RECUENTO DE

MICROORGANISMOS

Definiciones

1.- Recuento: procedimiento que permite determinar el nmero de

microorganismos presentes en una muestra. Se pueden clasificar en:

1.1.- Recuento de Viables: permite determinar el nmero de clulas vivas

presentes en una muestra

1.2.- Recuento de Totales: permite determinar el nmero de clulas

vivas y muertas presentes en una muestra

1.3.- Recuento Directo: cuenta el nmero de clulas directamente al

microscopio

1.4.- Recuento Indirecto: cuenta el nmero de clulas de una muestra por

determinacin de alguna variable que refleje crecimiento de los
microorganismos, como por ejemplo presencia de colonias o turbidez.

1. Tcnicas para Recuentos directos: Recuento em cmara (Petroff-Hauser)

Procedimiento:
Agregar la muestra con una pipeta en la excavacin, si el volumen es mayor a 0,02, la
misma cmara pierde el exceso
Cubrir con un cubreobjetos
Recontar al microscopio con objetivo de inmersin, los microorganismos presentes en los
cuadrados grandes y establecer un promedio
Calcular el nmero de microorganismos de la muestra de acuerdo a la siguiente frmula:
N de microorganismos/ml =

25 x

2
Media de 1 mm
MO

50 x 103

1 mm3

ml

2 Tcnicas para Recuentos indirectos: Recuento en placa

Procedimiento:

caldo
9 ml
muestra
Plaquear 1 ml

Demasiado para contar

Recuento
en placa

Factor de
dilucin

Organismos por ml
de muestra original

Calcular el n de microorganismos viables de acuerdo a:

N de microorganismos/ml =

FD x

10

Media de
colonias
en las 3
placas

Valor
inverso
de la
dilucin

Inverso
del
inculo
0,1 ml

Mtodo turbidimtrico
Este mtodo se basa en la medicin de la densidad ptica (DO) de un cultivo bacteriano
en crecimiento, pudiendo fabricar la curva de crecimiento correspondiente.
Procedimiento:

Tener dos matraces Monod con 10ml de medio de cultivo lquido

Inocular uno de los matraces con la bacteria y dejar el otro como control

Calibrar el espectrofotmetro a 600nm

Medir la absorbancia del cultivo (DO) peridicamente. Para ello, primero se debe
calibrar el espectrofotmetro con el control, dejando la absorbancia en 0.

Incubar ambos matraces entre cada medicin.

Paralelamente, junto con cada medicin de DO, se debe realizar el recuento en

placa correspondiente (para el clculo de viables).

Curvas de crecimiento bacteriano:

Fases del crecimiento bacteriano

Calculo de parmetros de crecimiento

Slo en fase logartmica

dN/dt= N
N=N0 e (t-t0)

Se caracteriza por la siguiente ecuacin:

Ln N-Ln N0= (t-t0)

log N-log N0= / 2,0303 (t- t0)

= constante especifica de velocidad de crecimiento (velocidad de crecimiento por unidad de

biomasa). Unidad de tiempo h-1

Otros parmetros de crecimiento:

Tiempo de generacin (g)= tiempo que tarda en duplicarse la poblacin
g= 0,693/
Velocidad de crecimiento (K)= inverso de tiempo de generacin (generaciones x
h)
K= 1/g

tiempo (h)
R5
R6
3,5
0,01808333 0,12131667
4
0,07063333 0,21723333
4,5
0,07286667 0,20873333
5
0,0891
0,20148333
5,5
0,11583333 0,21591667
6
0,15473333 0,2464
6,5
0,16876667 0,30166667
7
0,2148
0,47955
7,5
0,29781667 0,51706667
8
0,37048333 0,59556667
8,5
0,42413333 0,67518333
9
0,45568333 0,77438333
9,5
0,46745
0,82068333
10
0,48111667 0,87478333

log
Tiempo

Cepa

(h-1)

g (h)

= m x 2,3
g=0,69/

R5

0,1888

0,43424

1,58898305

R6

0,1304

0,29992

2,3006135

g= 0,301/m
m=0,301/g

R5
R6
3,5 -1,74272151 -0,91607953
4 -1,1509903 -0,66307353
4,5 -1,1374711 -0,68040819
5 -1,0501223 -0,69576087
5,5 -0,93616645 -0,66571383
6 -0,81041612 -0,6083593
6,5 -0,77271333 -0,52047268
7 -0,66796572 -0,3191661
7,5
-0,526051 -0,28645346
8 -0,43123132 -0,22506962
8,5 -0,37249759 -0,17057829
9 -0,34133686
-0,111044
9,5 -0,33026484 -0,08582439
10 -0,3177496 -0,0580995
Pendiente
0,18876358
0,1304364