliza -glcidos y no -glcidos
2.- Especificidad de reaccin:
Slo actan en una determinada reaccin.
3.- Especificidad de grupo:
Slo actan sobre grupos funcionales determinados:
Ej: - Quimiotripsina: enlaces peptdicos adyacentes
a los aminocidos aromticos.
- Esterasas: enlaces ster
- xidorreductasas utilizan el NADPH en la
biosntesis pero el NADH en la degradacin.

NOMENCLATURA DE ENZIMAS
Grupo transferido
Sustrato

Enzyme Commission
(NC-IUBMB)

EC 2.X.Y.Z

Cofactor
Tipo de reaccin catalizada
(TRANSFERASAS)

Clasificacin internacional de enzimas

N
Clase
Tipo de reaccin catalizada
1
2
3
4

xidorreductasas
Transferasas
Hidrolasas
Liasas

5
6

Isomerasas
Ligasas

ATP + D-Glucosa
ATP

Muchos

enzimas

se

nombran aadiendo el sufijo

asa

al

nombre

de

su

sustrato: lipasas, proteasas,

amilasas, o a una palabra
o frase que describe su
actividad

precedida

del

nombre del sustrato: lactato

deshidrogenasa
Transferencia de electrones
Transferencia de grupos
Reacciones de hidrlisis (interviene el agua)
Adicin de grupos a dobles enlaces o formacin
de dobles enlaces por eliminacin de grupos.
Transferencia intramolecular de grupos
Formacin de enlaces C-C, C-S, C-O y C-N por
condensacin acoplada a hidrlisis de ATP.

ADP + D-Glucosa-6-fosfato
ADP + P G0 = 30,5 kJ/mol

http://www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/index.html

ATP:glucosa fosfotransferasa
(Hexoquinasa, EC 2.7.1.1.)

6 clases de enzimas (1964 U.I.B.)

1- xidorreductasas: transferencia de electrones. Citocromo c
oxidasa.
2- Transferasas: transferencia de grupos: metilo, acilo, amino,
fosfato.Hexoquinasa.
3- Hidrolasas: reacciones de hidrlisis (interviene el agua). Lactasa.
4- Liasas: eliminan grupos mediante la escisin de un enlace
generalmente entre C-C, C-S, C-O y C-N para formar el doble enlace,
o catalizan la formacin de estos enlaces mediante la adicin de un
grupo al doble enlace. Acetato descarboxilasa.
5- Isomerasas: transferencia intramolecular de grupos. Fosfotriosa
isomerasa.
6- Ligasas: formacin de enlaces C-C, C-S, C-O y C-N por
condensacin acoplada a hidrlisis de ATP. Piruvato carboxilasa.

Cofactores enzimticos
Muchas enzimas requieren para su accin cataltica un
componente qumico adicional que se denomina COFACTOR.
Una enzima sin su cofactor se denomina APOENZIMA; la enzima
completa, catalticamente activa, se denomina HOLOENZIMA.
El COFACTOR:
- Acta a modo de puente de unin entre la enzima y el sustrato.
- Estabiliza la conformacin de la protena: asegura una forma
adecuada para que la enzima sea activa catalticamente.
Los cofactores se pueden clasificar segn su naturaleza
qumica en:
1) Metales: Fe2+/Fe3+, Zn2+, Mg2+,Cu2+, Mn2+, K+, Ni2+, Mo, Se
2) Coenzimas: molculas orgnicas pequeas derivadas
generalmente de las vitaminas.
- Si se une fuertemente a la enzima: Grupo prosttico
- Si se une dbilmente: Cosustrato
Enzimas que usan el mismo coenzima tienen mecanismos de
accin similares.

Cofactores enzimticos
Coenzima

Fuente

Funcin

COSUSTRATOS
Adenosina trifosfato

Transferencia de grupos fosfato

S-adenosilmetionina

Transferencia de grupos metilo

cido ascrbico

Vitamina C

Hidroxilacin de prolina. Antioxidante

NAD+/NADP+

Niacina

Transferencia de 2 electrones

Coenzima A

Pantotenato (B3)

Transferencia de grupos acilo

Tetrahidrofolato

cido flico

Transferencia de grupos de 1 C (formilo, p.ej.)

Ubiquinona

Transferencia de electrones

GRUPOS PROSTTICOS
FAD/FMN

Riboflavina (B2)

Transferencia de 1 2 electrones

Tiamina pirofosfato

Tiamina (B1)

Transferencia de unidades de 2 C con un carbonilo

Piridoxalfosfato

Piridoxina (B6)

Transferencia de grupos de aminocidos

Biotina

Biotina

Transferencia de grupos carboxilo

Adenosilcobalamina

Cobalamina (B12)

Reorganizacin intramolecular

Metilcobalamina

Cobalamina (B12)

Transferencia de grupos metilo

Retinal

Vitamina A

Visin

Vitamina K

Vitamina K

Carboxilacin de glutamina

CMO FUNCIONAN LAS ENZIMAS?

Las reacciones enzimticas transcurren en un espacio limitado dentro
de la estructura de la protena: centro activo

Sustrato

2 etapas:
Unin del sustrato
Reaccin: Accin cataltica

Centro activo

Quimotripsina

Centro activo - Caractersticas

1.- Son cavidades tridimensionales.
2.- Suponen una pequea parte del volumen total
del enzima: 1 Aa o un pequeo grupo de Aas.
3.- El sustrato se une al centro activo mediante
enlaces dbiles (puentes de hidrgeno,
interacciones

electrostticas,

van

der

Waals

hidrofbicas).

Estas interacciones contribuyen no slo a la

especificidad de la reaccin sino que
intervienen tambin en la catlisis.
4.- La especificidad de un enzima depende de la
disposicin de los tomos en el centro activo.

Centro activo
Los aminocidos que forman el centro activo pueden estar
muy alejados entre s en la secuencia primaria de la protena.

Residuos de
aminocidos que forman
el centro activo de la
lisozima

posicin de los residuos en la cadena peptdica

Mecanismos catalticos
Catlisis cido-base, es uno de los mecanismos ms
generales que intervienen en las reacciones enzimticas: los
centros activos de muchos enzimas contienen aminocidos que
pueden participar en el proceso cataltico como dadores o
aceptores de protones, p. e. Aas cargados (Lys, Arg, Glu, Asp, His).

Catlisis covalente en la que se

forma un enlace covalente transitorio
entre el enzima y el sustrato que
facilita la reaccin. Los Aas Ser, Tyr,
Cys y Lys presentes en el centro
activo de muchos enzimas participan
en este tipo de catlisis.

Catlisis por iones metlicos:

a travs de interacciones inicas
metal-sustrato-enzima y facilitando
reacciones redox.

Quimiotripsina

SERN-PROTEASAS: ejemplo de relacin de configuracin

del centro activo y especificidad de sustrato.
Quimiotripsina, tripsina y elastasa son proteasas similares en estructura y
mecanismo cataltico pero que, sin embargo, difieren en su especificidad.
Cortan el enlace peptdico, respectivamente, despus de un residuo:
Lisina/Arginina
(cargados +)

Aromtico
(apolar,
voluminoso)

Alanina/Serina
(tamao pequeo)

Sus centros activos (llamados bolsillos por su forma de cavidad)

presentan diferencias muy pequeas pero muy significativas que son las
responsables de esa especificidad.
bolsillo
apolar
amplio

bolsillo
cargado -

bolsillo
estrecho

Especificidad de la
unin enzima-sustrato
(ES)
1. Modelo llave-cerradura
Emil Fischer,1890

2. Modelo del ajuste inducido

Daniel Koshland Jr., 1958

Cintica enzimtica

V0=

Cintica de Michaelis-Menten:

Vo: Velocidad
inicial de la
reaccin (M/min)

variacin de la velocidad inicial de

la reaccin en funcin de la
concentracin de sustrato.

Vmax[S]
Km + [S]

Parmetros cinticos que

caracterizan una enzima:

Km: concentracin de sustrato a la cual

Vo = 1/2 Vmx. Refleja el orden de
magnitud de la [S] en la clula.
= Km

Concentracin de
sustrato [S] (mM)
Km y Vmx pueden determinarse
experimentalmente.

N de recambio (o constante cataltica,

kcat):
n
de
molculas
de
S
transformadas en P/unidad de tiempo
cuando la enzima est saturada.
Vmx:
velocidad
mxima,
enzima
saturado de sustrato. Refleja el n de
recambio.
Constante de especificidad: kcat/Km.
Refleja la preferencia de sustratos y la
eficiencia cataltica.

Efecto de la temperatura
y el pH sobre la actividad
enzimtica.

pH ptimo

T ptima

V0

Papain
Chemotrypsin

Glucosa-6 Fosfato
deshidrogenasa

Glucosa-6 Fosfato
deshidrogenasa

REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

La actividad de las enzimas debe estar estrictamente regulada y
coordinada para responder en cada momento a las necesidades
globales del organismo en respuesta a un entorno cambiante y con el
menor gasto intil de energa y sustratos.

Mecanismos generales:
Regulacin de la cantidad de enzima:

Inducible (requiere inductor) Transcripcin

Traduccin
Constitutiva

Degradacin

Disponibilidad de sustratos.
Localizacin intracelular de la enzima.

Controlada por:
Hormonas
Neurotransmisores

Isoformas enzimticas (isoenzimas): actividad y localizacin

Regulacin de la actividad enzimtica:

Excisin proteoltica: zimgenos

Accin de inhibidores
Unin reversible de efectores alostricos
Modificacin covalente reversible

Inducida por accin:

alostrica.
hormonal
neurotransmisores

Regulacin de la actividad enzimtica

Localizacin intracelular e ISOENZIMAS

Diferentes enzimas pueden localizarse en diferentes rganos,
clulas y compartimentos intracelulares y slo all donde se
encuentren se llevar a cabo la transformacin que catalizan.

ISOENZIMAS: Son enzimas que catalizan la misma reaccin

pero difieren en:

secuencia de aminocidos
codificadas por genes diferentes.
propiedades fisicoqumicas: Pm, pI, pH y t ptimos, etc
parmetros cinticos, como la Km
propiedades reguladoras.
localizacin (rganos, clulas e intracelular)

Regulacin de la actividad enzimtica

Excisin proteoltica
Algunas enzimas se sintetizan como precursores
inactivos, zimgenos y se activan mediante la
ruptura de uno o varios de sus enlaces peptdicos.
Zimgeno

Forma activa

- Pepsingeno
- Quimiotripsingeno
- Tripsingeno
- Procolagenasa
- Protrombina (y otras enzimas

- Pepsina
- Quimitripsina
- Tripsina
- Colagenasa
- Trombina

que actan sobre factores de

coagulacin sangunea)

Regulacin de la actividad enzimtica

Accin de inhibidores
Los inhibidores enzimticos son molculas que se unen al
enzima frenando o deteniendo su actividad.
La inhibicin puede ser:
Reversible: desaparece al eliminarse el inhibidor
- Competitiva
- No competitiva: alostrica
Irreversible:
Los
inhibidores
irreversibles
se
unen
covalentemente a la enzima o destruyen un grupo
funcional esencial para la actividad de una enzima.
La inhibicin por sustratos suicidas es un tipo de
inhibicin competitiva e irreversible: el sustrato en
s mismo no inhibe la enzima sino que es
transformado en un inhibidor por el organismo o
la propia enzima.

Regulacin de la actividad enzimtica

Inhibicin reversible competitiva

Sustrato e inhibidor se
fijan en el mismo lugar

Ejemplo: Inhibicin por producto final

o retroinhibicin.
En muchas vas metablicas, la enzima
reguladora (suele ser la 1) se inhibe
cuando se acumula el producto final.

Regulacin de la actividad enzimtica

Inhibicin reversible no competitiva:

Sustrato e inhibidor se unen a lugares
distintos de la enzima.
Un inhibidor no competitivo no impide la
unin del sustrato.
La unin del inhibidor suele inducir
cambios conformacionales en la enzima.

Ejemplo:
El dATP acta como inhibidor no competitivo
de la Ribonucletido reductasa que cataliza la
reaccin:
ADP
GDP

d ADP
d GDP

Regulacin de la actividad enzimtica

Unin de efectores alostricos:

Modifican la actividad de enzimas alostricas.
Su accin puede ser inhibidora o activadora.
Sustrato y efector se unen a lugares distintos de la
enzima (unin no competitiva) y de forma reversible.
La unin del efector induce cambios conformacionales
en la enzima que afectan a su actividad.

Podemos utilizar el mismo ejemplo de

la Ribonucletido reductasa
Su actividad est controlada por unin
alostrica de:
- dATP acta como inhibidor
- ATP acta como activador
En este caso ambos efectores se unen al
mismo sitio en la enzima, pero distintos
efectores alostricos pueden unirse a una
enzima en distintos lugares de la misma.

ADP
GDP

d ADP
d GDP

Sustrato suicida: Fluorouracilo

Mecanismo de inhibicin
sobre la Timidilato sintasa
F-Uracilo
(base)
no inhibe

A)

B)

TMP

en el organismo

F-dUMP
(nucletido)
inhibe

Timidilato
sintasa

Regulacin de la actividad enzimtica

Modificacin covalente reversible

La unin covalente de un determinado grupo
qumico o radical puede modificar de forma
reversible la actividad cataltica del enzima,
activndola o inhibindola.
Principales modificaciones:

Fosforilacin: unin de un grupo fosfato (a Tyr,

Ser oThr): mayoritaria
Adenilacin: unin de AMP (a Tyr)
Uridilacin: unin de UMP (a Tyr)
Ribosilacin: unin de un ADP-ribosa (a Arg, Gln, Cys)
Metilacin: unin de un grupo metilo CH3 (a Glu)