Leyes de

espectofotometria y
curvas de calibracion
Valentina Gonzalez Moya
Jimmy Orjuela
Alejandra Tuta Casas

INTRODUCCION TEORICA FUNDAMENTOS

DE ESPECTROFOTOMETRA

La espectrofotometra es uno de los mtodos de anlisis ms usados, y se

basa en la relacin que existe entre la absorcin de luz por parte de un
compuesto y su concentracin.

Cuando se hace incidir luz monocromtica (de una sola longitud de onda)
sobre un medio homogneo, una parte de la luz incidente es absorbida por el
medio y otra transmitida.

Dependiendo del compuesto y el tipo de absorcin a medir, la muestra puede

estar en fase lquida, slida o gaseosa. En las regiones visibles y ultravioleta
del espectro electromagntico, la muestra es generalmente disuelta para
formar una solucin.

Cada sustancia tiene su propio espectro de absorcin, el cual es una curva

que muestra la cantidad de energa radiante absorbida, Absorbancia, por la
sustancia en cada longitud de onda del espectro electromagntico, es decir, a
una determinada longitud de onda de la energa radiante, cada sustancia
absorbe una cantidad de radiacin que es distinta a la que absorbe otro
compuesto.

LEY DE LAMBERT

Esta ley establece que cuando pasa luz monocromtica por un medio
homogneo, la disminucin de la intensidad del haz de luz incidente es
proporcional al espesor del medio, lo que equivale a decir que la intensidad
de la luz transmitida diminuye exponencialmente al aumentar
aritmticamente el espesor del medio absorbente.

La siguiente relacin matemtica da cuenta de esta ley: P / P0 = e^ kb

LEY DE BEER

La intensidad de un haz de luz monocromtica disminuye exponencialmente

al aumentar aritmticamente la concentracin de la sustancia absorbente,
cuando este haz pasa a travs de un medio homogneo

La relacin matemtica que da cuenta de esta ley se muestra a continuacin :

P / P0 = e^ -kc

LEY DE LAMBERT-BEER

Ambas leyes se combinan en una sola, generando la Ley de Lambert-Beer.

log P0 / P = a b c

a : Absortividad
b : Longitud o espesor del medio (longitud de la cubeta)
c : Concentracin de la solucin
P/Po= T : Transmitancia

A= a b c

A = log P0 / P = - log T

TRANSMITANCIA

Es la razn entre la luz monocromtica transmitida (P) por una muestra y la

energa o luz incidente (Po) sobre ella. Tanto la energa radiante incidente
como la transmitida deben ser medidas a la misma longitud de onda.

T = P / P0 = 10-abc

%T = 100 P / P0

ABSORBANCIA

Se define como la cantidad de energa radiante absorbida por una sustancia

pura o en solucin. Matemticamente, corresponde al logaritmo negativo de
la transmitancia.T, transmitancia expresada como fraccin decimal %T,
transmitancia expresada como porcentaje.

A = - log T = 2 log %T
Pero. T = P / P0 = 10-abc
Luego A = - log ( P / P0 ) = - log 10-abc A = a b c

MEDICIONES DE TRANSMITANCIA Y
ABSORBANCIA

Las mediciones de absorbancia o transmitancia se hacen por comparacin

entre la muestra problema y un estndar arbitrario o referencia. Como la
referencia debe poseer un porcentaje de transmitancia de 100%, esta es
llamada referencia de 100%., o una absorbancia de cero

SELECCION DE LONGITUD DE ONDA DE

TRABAJO

La longitud de onda de trabajo corresponde, generalmente, a la longitud de

onda en la cual la absorbancia del analito (sustancia a analizar) es mxima, y
recibe la denominacin de Lambda mximo (max). Para seleccionar el
max., se hace un espectro de absorcin o curva espectral, y que consiste en
una grfica de la absorbancia de una solucin de la sustancia absorbente de
concentracin adecuada, medida a distintas longitudes de onda y en ella se
determina el max.

TIPOS DE ESPECTOFOTOMETRIA

ESPECTROMETRA DE ABSORCIN

ESPECTROMETRA DE FLUORESCENCIA

ESPECTROMETRIA DE RAYOS X

ESPECTROMETRA DE LLAMA

ESPECTROMETRA INFRARROJA

ESPECTROMETRA DE CHISPA O ARCO

ESPECTROMETRA ULTRAVIOLETA

APLICACIONES ESPECTOFOTOMETRIA

Determinar la cantidad de concentracin en una solucin de algn compuesto

utilizando las frmulas ya mencionadas.

Ayudar en la determinacin de estructuras moleculares;

La identificacin de unidades estructurales especficas, ya que estas tienen

distintos tipos de absorbancia (grupos funcionales o isomeras);

Determinar constantes de disociacin de indicadores cido-base

Determinacin analtica de metales y no metales.

Determinacin de las constantes de formacin de metal-ligando.

Determinacin de la estabilidad cintica de los complejos.

CURVA DE CALIBRACION

Uno de los mtodos ms utilizados para determinar la concentracin de una

muestra problema, es el mtodo de la curva de calibracin. Esta curva de
calibracin es una grfica que relaciona la concentracin de al menos cinco
soluciones de estndar de concentraciones conocidas, con la absorbancia de
cada uno de ellos a la longitud de onda mxima ( max).