SPE

Extraccion en Fase Slida

 Principios
Por qu preparar la muestra?
Remover interferencias de la muestra
Resultados ms exactos
Concentar analitos para mejorar la
deteccin
Proteger equipos para reducir costos

Principios de SPE (slid phase

extraction)
SPE es un proceso de extraccin mediante el cual una
muestra acuosa es filtrada a travs de una cama
delgada de partculas de material sorbente, los
analitos de inters son removidos de la matriz
liquida, y concentrados sobre el sorbente.
Una vez concentrados, los analitos son removidos por
una elucin con
solvente.

Columna
SPE

4 Etapas en
SPE

Aufbau einer Festphasenextraktionsapparatur

Eluent
Sule

Kanle
Vakuum; zur
Sicherheitsflasche und
Wasserstrahlpumpe
Saugflasche
bzw.
Reaglas mit
Ansaugstutzen

Abb.3:
Arbeitsablauf bei Anwendung der Festphasenextraktion

Filterelement
Sorbens
Filterelement

Konditionieren

Probenaufgabe

Waschen

Elution

Tipos de interaccin
Sorbente-Analito

Polar
No-polar
Intercambio-inico
Covalente
Copolimerico

Extracciones Polares
Tambin llamada fase normal o
hdroflica.
Implica enlaces puente de
hidrgeno, pi-pi e interacciones
dipolo/dipolo.
Sorbentes - silica, diol,
dietilamino,
cianopropil
Aplicaciones - lipidos, aditivos
oleosos,
carbohidratos, fenoles,

Extracciones No-Polares
Tambin llamadas hidrofbicas o
de fase reversa.
Interacciones entre cadena
hidrocarbonada del sorbente y los
enlaces
C-H del analito.
Implica fuerzas de van der
Waals /fuerzas de dispersin
Sorbentes - C2, C3,C4, iC4, tC4,
C5, C6, C7, C8, C10, C12, C18,
C20, C30 fenil y ciclohexil
Applicaciones - drogas de

Principio de la Fase
Reversa

11

Choosing the Bonded Phase

Examples of bonded phases used for HPLC packing media:
C18 or Octadecylsilane (ODS)
Very nonpolar - Retention is based on London (dispersion)
interactions with hydrophobic compounds.
Example Alltech Phase: Alltima C18

R
Si (CH2 )17CH 3
R

Choosing the Bonded Phase

Phenyl
Nonpolar - Retention is a mixed mechanism of
hydrophobic and - interactions.
Example Alltech Phase: Platinum Phenyl

H
R

H
C

Si (CH 2)3 C

C
C

R
H

C
H

Choosing the Bonded Phase

Cyanopropyl
Intermediate polarity - Retention is a mixed mechanism of
hydrophobic, dipole-dipole, and - interactions.
Example Alltech Phase: Alltima CN

R
Si (CH 2)3 C
R

Extracciones por Intercambio

Ionicocatinico cargados
Sorbentes de intercambio
negativamente

Analitos de carcter bsico son manipulados para

que lleven carga positiva.

Atraccin de opuestos forman enlaces fuertes

Sorbentes
Acidos Bencenesulfonicos(fuerte)
Acido Propilsulfonico (fuerte)
Acido Carboxlico (debil)

Aplicaciones incluyen drogas bsicas ,

catecolaminas, principios activos farmacuticos,
herbicidas
Analitos
Aminas
Pirimidinas (cationes)

Matriz - acuosa
Elucin bsica solventes para neutralizar analito

Intercambio inico
La separacin se basa en diferencias de carga a un pH dado
Las interacciones son electrostticas
Dos tipos
Intercambio aninico: matriz cargada
positivamente (DEAE, TEA, QAE)
Intercambio catinico: matriz cargada
negativamente (carboximetilos,
sulfonatos, fosfatos)

Elucin: puede llevarse a cabo mediante cambios de pH, fuerza inica o

ambos

Condiciones iniciales
+
+ ++ -

+
+ ++ +
+ ++ -

+
+ ++ -

+
+ ++ -

Aplicacin de la muestra
+
+ ++ +
+ ++ +
+ ++ -

+
+ ++ +
+ ++ -

+
+ ++ -

+
+ ++ -

+
+ ++ +
+ ++ -

+
+ ++ -

+
+ ++ -

Aumento en la concentracin de sales

+
+ ++ -

+
+ ++ -

Elucin de la protena de inters

+
+ ++ +
+ ++ -

+
+ ++
+ +
+
+
-

- + ++ + -

+
+ ++ -

+
+ ++ -

+
+ ++ +
+ ++ -

+
+ ++ +
+ ++ -

+
+ ++ -

+
+ ++ -

+
+ ++ -

Principio Modo Mixto

Comparacin de Ext-L-L vs
SPE
ELL

Usa 200 - 500 ml

solvente
Agitacin / proceso
continuo
Forma emulsiones

Poca selectividad
Toma 1 - 2 horas /
muestra

SPE
Usa 2 - 20 ml de
solvente
Proceso de Filtracin
No se forman
emulsiones

Gran selectividad
(adsorbente)
Toma 10 - 20 min. /
muestra

21

Cules son los Beneficios de

SPE?
SPE usa menos solvente que ELL
SPE es mas veloz (al menos 5 veces)
Alta capacidad
Costos Totales de SPE son ms bajos que ELL
Alta selectividad: amplia libertad de eleccin de
fases estacionarias y solventes
La automatizacin es mucho ms sencilla.

Columna SPE
accessorios

23

Fases Silicagel
Fase Reversa
C18

Adsorcin
Si-OH

Fase Normal
NH2
CN
C-OH(OH)

24

Otras Fases

Intercambio Anionico
N+
NH2
Intercambio Cationico
C6H5-SO3H
COOH
SO3H
Biocromatografa
WP PEI (NH2)
WP Butyl (C4)
WP CBX (COO)
Sephadex G-25

25

Interacciones

Non polar:
KJ/mole

van der Waals

~20

Polar:
Dipole / Dipole
KJ/mole
Hydrogen bond ~40 KJ/mole

~ 40

Electrostatic:
KJ/mole!

Ionic

~600

26

Polymer- Phase
Principle

R
(-CH-CH2)n-

N-CH3
C=O
CH3

Polymer- Phase
Principle
R
(-CH-CH2)n-

N-CH3
C=O
CH3

SO3H
or
CH2N+R
3

SO3H or
CH2N+R3

Experimento 1:
Extraccin rpida de colorantes naturales en bebidas
Preparacin de la muestra:
1 mL de jugo de moras se disuelve en 2 mL de agua destilada .
Aondicionamiento de la Column a:
Un cartucho de SPE 3 mL C18 (Baker: 7020-03) se acondiciona con 1 mL
de metanol
seguido por un volumen de columna de agua destilada.
Adicion de la muestra/Lavado:
La muestra preparada es aspirada a la columna. Se usa un lavado de 5
mL de agua destilada
para remover azcares, azucares coloreados y cidos orgnicos.
Elucion:
Los colorantes [antocianinea, flavonoides, taninos y/o alcaloides)] ison
eluidos con un
volumen equivalente a una columna de metanol. En ocasiones el 2propanol puede ser ms adecuado..
Analisis:
Para anlisis ms detallado se puede tomar espectros de absorcin de los
eluatos. Tambin se pueden hacer experimentos de TLC
.

Ambiental
- PAH s de agua y suelo
- PCBs de aceites - Pesticidas de agua/ suelo
- etc.

Alimentos /bebidas
- Aflatoxina del maz
- Cafeina de cola diet de-cafeinada.
- Vitamina E de jugos
- etc.

Farmaceutica/Clinical/Biologica

Benzodiazepinas del suero

- Esteroides anablicos/Orina
- Aflatoxina de hgado
- etc.

30

Experimento 3:
Extraccin de azcares (glucosa)

Preparation de la muestra:
Disolver 100 mg de glucosa en 10 mL de agua.
Acondicionamiento de la columna:
Una columna SPE Amino de 3 mL (Baker: 7088-03) es acondicionada con
2 mL de etanol.
Adicin de la muestra/Lavado:
2 mL de la muestra preparada es aspirada a travs de la columna.
Elucion:
Se eluye azcar con 2 mL de agua.
Analisis:
Para anlisis detallado
- use gotas de soluciones de Fehling.
Para anlisis detallado
- Se puede tomar un espectro de absorcin del
eluato

31

xperiment 4:

xtraccion Rpida de -caroteno de jugo de zanahoria

eparacin de la muestra:
mL jugo de zanahoria se filtra o centrifuga.
condicionamiento de la columna:
n cartucho de SPE C18 de 3 mL (Baker: 7020-03) se acondiciona con metanol
eguido por una volumen equivalente a una columna de agua destilada.
dicin de la muestra/lavado:
a muestra preparada es aspirada a travs de la columna. Se usa un lavado de 2
e agua destilada para remover todos los otros compuestos.
ucion:
-caroteno es eluido con alrededor de 2 mL de una mezcla heptano-acetona (8:2
l eluato es de color amarillo.
nalisis:
ara analisis detallado
- se puede tomar un espectro de absorcin del eluato.
- Se puede realizar experimentos de TLC.