Universidad Autnoma Gabriel Ren Moreno

FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y TECNOLOGIA

CARRERA: INGENIERIA QUMICA

BIOINGENIERIA
PRQ-300
ELECTIVA I

INTEGRANTES:
HATANAkA FERNANDEZ CAROLINA
MOLINA ROCHA CARLA JIMENA
SOTO ORTEGA MIGUEL ANGEL
SANTA CRUZ - BOLIVIA

BIOTECNOLOGIA

GENERALIDADES
DE LOS
PROCESOS
BIOTECNOLOGICOS

AMBIENTAL

Biorremediacin
Control de la polucinMonitoreo ambiental

AGROPECUARIO

MEDICINA

Diagnstico
APLICACIONES UTILES

Rendimiento de cosechasCalidad de
Salud animal

alimentos
Biosensores

Bioprocesos

Vacunas

Teraputica
Cultivo de clulas y tejidos
Ingeniera gentica

HERRAMIENTAS BIOTECNOLOGICAS

Antisentido

Anticuerpos monoclonales

Ingeniera de protenas

Bioqumica
Ingeniera Bioqumica

Biologa Celular

Inmunologa
CONOCIMIENTO CIENTIFICO
Computacin
Microbiologa
Gentica
Biologa Molecular
Fisiologa

Nos encontramos frente a una nueva

Revolucin Industrial llamada
Biotecnologa, no basada en hierro y acero
sino en microbios que, en manos de
cientficos, se convierten en minsculas
fbricas para producir frmacos,
compuestos qumicos industriales,
combustibles o alimentos.

El prefijo BIO se refiere a bacterias,

levaduras y otras clulas vivas, as como a
componentes de estas clulas.
La TECNOLOGIA consiste en
relucientes depsitos de acero, llenos de
microbios, conectados a sus fuentes de
alimentacin y oxgeno mediante una
intrincada red de vlvulas que se cierran y
abren segn los ritmos que marca una
computadora.

DEFINICION
Segn la Organizacin de Cooperacin y
Desarrollo Econmicos:
Es la aplicacin de los principios cientficos y
de la ingeniera al procesamiento de materiales
por agentes biolgicos para proveer bienes y
servicios.

 PRINCIPIOS CIENTIFICOS Y DE
LA INGENIERIA:
Conjunto muy amplio de disciplinas
que ponen especial nfasis en la
Microbiologa, Bioqumica, Biologa
Molecular, Gentica, Inmunologa e
Ingeniera Bioqumica y Qumica.

 MATERIALES:
Incluye a aquellos orgnicos e
inorgnicos, en tanto los agentes
biolgicos son, en general,
catalizadores biolgicos; en
particular, microorganismos, clulas
animales, clulas vegetales, virus y
enzimas.

ESQUEMA DEL PROCESO

BIOTECNOLOGICO O BIOPROCESO
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MATERIAS PRIMAS
Celulsi cas
Almidn
Azucares
Acei tes
Biomasa
agrcola
Biomasa
forestal
pulpas

BIOPROCES
O
AGENTES
AGENTES DE
DE
BIOCONVERSION
BIOCONVERSION
Clulas
Clulas microbianas
microbianas
Clulas
Clulas vegetales
vegetales
Clulas
Clulas animales
animales
Clulas
Clulas DNA
DNA
M.O
psicrofilos
M.O psicrofilos
M.O
M.O termfilos
termfilos
M.O
M.O halfilos
halfilos

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PRODUCTOS
Alcoholes
Metano
cidos grasos
Enzimas
Biopolimeros
Anticuerpos monoclonales

 BIENES:
Todos los productos (alimentos, productos
farmacuticos, recuperacin de metales, etc.)
SERVICIOS:
Lo relacionado especficamente con las
prestaciones tales como purificacin de agua o
tratamiento de efluentes y extraccin de
derrames de petrleo.

AREAS TEMATICAS PRIORITARIAS

SALUD:
Vacunas (desarrollo de vacunas por
procedimientos que utilicen ingeniera
gentica).
Reactivos de diagnstico: Desarrollo de
reactivos por tcnicas inmunolgicas
(enzimo-inmunoensayos o por ingeniera
gentica).

 AREA AGRICOLA:
Diagnstico de fitopatgenos en plantas de inters econmico.
Desarrollo de agentes de control biolgico y plantas.
Desarrollo de plantas transgnicas resistentes a las plagas,
enfermedades y herbicidas. Modificacin del contenido celular en
macromolculas.
Mtodos de mejoramiento de especies a travs de tcnicas no
convencionales.
Aceleracin en la obtencin de hbridos.
Utilizacin de marcadores moleculares.
Identificacin y caracterizacin de genes de inters.

 AREA PECUARIA:
SANIDAD ANIMAL:
Desarrollo de mtodos para el diagnstico de
enfermedades animales.
Produccin de nuevas vacunas virales, bacterianas y
parasitarias por tcnicas de avanzada.

PRODUCCION ANIMAL:
Manipulacin y sexado de embriones.
Hormonas para el mejoramiento de la
produccin animal.

 PRODUCCION DE INSUMOS
INDUSTRIALES:
Mejoramiento y control de calidad de las
industrias de alimentos, incluyendo
derivados lcteos, vinos y cervezas.
Tratamiento biolgico de efluentes.

HISTORIA DE LA
BIOTECNOLOGIA

 6000 AC: Arte de fermentar. Los 4000 AC: Los egipcios

descubrieron la manera de
sumerios y babilonios usaban
fermentar pan con la levadura
levaduras para fabricar cerveza.
cervecera.

EPOCAS
Siglo XVII: Anthony von
Siglo XIV DC: Destilacin de
Leeuwenhoek (1632-1723)
bebidas alcohlicas. Uso de
descubre el mundo microbiano
bacterias de cido actico para
con sus microscopios primitivos. fabricar vinagre, de bacterias de
cido lctico para conservar la
leche (yogur, por ejemplo).

 Siglo XIX: El desarrollo tcnico de los

microscopios permite demostrar el origen de los
microbios y vencer la creencia de la generacin
espontnea.

Hablando de generacin espontnea,

veamos algunas recetas interesantes

 Ambroise Par (1517-1590), el ms clebre

cirujano de su siglo
Van Helmont (1577-1644), el ms grande fisilogo de la
poca
Francesco Redi (1626-1697): Mdico italiano
que demostr que los gusanos de la carne son
larvas de mosca y que no aparecen si la carne se
guarda bien tapada (fiambrera).
Lzaro Spallanzani (1729-1799): Naturalista
italiano, demostr que los microbios son
transportados por el aire; los mismos no invaden
los frascos cerrados hermticamente.

Nicolas-Francois Appert (1750-1841):

Desarrolla los primeros procedimientos de
enlatado.
Louis Pasteur (1822-1895): Fue quien sent
las bases de la futura industria biotecnolgica al
demostrar que todos los procesos de
fermentacin eran el resultado de la actividad
microbiana.
Edward Buchner (1860-1917): Descubre,
dentro de las clulas microbianas, las sustancias
vitales responsables de todas las
transformaciones qumicas: las enzimas.

Hasta la primera guerra mundial, apenas

progres la idea de utilizar bacterias y
levaduras para fabricar otra cosa que no fuera
alcohol.
Sin embargo, las restricciones impuestas
durante el conflicto anunciaron lo que puede
llamarse como segunda era biotecnolgica.

SEGUNDA ERA BIOTECNOLOGICA

La Guerra Mundial (1914-1918) supuso demandas

biotecnolgicas:
Proceso Neuberg para producir glicerol (para
nitroglicerina) mediante la fermentacin dirigida
de Saccharomyces cerevisiae. Agregando lcali y
bisulfito de sodio al depsito de fermentacin
alcohlica se fomentaba la produccin de glicerol.
Proceso Weizmann, usando Clostridium
acetobutylicum, para la produccin de disolventes
como la acetona (fabricacin de cordita).

 Los descubrimientos de Pasteur, Robert Koch

(1843-1910) y Alexander Fleming (1928)
revolucionaron el tratamiento de las
enfermedades infecciosas con el descubrimiento
de los antibiticos.
TERCERA ERA BIOTECNOLOGICA
Durante la Segunda Guerra Mundial comienza la
tercera era biotecnolgica, por la necesidad de
contar con ciertos medicamentos para que las
vctimas no murieran de sepsis bacteriana.

CUARTA ERA BOTECNOLOGICA

Puede decirse que la cuarta era biotecnolgica

comienza a principios de la dcada de 1970, con
el advenimiento de la Ingeniera Gentica.
El descubrimiento de los sistemas de
restriccin y modificacin en bacterias y la
aplicacin de las endonucleasas.
Los trabajos de Milstein y Kohler sobre la
formacin de hibridomas con la posterior
utilizacin para la produccin de anticuerpos
monoclonales (1975).

Un hito que merece resaltarse ocurri en

1982 cuando la compaa Eli Lilly consigui
la aprobacin de la Food and Drug
Administration de los Estados Unidos de
Norteamrica para la utilizacin de insulina
humana clonada y producida en
Escherichia coli. A esto siguieron los
interferones, hormonas de crecimiento
humana y bovina, el antgeno de superficie
del virus de la hepatitis B, etc.

LOS MICROORGANISMOS

MICROORGANISMOS

HONGOS
LEVADURAS

BACTERIAS

originalmente como pertenecientes a

los reinos animal o vegetal.

Caractersticas de las levaduras:

Son microorganismos unicelulares ampliamente distribuido en
la naturaleza (frutos, hojas, suelos, etc.. ) y finalmente
transportable por el aire.
Crecen profundamente en medios lquidos que contienen
azcares y suelen agruparse en cadenas que se rompen al
agitar el medio.
Sus clulas pueden ser esfricas, ovoides, elipsoides o
alargadas.
Se reproducen por brotacin, por fisin o por esporas.
La "zimasa" de las levaduras es un complejo enzimtico de
origen intracelular, capaz de actuar fuera de la clula viva
Las levaduras son raramente patgenas y ampliamente
empleadas por el hombre en fermentaciones.

Caractersticas de los Hongos:

No poseen clorofila.
Estn ampliamente difundidos en la
naturaleza, especialmente sobre el suelo.
Intervienen en el despoblamiento de la
materia orgnica en el suelo.
Son tiles para el hombre para la
produccin de antibiticos, de enzimas.

Caractersticas de las bacterias :

Son microorganismos unicelulares, de forma diferente y
hbitat variable.
Algunas son capaces de formarse una envoltura o
cpsula.
Todas se multiplican por divisin.
Algunas bacterias son capaces de formar endoporos
mas resistentes a las formas adversas de vida.
El oxigeno es indispensable para las bacterias
aerbicas y resulta nocivo para las anaerbicas que lo
toman de compuestos oxigenados.
Las bacterias son capaces de generar mutantes.
Las bacterias dan origen a la enfermedad llamadas
esquitomiasis, se caracteriza por abscesos y
hemorragias.

Biorreactores

Biorreactor

Un biorreactor es un recipiente o sistema que mantiene un ambiente

biolgicamente activo. En algunos casos, un biorreactor es un recipiente
en el que se lleva a cabo un proceso qumico que involucra organismos
o sustancias bioqumicamente activas derivadas de dichos organismos.
Este proceso puede ser aerbico o anaerbico. Estos biorreactores son
comnmente cilndricos, variando en tamao desde algunos mililitros
hasta metros cbicos y son usualmente fabricados en acero inoxidable.

Un biorreactor puede ser tambin un dispositivo o sistema empleado

para hacer crecer clulas o tejidos en operaciones de cultivo celular.
Estos dispositivos se encuentran en desarrollo para su uso en ingeniera
de tejidos.

En trminos generales, un biorreactor busca mantener ciertas

condiciones ambientales propicias (pH, temperatura, concentracin de
oxgeno, etctera) al organismo o sustancia qumica que se cultiva.

BIORREACTORES

Los criterios bsicos de diseo de un birreactor son:

Caractersticas bioqumicas del cultivo a realizar.

Caractersticas hidrodinmicas del reactor.
Cintica de crecimiento y produccin del microorganismo.
Asegurar la estabilidad gentica del mo, impidiendo mutaciones.
Esterilizacin lo ms barata posible.
Diseo y modo de operacin.
Potencial para el escalado creciente de produccin.
Inclusin de sistemas de oxigenacin.
Sistemas de control para determinar las condiciones internas.
Adopcin de refrigeradores, para mantener constante la temperatura.
Materiales no txicos (ni para el mo ni para el consumo)
Capacidad para soportar altas presiones.
Resistencia a la corrosin.

Modos de operacin de un
biorreactor

Discontinuo: se trata de sistemas cerrados en los

que no se varan externamente las condiciones
iniciales.

Semicontinuo: el sustrato se aporta de forma

secuencial.

Continuo: se retiran sustrato y productos agotado

al mismo tiempo que se aporta la misma cantidad
de sustrato fresco.

Tipos de biorreactores

De lecho fijo o empaquetado: los mo se encuentran en una matriz empaquetada,

generalmente la alimentacin se produce en forma vertical.

En columna de burbujas: el sustrato es el medio lquido en el que estn inmersas las

clulas, aportndose se por la parte inferior del reactor.

De lecho fluidizado: el mo permanece suspendido, como consecuencia del sustrato

lquido ascendente.

De lecho de goteo: el sustrato se hace pasar lentamente por la matriz empaquetada

que contiene al mo.

De enzimas o clulas inmovilizadas: son los ms interesantes y novedosos. Los de

enzimas presentan grandes ventajas, pero es difcil aislar la enzima que nos interesa.
Permiten reutilizar continuamente el biocatalizador, disminuyendo los costos. Dicha
inmovilizacin puede efectuarse por medios fsicos (adsorcin) y qumicos (enlaces
covalentes). El inconveniente es que aumenta la inestabilidad gentica de las clulas.

Catalizadores

Catalizadores

Los catalizadores son compuestos qumicos de distinta naturaleza, que

facilitan, desaceleran y aceleran las reacciones qumicas, porque
disminuyen la cantidad de energa de activacin que se necesita para
que estas ocurran.

Los catalizadores no se consumen en la reaccin que catalizan, actan

nicamente mediante su presencia. Por ello cuando termina la reaccin
quedan libres y pueden volver a utilizarse de nuevo, por lo que se
necesitan en pequeas cantidades.

En el mundo natural hay catalizadores biolgicos o biocatalizadores,

lo ms importantes son las enzimas de naturaleza proteica, tambin
existen los cidos ribonucleicos denominados ribozomas.

Tipos de catalizadores

HOMOGNEOS: Cuando los catalizadores estn en la

misma fase que los reactivos.

HETEROGNEOS O DE CONTACTO: Cuando los

catalizadores estn en distintas fases que los reactivos

Biocatalizador
Es uncatalizadorde las reaccionesbioqumicasde los seres vivos.

Se consideran biocatalizadores las enzimas, lashormonasy

lasvitaminas.

Un biocatalizador reduce o aumenta laenerga de activacinde

unareaccin qumica, haciendo que sta sea ms rpida o ms
lenta.

Cada reaccin qumica en unser vivo, ya sea

unicelularomulticelular, requiere la presencia de uno o ms
biocatalizadores (enzimas), pues si no existieran stas ocurriran
en desorden total.

Enzimas

Una enzima es un catalizador orgnico de naturaleza

proteica que modifica la velocidad de una reaccin
qumica y que permanece inalterable al terminar la
reaccin, stas son producidas nicamente por clulas
vivas.

Ejemplo

La funcin que cumplen las enzimas es la de eliminar

las manchas en la ropa y por supuesto optimizar la
eficiencia de los detergentes y tambin cuidan el
medio ambiente porque se reduce la emisin de CO2.

Caractersticas de las enzimas

1 Son eficaces en pequeas cantidades: El nmero de

recambio o actividad molar, se define como la cantidad de
substrato transformado en la unidad de tiempo por una
cantidad dada de enzima.

2 No se alteran durante las reacciones en que participan.

3 Aceleran el proceso para la obtencin del equilibrio de

una reaccin reversible.

4 Muestran especificidad: La accin de la enzima es

extremadamente selectiva sobre un substrato especfico.

La caracterstica ms sobresaliente de los

enzimas es su elevada especificidad. Esta es
doble y explica que no se formen subproductos:

Especificidad de sustrato: El sustrato (S) es

la molcula sobre la que el enzima ejerce su
accin cataltica.

Especificidad de accin: Cada reaccin est

catalizada por un enzima especfico.

Clasificacin de las enzimas de

acuerdo a su complejidad
De acuerdo a su complejidad las enzimas se clasifican como:
En las protenas conjugadas podemos distinguir dos partes:

Apoenzima: Es la parte polipeptdica de la enzima.

Cofactor: Es la parte no proteica de la enzima.

La combinacin de la apoenzima y el cofactor forman la haloenzima.

Los cofactores pueden ser:

Iones metlicos: Favorecen la actividad cataltica general de la enzima, si no

estn presentes, la enzima no acta. Estos iones metlicos se denominan
activadores. Ejemplos: Fe2+, Mg2+, Cu2+, K+, Na+ y Zn2+

CLASIFICACIN DE LAS ENZIMAS

SEGN SU ACTIVIDAD

APLICACIONES DE LAS ENZIMAS

Algunas aplicaciones de las enzimas :

Adelgazamiento de almidones.
Tratamiento de desechos.
Maduracin de frutas.
Envejecimiento deseable de algunos productos
crnicos .
Curar algunas variedades de queso.
Prevenir turbiedad en la cerveza.
Texturizacin de dulces y postres.
Tratamiento de heridas .
Aplicaciones textiles

Cintica enzimtica

Lacintica enzimticaestudia lavelocidadde

lasreacciones qumicasque soncatalizadaspor
lasenzimas. El estudio de lacinticay de
ladinmica qumicade una enzima permite
explicar los detalles de su mecanismo cataltico, su
papel en elmetabolismo, cmo es controlada su
actividad en laclulay cmo puede ser inhibida su
actividad porfrmacosovenenospotenciados por
otro tipo demolculas.

EJEMPLO:
La reaccin de hidrolisis del p-nitrofenol fosfato es catalizada
por la enzima fosfatasa alcalina de E coli.
[s]10-5M

0.7

1.0

2.0

4.0

7.0

10.0

20.0

V(mol/L)/mi
n

0.43

0.56

0.83

1.09

1.27

1.35

1.49

Determinar la constante de Michaelis-Menten, la velocidad

mxima y el nmero de recambio sabiendo que la
concentracin inicial de enzima empleada fue de 0.036 g/ml y
su peso molecular es de 86000 g/mol
Datos
[E]= 0.036 g/ml
M = 86000 g/mol

UTILIZANDO LA REPRESENTACION DE LINEWAVER-BURK

tenemos :
Necesitamos graficar el reciproco de la velocidad mxima
versus el[s]10
reciproco
de
la concentracin
de 1.0
sustrato.
M
14.3
10.0
5.0
2.5
1.4
0.5
4

1/Vmax 10-1

23.3

17.9

12.0

9.2

7.9

De la regresin lineal tenemos:

M= B= Km =1.190*10-5
Vmax
B= A=

1
=0,615 ; Vmax= 1,626
Vmax

7.4

6.7

Km = 1,953*10-5

Para el clculo del nmero de recambio consideremos que:

Vmax= K3[E]
K 3= Vmax = 1,626 mol/Lmin*10-6mol/mol
[E]
0,036g/ml*g/106* 1000ml/1L *1mol/86000g
= 1,626*10-6 min-1 0,036
86
K 3= 3884,3 = 64,7 s-1
Respuesta:
La constante de Michaelis-Menten es de 1,953*10-5, la
velocidad mxima para esta reaccin es de 1,626, el
nmero de recambio o constante de velocidad K 3 es de

INHIBICIN
Existe una serie de sustancia,
llamadas inhibidores, que inhiben o
anulan la accin de las enzimas sin
ser transformadas por ellos.
Los inhibidores enzimticos son molculas que
se unen a enzimas y disminuyen su actividad. Ya
que el bloqueo de una enzima puede matar un
organismo patgeno o corregir un desequilibrio
metablico, muchos medicamentos actan como
inhibidores enzimticos. Tambin son usados
como herbicidas y pesticidas. Sin embargo, no
todas las molculas que se unen a las enzimas
son inhibidoras; los activadores enzimticos se
unen a las enzimas e incrementan su actividad.
La inhibicin enzimtica puede ser irreversible o
reversible, esta ltima comprende a su vez tres
tipos: inhibicin competitiva, acompetitiva y no
competitiva.

INHIBICIN IRREVERSIBLE
Algunos inhibidores se combinan de modo permanente con la enzima unindose covalentemente
a algn grupo funcional esencial para la catlisis con lo que el enzima queda inactivada
irreversiblemente. El estudio de este tipo de inhibidores ha resultado de gran utilidad para
identificar los grupos funcionales esenciales para la catlisis en aquellas enzimas a los que
inactivan.

E+I
E

Este tipo de inhibicin se conoce tambin como

envenenamiento del enzima. Por ejemplo algunos
compuestos organofosforados txicos llamados venenos
nerviosos, que se utiliza como insecticida, actan
inhibiendo irreversiblemente al enzima
acetilcolinesterasa, la cual interviene en la actividad del
sistema nervioso. Se sabe que estos compuestos
organofosforados inactivan al enzima formando un
enlace ester fosfrico con el grupo hidroxilo de un
determinado reto de aminocido serina, lo que
demuestra que este grupo funcional es esencial para la
catlisis.

A diferencia de la inhibicin reversible, el efecto de los

inhibidores irreversibles depende del tiempo de actuacin del
inhibidor.
Los inhibidores irreversibles son, por lo general, altamente
txicos.

TIPO DE INHIBICIONES IRREVERSIBLES

Los inhibidores irreversibles usualmente modifican
una enzima covalentemente, y por lo tanto la
inhibicin no puede ser invertida. Los inhibidores
irreversibles comnmente contienen grupos
funcionales reactivos como mostazas nitrogenadas,
aldehdos, haloalcanos o alquenos. Estos grupos
electroflicos reaccionan con las cadenas de
aminocidos para formar uniones covalentes. Los
residuos modificados son esos que contienen en sus
cadenas laterales nuclefilos como por ejemplo un
grupo hidroxilo o un grupo sulfhidro; esto incluye a
La inhibicin
irreversible
los aminocidos serina (como
en DFP, a la
derecha), es diferente de la
inactivacin enzimtica irreversible. Los inhibidores
cisteina, treonina o tirosina.
irreversibles son generalmente especficos para un
tipo de enzima y no inactivan a todas las protenas;
estos no funcionan destruyendo la estructura
protenica, pero especficamente alterando el sitio
activo de su blanco. Por ejemplo, pH y temperaturas
extremas usualmente causan la desnaturalizacin de
todas las estructuras protenicas, pero este no es un
efecto especfico. Similarmente, algunos
tratamientos qumicos no especficos destruyen la
estructura de la protena: por ejemplo, poner una
concentracin alta de cido clorhdrico hidrolizar
los enlaces peptdicos que mantienen unida a las

INHIBICIN COMPETITIVA
lainhibicin competitiva, el sustrato y el
En
inhibidor no se pueden unir a la misma enzima
al
mismo
tiempo.
Esto
generalmente
ocurre cuando el inhibidor
tiene afinidad por elsitio activode una enzima
en el cual tambin se une el sustrato; el sustrato
y el inhibidor compitenpara el acceso al sitio
activo de la enzima. Por ejemplo, elmetotrexato
es un inhibidor competitivo de la enzima
dihidrofolato
reductasa,
que cataliza
la
La similitud entre
las estructuras
delcido
flicoy el metotrexato
reduccin
dese
dihidrofolato
a tetrahidrofolato.
permite
que
establezca una
inhibicin de tipo competitivo. Este tipo
de inhibicin se puede superar con concentraciones suficientemente
altas del sustrato, es decir, dejando fuera de competicin al inhibidor.
En la inhibicin competitiva la velocidad mxima de la reaccin no
vara, pero se necesitan concentraciones ms elevadas de sustrato
para alcanzar una determinada velocidad, incrementndose as el
Kmaparente.

El inhibidor se fija al centro activo de la enzima libre, impidiendo la

fijacin del substrato: Inhibicin Competitiva
Las fijaciones de substrato e inhibidor son mutuamente exclusivas; el
complejo EI no es productivo.

INHIBICIN ACOMPETITIVA

En lainhibicin acompetitivael inhibidor no

puede unirse a la enzima libre, sino nicamente
al complejo enzima-sustrato (ES).
INHIBICIN NO COMPETITIVA
Lainhibicin no competitivaes una forma de
inhibicin mixta donde la unin del inhibidor
con la enzima reduce suactividadpero no
afecta la unin con el sustrato.

El inhibidor se fija a la enzima

independientemente de que lo haga o no el
substrato; el inhibidor, por tanto, no impide la
fijacin del substrato a la enzima, pero s impide
la accin cataltica: Inhibicin No Competitiva
El inhibidor se fija indistintamente a la enzima
libre E y al complejo enzima-substrato ES; ni el
complejo EI ni el complejo ESI son productivos.

DESACTIVACIN

Factores que afectan la actividad enzimtica son:

Concentracin del sustrato.- A mayor concentracin del

sustrato, a una concentracin fija de la enzima se obtiene la
velocidad mxima. Despus de que se alcanza esta velocidad,
un aumento en la concentracin del sustrato no tiene efecto
en la velocidad de la reaccin.

Temperatura.- Un incremento de 10C duplica la velocidad de

reaccin, hasta ciertos lmites. El calor es un factor que
desnaturaliza las protenas por lo tanto si la temperatura se
eleva demasiada, la enzima pierde su actividad.

PH.- El Ph afecta ms a una enzima que la temperatura, Cuando

hay un Ph alto se desnaturaliza pero cuando el Ph es bajo
tambin se desnaturaliza. El pH ptimo de la actividad
enzimtica es 7, excepto las enzimas del estmago cuyo pH
ptimo es cido.
Presencia de cofactores.- Muchas enzimas dependen de los
cofactores, sean activadores o coenzimas para funcionar
adecuadamente. Para las enzimas que tienen cofactores, la
concentracin del cofactor debe ser igual o mayor que la
concentracin de la enzima para obtener una actividad cataltica
mxima.

Cintica Microbiana

Cintica Microbiana

CINTICA DE CRECIMIENTO
MICROBIANO

Fases del crecimiento.

1.-Fase de latencia o de induccin (lag):

Es la expresin de un perodo de adaptacin para

iniciar el crecimiento.
Su presencia y su extensin depende de:
Inculo

Estado fisiolgico
inocula

Condiciones fisicoqumicas del medio

Fase de crecimiento

Composicin del medio en el que se

Tipo de microorganismos

2.-Fase de aceleracin:
Parte de las clulas comienzan a
dividirse.
3.-Fase exponencial:
El cultivo esta en estado autocataltico
Es un perodo relativamente corto

Se caracteriza por ser una fase de crecimiento constante

(dX/dt) = X

X=
=

Biomasa microbiana

Constante especifica del crecimiento microbiano en hr-1.

t=

Tiempo en hrs. (t = td = tiempo de duplicacin)

Constante especifica de la velocidad de crecimiento microbiano.

La constante especfica de la velocidad de crecimiento microbiano () se

utiliza para caracterizar el comportamiento de una poblacin microbiana.
Su valor depende de las condiciones ambientales en que se encuentra el
microorganismo.
Existe una gran dependencia de la fuente de carbono y energa tanto en
calidad como en cantidad.

CINETICA DE FORMACION DE PRODUCTOS Y DEL

CONSUMO DE SUSTRATO
TIEMPO DE DUPLICACIN
Bacterias y levaduras
N = 2N0
td: intervalo de t para duplicar la poblacin
TIEMPO DE DUPLICACIN, SPECTOR 1956
BACTERIA
Bacillus mycoides
B. Thermophilus
E. Coli
M. Tuberculosis

Treponema pallidum

MEDIO
Caldo
Caldo
Caldo
Sinttico
Testculos de
conejo

T (C)
37
55
37
37

td (min)
28
18.3
17
792-932

37

1980

4.-Fase de desaceleracin:
Agotamiento de uno o ms nutrientes.
Acumulacin de bio-productos txicos para el crecimiento.
Crecimiento no balanceado: restructuracin de la clula para sobrevivir
en un ambiente hostil.

5.-Fase Estacionaria:
No existe un crecimiento neto de clulas:
agotamiento de un nutriente esencial o
acumulacin de compuestos txicos.(Ej: Etanol
Levadura)
Velocidad decrecimiento celular =velocidad de
muerte celular.
Metabolismo endgeno: el almacenamiento de
energa se utiliza para mantener la viabilidad
celular.
La remocin de compuestos inhibitorios puede
resultar en ms crecimiento si se adiciona
sustrato adicional.
6.-Fase de Decaimiento o Muerte:

CLASIFICACIN DEL MEDIO DE

CRECIMIENTO:

TEMPERATURA Y CRECIMIENTO.

Ea: Energa de activacin de crecimiento ~ 10-20 kcal/mol.

Ed: Energa de activacin de muerte ~ 60 a 80 kcal/mol.
Kd = velocidad especfica de muerte celular (1/h) .
T: kd > disminucin de clulas viables.
La muerte celular es ms sensible a los cambios de T
que el crecimiento celular.

PH Y CRECIMIENTO
El PH vara segn el
microorganismo ptimo para obtener una
PH

Bacterias
Levaduras
Hongos
Plantas
Animales

velocidad mxima

3-8
3-6
5-7
5-6
6.5-7.5

El microorganismo puede controlar el pH interno

Requiere energa para mantenimiento.
El pH puede cambiar:

Utilizacin de sustratos
NH4+ libera H+
NO3-consume H+
Produccin de cidos orgnicos,
aminocidos, CO2

GRUPO
Termfilos
Mesfilos
Sicrfilos
obligados
Facultativos

TEMPERATURA (C)
Mnimo
ptimo
Mximo
40-45
55-75
60-80
10-15
30-45
35-47
-5 5

15-18

19-22

-5 5

25-30

30-35

CRECIMIENTO CELULAR BATCH

FASE

DESCRIPCIN

Lag

Las clulas se adaptan a su nuevo

ambiente

~0

Aceleracin

El crecimiento comienza

< max

Exponencial
Decaimiento
Muerte

El crecimiento alcanza su mxima

velocidad
El crecimiento se desacelera
debido a escasez de nutrientes o
formacin de productos inhibitorios
Lisis celular

~ max
< max
<0

MEDIO DE CULTIVO

son medios de cultivos

Medios de cultivos:
artificiales preparados en
laboratorio con las materias
nutritivas y minerales ,pH y
humedad adecuada para
posibilitar el crecimiento de los
microorganismo en optimas
condiciones.
Las diferentes especie de
microorganismo tienen
requerimiento nutricional
particulares algunas especies
son exigentes otras no.

CLASIFICACIN DE MEDIOS DE CULTIVOS :segn

diferentes criterios, pero los ms importantes son

aquellos que se basan en:
a) Su consistencia
b) Su utilizacin
c) Su composicin
d) Su origen

1.-SEGN SU ESTADO FSICO

(CONSISTENCIA)

Medios lquidos: Son los que se presentan en este estado,

denominndose por esta razn caldos.

El medio lquido ms utilizado es el llamado caldo nutritivo, compuesto

principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza
fundamentalmente cuando se pretende la obtencin de una suspensin
bacteriana de una determinada concentracin.

Medios slidos:

Se preparan a partir de los medios lquidos, agregndoles un agente

gelificarte.

Los ms utilizados son la gelatina y el agar.

Gelatina: Es una protena animal obtenida de los huesos.

Tiene el inconveniente de que es hidrolizada por muchas bacterias, y
adems su uso est muy limitado porque su punto de fusin es bajo (lica a
temperatura ambiente) razn por la que no puede utilizarse para cultivos a
37C, que es la tempera ptima de crecimiento para muchos
microorganismos

Agar-agar:
Es un polmero de azcares obtenido
de algas marinas. Se trata de una
molcula insoluble en agua pero
soluble en agua caliente; una solucin
al 1,5% p/v forma un gel firme entre
32 y 39C y nose funde por debajo de
85C. Funde a 90C y solidifica una
vez fundido alrededor de los 45C.
El agar puede utilizarse para
diferentes fines:
a)

AGAR COMERCIAL

B)

AGAR BACTERIOLGICO,

c)AGARES PURIFICADOS Y AGAROSA,

utilizada para electroforesis en gel.

Medios semislidos:

Se preparan a partir de los

medios lquidos, agregando a
stos un agente solidificante en
una proporcin menor que para
preparar medios slidos.
Uno de sus usos es la
investigacin de la movilidad de
las bacterias

2.-SEGN SU UTILIZACIN:
2.1.-Medios comunes:
Son aquellos que poseen los
componentes mnimos para
que pueda producirse el
crecimiento de bacterias que
no necesiten requerimientos
especiales. El medio ms
conocido de este grupo es el
agar nutritivo o agar comn,
que resulta de la adicin de
agar al caldo nutritivo. Otros
representantes de este grupo
son el agar tripticase de soja,
el agar Columbia, etc.

2.2.- Medios de
enriquecimiento:

Son aquellos que, adems de

las
sustancias
nutritivas
normales, incorporan una
serie
de
factores
indispensables
para
el
crecimiento
de
microorganismos exigentes.
Este enriquecimiento se hace
por adicin de sangre u otros
productos biolgicos (sangre,
suero, leche, huevo, bilis, etc.

2.3.-Medios selectivos:

Son medios utilizados para favorecer el

crecimiento de ciertas bacterias contenidas en
una poblacin polimicrobiana. El fundamento
de estos medios consiste en facilitar
nutricionalmente el crecimiento de una
poblacin microbiana especfica.
Ejemplo: caldo selenito, que se utiliza para
favorecer el crecimiento de salmonellas y
frenar el del resto de enterobacterias.

2.4.-Medios inhibidores:
Los medios inhibidores podran considerarse
como una variante ms restrictiva de los
medios selectivos, se consiguen habitualmente
por adicin de sustancias antimicrobianas o de
cualquier otra que inhiba completamente el
desarrollo de una poblacin determinada.

2.5.-Medios de multiplicacin:

Sirven para obtener una gran cantidad

de clulas a partir de un microorganismo
ya aislado. Seemplean en la obtencin
de vacunas, en la investigacin y en la
industria. Los medios ms adecuados
para la multiplicacin suelen ser
lquidos. El caldo-infusin cerebrocorazn (BHI), es un ejemplo tpico de
estos medios.

2.6.-Medios de conservacin:

Se utilizan para conservar una cepa que,

por diversas razones nos interese
mantener. Fundamentalmente se utilizan
como controles de calidad de las
pruebas y reactivos utilizados en el
laboratorio

3.-Segn su origen:

a) NATURALES: son los preparados a partir de

sustancias naturales de origen animal o
vegetal como ser
extractos de tejidos o infusiones y cuya
composicin qumica no se conoce
exactamente.

b) SINTTICOS: son los medios que contienen

una composicin qumica definida cuali y
cuantitativamente. Se utilizan para obtener
resultados reproducibles.

c) SEMISINTTICOS .-son los sintticos a los

que se les aaden factores de crecimiento bajo
una forma
de un extracto orgnico complejo, como por
ejemplo extracto de levadura.

Requisitos Qumicos

Carbno (C).- todos los organismos requieren C para

sintetizar los componentes celulares.

Nitrgeno, azufre.y fsforo.-Estos elementos se

requieren para la sntesis de DNA, RNA, protenas y ATP.
Las bacterias pueden obtener nitrgeno (N) ya sea
fijndolo directamente de la atmsfera, como por ejemplo
el gnero bacteriano Rhizobium. Tambin pueden obtener
este elemento de compuestos inorgnicos que contengan
N como nitritos, nitratos, sales de amonia o amino cidos

Oxgeno

Aerbicos.- son todos los que utilizan oxigeno

para vivir
Aerbicos facultativos.- son los que necesitan
oxigeno y en su ausencia continua su
crecimiento por la va fermentacin
Anaerbicos obligados.- son los que nesecitan
oxigeno para crecer