UNIVERSIDAD DE SAN MARTIN DE

PORRES
FACULTAD DE MEDICINA HUMANA
FILIAL NORTE

BIOLOGIA CELULAR Y
MOLECULAR
LISOSOMAS, DEGRADACION Y
MUERTE CELULAR
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II

2016

H. Lezama

H. LEZAMA

 LISOSOMAS
PROTEINAS DE MATRIZ LISOSOMAL
PROTEINAS DE MEMBRANA LISOSOMAL

DEGRADACION DE PROTEINAS
DEGRADACION LISOSOMAL
DEGRADACION EN PROTEOSOMAS
UBIQUITINACION

AGRESOMAS

MUERTE CELULAR
APOPTOSIS
NECROSIS
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AUTOFAGIA

H. Lezama

OTROS MECANISMOS

LISOSOMAS
ORGANELAS CITOPLASMTICAS
LIMITADAS POR UNA SOLA
MEMBRANA.
DESCUBIERTAS POR CHRISTIAN DE
DUVE.
PRESENTES EN TODAS LAS CLULAS
EUCARIOTAS.
CONTIENEN 50-60 ENZIMAS
HIDROLTICAS.
SON LOS DEGRADADORES DE
RESIDUOS O DESECHOS DE LA
CLULA.
SU FUNCION CATABLICA ES
COMPLEMENTADA POR ORGANELAS
ASOCIADAS A LOS LISOSOMAS
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H. Lezama
(LROS).

LISOSOMAS
MATRIZ LISOSOMAL CIDA
(PH 4,8) FAVORABLE PARA
ACTIVIDAD ENZIMTICA.
2 CLASES DE PROTENAS
SON ESENCIALES PARA SU
FUNCIONAMIENTO:
HIDROLASAS
LISOSOMALES.
PROTENAS INTEGRALES
DE LA MEMBRANA
LISOSOMAL (LMPs)
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H. Lezama

LISOSOMAS

ENZIMAS HIDROLTICAS SON

ELABORADAS EN EL RE Y
MODIFICADAS EN EL APARATO DE
GOLGI.
50-60 ENZIMAS HIDROLTICAS.

DEGRADAN MATERIAL PROCEDENTE

DE:
ENDOCITOSIS
FAGOCITOSIS
AUTOFAGIA
PARTICIPAN EN:
DEGRADACIN EN VOLUMEN
PROCESAMIENTO PROPROTENAS
PROCESAMIENTO DE ANTGENOS
DEGRADACIN DE LA MATRIZ
EXTRACELULAR
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H. Lezama
INICIACIN DE APOPTOSIS

LISOSOMAS
PROTENAS INTEGRALES DE LA
MEMBRANA LISOSOMAL (LMPs), APROX.
25 EN LISOSOMAS DE MAMFERO.
CUMPLEN DIVERSAS FUNCIONES:
ACIDIFICACIN DEL LUMEN
LISOSOMAL.
IMPORTACIN DE PROTENAS
DESDE EL CITOSOL.
FUSIN DE MEMBRANAS.
TRANSPORTE DE PRODUCTOS DE
DEGRADACIN AL CITOPLASMA.
LAS MS ABUNDANTES:
PROTENA DE MEMBRANA
ASOCIADA AL LISOSOMA 1 (LAMP1).
PROTENA DE MEMBRANA
ASOCIADA AL LISOSOMA 2 (LAMP2).
PROTENA INTEGRAL DE MEMBRANA
LISOSOMAL 2 (LIMP2).
TETRASPANIN CD63.
BOMBA DE PROTONES TIPO
VACUOLAR.
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CELULAS
ESPECIALIZADAS
EN FAGOCITOSIS
TIENEN GRAN
CANTIDAD DE
LISOSOMAS.
MACROFAGO DE
MEDULA OSEA

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EVENTOS DURANTE LA FAGOCITOSIS:

FORMACION DEL FAGOLISOSOMA (M.E.)

ACTIVIDAD EN LOS FAGOLISOSOMAS

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H. Lezama

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H. Lezama

LAS ENZIMAS
DESTRUYEN EL
CONTENIDO DEL
FAGOLISOSOMA9

LISOSOMAS
BIOGNESIS LISOSOMAL:

REQUIERE INTEGRACIN DE
VAS ENDOCTICA Y
BIOSINTTICA.
FRECUENTEMENTE EMERGE
DEL APARATO DE GOLGI.
EN ALGUNOS CASOS SE
DESARROLLA
GRADUALMENTE A PARTIR
DE ENDOSOMAS TARDOS .

H. Lezama
FOR ANUSMP-FMH-FN-BCM-2016-II
ANIMATED LOOK AT LYSOSOMAL FUNCTION.
HTTP://HIGHERED.MCGRAW-HILL.COM/SITES/007
2507470/STUDENT_VIEW0/CHAPTER3/ANIMATION_

10

LAS CLULAS CONTIENEN MLTIPLES

SISTEMA PARA
DEGRADAR PROTENAS.

El Sistema Ubiquitinproteasoma
El Sistema Lisosomal
El Sistema Intra-mitochondria
Calpains (Ca2+-dependiente de proteases)
Caspasas
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Proteasas de membranas

11
9

DEGRADACIN DE
PROTEINAS MAL
PLEGADAS
MAL PLEGADA = NO
FUNCIONAL.
DESNATURALIZACION.
ROMPE ENLACES
COVALENTES, NO
COVALENTES,
DISULFURO.
CHAPERONA-N
GLUCANASAUSMP-FMH-FN-BCM-2016-II UBIQUITINA.
H. Lezama
PROTEOSOMA.

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IMPORTANCIA CLINICA
Muchas enfermedades neurolgicas y otras son causadas por la
acumulacin, mas que por la degradacin de protenas con estructuras
anormales.
Enfermedad de Alzheimer (amyloid, tau)
Enfermedad de Huntington (Huntingtin)
Tau aggregates
(Azheimers disease)

Enfermedad de Parkinson (-synuclein)

Enfermedad de ALS Lou Gerhigs (SOD)
Enfermedad de la espina-Bulbar y atrofia
muscular (receptores de andrgenos). Enfermedad por
Lezama
Priones MadH. Cow
disease (prion)

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Lewy Bodies
(Parkinsons Disease)

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ROL FISIOLGICO DE LA DEGRADACIN

INTRACELULAR DE PROTENAS
Control de calidad
Procesamiento antignico
Regulacin en funciones celulares
Adaptacin a estadios fisiolgicos
o patolgicos
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EL MODELO UBIQUITIN-PROTEASOMA
PARA LA DEGRADACIN DE PROTENAS
TIENE DOS FASES.
Proteina
ATP
ADP

Modificacin del substrato

por ubiquitin

Ub
ATP
ADP

Pptidos
y
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amino cidos

H. Lezama

Degradacin del substrato

Por el proteasoma
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UBIQUITINA
76 amino acids

Carboxyl terminus

Gly-C-OH
(glycine 76)

Mr = 8,000
Altamente conservada

Ampliamente distribuida

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(glycine 76)

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Protenas Ubiquitinadas son degradadas

Por el proteasoma.

Proteolisis

ATP

ADP

Peptides and
amino acids

Not degraded
Proteasome
Reconoce la cadena
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Poliubiquitin y no la proteina

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Monoubiquitin

LA ESPECIFICIDAD PARA UBIQUITINACION SE LLEVA A

CABO CON MLTIPLES ENZIMAS DE CONJUGACIN.
degron
E3(n)

E3(n)

Ubiquitin
=

O
-C-OH

E1

E2(n)

E1

E2(n)

ATP

E2(n)

G76

PREMIO NOBEL 2004

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ESTRUCTURA DE UN
PROTEOSOMA

a) Imagen de microscopa
electrnica del
proteosoma 26 S de
levadura S. cerevisae
b) Representacin
esquemtica de la
estructura y funcin del
proteosoma 26 S
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MUERTE CELULAR
APOPTOSIS

AUTOFAGIA
CORNIFICACIN

NECROSIS
MODALIDADES ATPICAS (EN ESTUDIO):
CATSTROFE MITTICA (MUERTE CELULAR
PRECEDIDA POR MULTINUCLEACIN O
MUERTE CELULAR DURANTE METAFASE)
ANOIKIS
EXCITOTOXICIDAD
DEGENERACIN WALLERIANA
PARAOPTOSIS
PIROPTOSIS
PIRONECROSIS
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ENTOSIS

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MUERTE CELULAR

21

Hotchkiss R et all. Cell death. N Engl J Med 2009; 361: 1570-83

APOPTOSIS

PRIMERA DENOMINACIN: NECROSIS POR

CONTRACCIN (SHRINKAGE NECROSIS).
1972 KER LA DENOMIN APOPTOSIS.
CAER O MORIR COMO CAEN LOS
PTALOS O LAS HOJAS EN OTOO
(GRIEGO).
OCURRE DURANTE TODA LA VIDA.
FUNDAMENTAL EN LA HOMEOSTASIS.
DE CRUCIAL IMPORTANCIA DURANTE EL
DESARROLLO.
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22

APOPTOSIS
H. ROBERT HORVITZ (1986) INVESTIGO EL MODELO GENTICO
IMPLICADO EN LA MUERTE CELULAR PROGRAMADA.
USANDO UN SISTEMA MODELO CONOCIDO Y CARACTERIZADO,
EL NEMATODO CAENORHABDITIS ELEGANS.

LA APOPTOSIS, A DIFERENCIA DE LA NECROSIS, CONSUME ATP,

CUYA ENERGA ES UTILIZADA PARA LA ACTIVACIN DE UNAS
ENZIMAS LLAMADOS
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CASPASAS, CUYA ACTIVACIN

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EN CASCADA PRODUCEN LOS EFECTOS QUE PODEMOS VER EN

LA CLULA.

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24

Mechanisms of caspase activation

a. Proteolytic cleavage e.g.
pro-caspase 3

b. Induced proximity, e.g.

pro-caspase 8

c. Oligomerization, e.g. cyt c,

Apaf-1 & caspase 9
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25

Back

APOPTOSIS
NO INDUCE RESPUESTA INFLAMATORIA.
CAMBIOS MORFOLGICOS:
PRDIDA DE ADHESIN CELULAR
CONTRACCIN CELULAR POR PRDIDA DE
AGUA Y Na+
CONDENSACIN DE CROMATINA A NIVEL
NUCLEAR (ESTRUCTURAS EN MEDIA LUNA)
NCLEO
SE
FRAGMENTOS

ROMPE

EN

MLTIPLES

FRAGMENTACIN DEL DNA (PIEZAS DE

180-200 PB)
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APOPTOSIS
CAMBIOS MORFOLGICOS:
SE MANTIENE INTEGRIDAD DE LA MEMBRANA
PLASMTICA
FORMACIN DE CUERPOS APOPTTICOS QUE
SON
RPIDAMENTE
RECONOCIDOS
Y
FAGOCITADOS POR MACRFAGOS O POR
CLULAS VECINAS SIN PRDIDA DE SU
CONTENIDO.
MORFOLGICA:
ENCOGIMIENTO
NUCLEAR
Y
CELULAR,
CONDENSACIN DE CROMATINA (PICNOSIS), FORMACIN DE
YEMAS,
FRAGMENTACIN
NUCLEAR
(CARIORREXIS)
Y
FORMACIN DE CUERPOS APOPTTICOS.
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II PERMEABILIZACIN
H. Lezama
27
BIOQUMICA:
DE
LA
MEMBRANA
MITOCONDRIAL (PMM) Y/O ACTIVACIN MASIVA DE LA
CASPASAS.

PROCESOS EN LOS QUE INTERVIENE

LA APOPTOSIS
1.- En toda etapa del desarrollo o
reparacin tisular en donde se
produzcan clulas en exceso.
2.- Eliminacin de linfocitos.
3.- Eliminacin de clulas infectadas
y tumorales
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28

ETAPAS DE LA APOPTOSIS:
1.- Activacin (induccin negativa/positiva)
*Receptores
a.- de muerte (Fas, TNF)
b.- normales (glutamato)
*Rutas de transduccin celular (mensajeros: Ca 2+,
radicales libres, protenas codificadas por genes
supresores)
2.- Decisin (mitocondria)
3.- Ejecucin (degradacin de protenas y cidos nucleicos)
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Caspasas

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VAS QUE CONDUCEN A LA APOPTOSIS

VA INTRNSECA (MITOCONDRIAL)
VA EXTRNSECA (RECEPTOR DE MUERTE)

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30

VAS QUE CONDUCEN A LA

APOPTOSIS
VA INTRNSECA (MITOCONDRIAL)
CONTROLADA POR LA INTERACCIN DE PROTENAS
PRO-APOPTTICAS Y ANTI-APOPTTICAS DE LA
FAMILIA BCL2.
REGULADA POR LA CASPASA 9 (DAO CELULAR
ABRUMADOR).
INICIADORES DE LA VA:
INCREMENTO INTRACELULAR DE ROS
DNA DAADO
RESPUESTA DE PROTENAS NO PLEGADAS
DEPRIVACIN DE FACTORES DE CRECIMIENTO
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FAMILIA DE PROTENAS BCL2

ANTIPROAPOPTTICO
APOPTTICO
BCL2

BAX

BCL-XL

BAK

BCLW

BIM

MCL1

BID

A1

PUMA

BOO/DIVA
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VAS QUE CONDUCEN A LA APOPTOSIS

VA EXTRNSECA (RECEPTOR MUERTE):

INICIA CUANDO MIEMBROS DE LA SUPERFAMILIA

TNF SE UNEN A RECEPTORES MUERTE DE LA
SUPERFICIE CELULAR.
RECEPTORES DE MEMBRANA DE SUPERFAMILIA
DE RECEPTORES TNF (CD95, DR3 Y DR4),
INDUCEN EL RECLUTAMIENTO PROXIMAL DEL
COMPLEJO ACTIVADOR DE CASPASA.
SE ACTIVA LA CASPASA-8.
CASPASA 8 Y CASPASA 9 ACTIVADAS MOVILIZAN A
SU VEZ A LAS CASPASAS 3, 6 Y 7, PROTEASAS
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33
QUE
INICIAN LA DEMOLICIN
DE LA CLULA
A
TRAVS DE LA DEGRADACIN DE NUMEROSAS

VAS DE LA
APOPTOSIS

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Apoptosis signal to kill infected cells

Cytolytic lymphocyte/CTL (& natural killer lymphocyte) presents
Fas ligand/CD178 on its surface to tell the infected cell to die

Fas ligand

CT
L

Virally
infected
cell

Externally driven

Apoptotic signals
Cytochrome c

Initiator caspases
The immunological synapse
holds the cells much tighter
together than shown here
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Fas/ CD95 is the

death receptor

Execution caspases
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35

Apoptosis events

NECROSIS
CUANDO LAS CLULAS SUFREN DAOS TALES COMO
QUEMADURAS, ACCIDENTES, RADIACIONES, TRAUMAS,
INFECCIONES, ETC. SE PRODUCE NECROSIS.
NECROSIS
LA MUERTE NO OCURRE DE FORMA ORDENADA, DE
MANERA GENERAL EL NCLEO NO PRESENTA CAMBIOS
APARENTES, LAS MITOCONDRIAS APARECEN
DAADAS, EL AGUA Y IONES FLUYEN HACIA EL
CITOPLASMA Y LA CLULA SE HINCHA, CON LO QUE
TERMINA POR ROMPERSE LIBERANDO EL CONTENIDO
CELULAR QUEDANDO EN EL MEDIO PROTEASAS Y
SEALES QUE ATRAEN CLULAS DEL SISTEMA
INMUNITARIO,
POR LOH. Lezama
QUE TIENE LUGAR UNA
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36
REACCIN INFLAMATORIA EN LA ZONA.

NECROSIS

CARACTERSTICAS MORFOLGICAS:
EDEMA NUCLEAR Y MITOCONDRIAL.
FORMACIN DE PROLONGACIONES EN
LA SUPERFICIE CELULAR.
DESAGREGACIN DE RIBOSOMAS.

Caractersticas morfolgicas (si persiste la

noxa):
Se acentan ms los cambios.
Burbujeo extremo en la superficie
celular.
Gran dilatacin mitocondrial.
Ruptura de la membrana.
Disolucin de las organelas y ncleo.

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NECROSIS
CADAVER

(GRIEGO).
RESPUESTA A UNA
NOXA.
EL ESTMULO DE LA
MUERTE ES LA CAUSA
DIRECTA DE LA
DEFUNCIN CELULAR.
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38

NECROSIS

MUERTE CELULAR POR

AGRESIN EXTERNA
(FSICA, QUMICA O
BIOLGICA).
GRAN RESPUESTA
INFLAMATORIA EN EL
LUGAR DE LA INJURIA.
CAMBIOS
GENERALMENTE
DESDE PARTE
EXTERNA HACIA LA
INTERNA.

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39

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40

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41

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AUTOFAGIA
COMERSE UNO MISMO (GRIEGO).
PROCESO POR EL CUAL LA CLULA RECICLA
SUS PROPIAS ORGANELAS Y COMPONENTES
MACROMOLECULARES NO ESENCIALES,
REDUNDANTES O DAADOS.
RESPUESTA ADAPTATIVA AL STRESS SUB-LETAL.
PARTICIPA EN:
SUPRESIN DEL CRECIMIENTO DEL TUMOR.
SUPRESIN DE PROTENAS TXICAS MAL PLEGADAS.
ELIMINACIN DE MICROORGANISMOS
INTRACELULARES.
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PRESENTACIN DE ANTGENOS.

 A LO LARGO DEL DESARROLLO CUALQUIER

ORGANISMO NECESITA LA DESHACERSE DE
CIERTAS ESTRUCTURAS Y CREAR OTRAS
DURANTE UN PROCESO DE METAMORFOSIS.

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AUTOFAGIA
TRES FORMAS:

1.MACROAUTOFAGIA
2.MICROAUTOFAGIA
3.AUTOFAGIA MEDIADA POR
CHAPERONAS

REGULA FORMACIN DE
AUTOFAGOSOMA:

FOSFATIDILINOSITOL 3 KINASA
(PI3K)
BECLIN-1 (BECN1)
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MTOR (SIROLIMUS)

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45

ASPECTOS FISIOLGICOS Y
MOLECULARES
ESTADIOS:

1.VESCULAS NUCLEARES
2.ELONGACIN VESICULAR
3.FUSIN DE UNA DOBLE
MEMBRANA (AUTOFAGOSOMA/LISOSOMA)
FORMACIN DEL AUTOLYSOSOMA.
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