Introduccin a la Enzimologa

Catlisis

Ea
Ea
G

Reaccin
no catalizada

Reaccin
catalizada

Enzima: Protena dotada de actividad cataltica

- Enzimas proteolticas
- Desnaturalizacin de enzimas
- Purificacin de enzimas
- Sntesis completa de una enzima
A partir de 1982, se sabe que no todas las enzimas son
protenas; existen molculas de RNA con actividad cataltica, las llamadas ribozimas

Las enzimas cumplen su papel cataltico gracias a:

- Fijacin estereoqumicamente complementaria
del substrato
- Transformacin cataltica del mismo
En ambas funciones participan:
- Cadenas laterales de los aminocidos
- Grupos o molculas no proteicas:
- Grupos prostticos
- Iones metlicos
- Cofactores

En la catlisis qumica se distingue entre:

- Catlisis homognea, cuando catalizador y reactivos

estn en la misma fase fsicoqumica: Por ejemplo, la
hidrlisis cida de la sacarosa.
- Catlisis heterognea, cuando catalizador y reactivos
estn en distinta fase fsicoqumica: por ejemplo, la
reaccin en fase gaseosa entre N2 y H2 para formar amonaco
(proceso Haber), que es catalizada por metales (slidos)
La catlisis enzimtica tiene caractersticas de ambas

Los siguientes hechos:

- Especificidad de la reaccin enzimtica
- Carcter heterogneo de la catlisis enzimtica

Nos llevan a postular la existencia de un Centro Activo en

la molcula de enzima, capaz de:
- Fijar especficamente al substrato
- Transformarlo catalticamente.

Lisozima y su
substrato

Substrato: molcula(s) sobre la(s) que acta la enzima

Actividad enzimtica: velocidad a la que cursa la reaccin
enzimtica
Velocidad: variacin de la concentracin en la unidad
de tiempo
Unidades:
katal: moles.s-1
U.I.: moles.min-1 (a 25C)
La velocidad es directamente proporcional de la concentracin
de enzima; por tanto, la velocidad es una medida de la concentracin de enzima en una preparacin.

Activador: Agente que aumenta la actividad enzimtica

Inhibidor: Agente que disminuye la actividad enzimtica

Inhibidor reversible: establece un equilibrio con la enzima:

E+I

EI

Inhibidor irreversible: modifica qumicamente a la enzima:

E+I

Cofactor (Coenzima):
tomo, ion o molcula que participa en el proceso
cataltico sin ser enzima ni substrato.
Los cofactores participan de dos maneras distintas:
1. A travs de una fijacin muy fuerte a la protena y salen
sin ser modificados del ciclo cataltico
2. Como un segundo substrato; salen modificados del ciclo
cataltico y por lo general requieren otra enzima para volver
al estado original.

Aminocido

LAO

R CH COO- + O2 + H2O

Cetocido
R CO COO- + H2O2 + NH4+

NH3+

LAO: L-aminocido oxidasa: es una flavoprotena

Las flavoprotenas tienen un grupo prosttico flavnico,
que interviene en el proceso cataltico sin salir modificado
del mismo
O
H3C

H3C

NH

NH
N

L-Lactato

Piruvato
COOC O

COO-

LDH

HO C H

CH3
NADH + H+

CH3
NAD+

LDH: Lactato deshidrogenasa

Utiliza como cofactor NADH, el cual sale de la reaccin
oxidado a NAD+. La regeneracin a NADH requerira otra
enzima.

Isoenzimas: formas moleculares distintas de una enzima dentro

del mismo organismo
Hexokinasa: Presenta, al menos, cuatro formas distintas
- Heptica
- Cerebral
- Muscular
- Eritrocitaria
Las isoenzimas representan formas que tienen que ver con
la diferenciacin celular, presentando distintas caractersticas
funcionales.

Especificidad de las enzimas, 1

Especificidad absoluta:

COOCH
CH
COOFumarato
(trans-)

H2O

COOHO CH
CH2
COOL-Malato

Enzima:
Fumarato hidratasa
Especfica para el
ismero trans- por
un lado y para el
L- por otro.

Especificidad de las enzimas, 2

Especificidad de grupo:

R CO O R' + H2O

R COOH + HO R'
Esterasa

Las carboxilesterasas hidrolizan todo tipo de steres, independientemente de la naturaleza de R o R

Otras caractersticas de la accin enzimtica

Eficiencia cataltica
En ocasiones llega a ser enorme; con nmeros de recambio
del orden de 108 s-1
Las enzimas que han llegado a este lmite reciben el nombre
de Enzimas plenamente evolucionadas, ya que un incremento
en la actividad no tendra sentido al superar la velocidad de
difusin de los substratos.

Teoras de la accin enzimtica, 1

Modelo de Llave y Cerradura (Emil Fischer)

Substrato y enzima se acoplan de forma estereospecfica,
de la misma manera que una llave se ajusta a su cerradura.
Modelo aceptado durante mucho tiempo; hoy se considera
insuficiente al no explicar algunos fenmenos de la inhibicin enzimtica, por ejemplo

Teoras de la accin enzimtica, 2

Modelo de Ajuste Inducido (Koshland)

Tanto la enzima como el substrato sufren una alteracin
en su estructura por el hecho fsico de la unin.
Est mucho ms de acuerdo con todos los datos experimentales conocidos hasta el momento.

Teoras de la accin enzimtica, 3

La teora del Ajuste Inducido se ampla en la actualidad
definiendo la accin enzimtica como
Estabilizacin del Estado de Transicin

Segn lo cual, el Centro Activo enzimtico es en realidad

complementario no al substrato o al producto, sino al
estado de transicin entre ambos.

O
R C O R'

OR C O R'
O-

Substrato: un ster

Estado de transicin:
intermediario tetradrico,
inestable

O
R C O

HO R'

Productos

R P O R'
O-

Anlogo de Estado de Transicin

Derivado fosforilado, que no es substrato
de la reaccin, pero que por su analoga
estructural ocupa el centro activo de la
enzima e inhibe fuertemente a la reaccin