UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN

ANTONIO ABAD DEL CUSCO

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS
BIOQUIMICA
CINTICA ENZIMTICA
DOCENTE: Mgt. Aura Natalia
Cantero Loaiza

MODELOS DEL COMPLEJO ENZIMA SUSTRATO

Hay dos modelos sobre la forma en que el sustrato se une al sitio activo de la
enzima:
el modelo llave-cerradura Este supone que la estructura del sustrato y la del sitio
activo son complementarias, de la misma forma que una llave encaja en una
cerradura. Este modelo es vlido en muchos casos, pero no es siempre correcto.
.el modelo del ajuste inducido En algunos casos, el sitio activo adopta la
conformacin idnea slo en presencia del sustrato. La unin del sustrato al sitio
activo de la enzima desencadena un cambio conformacional que da lugar a la
formacin del producto.

COFACTORES ENZIMTICOS.
Algunos enzimas necesitan para llevar a cabo su actividad cataltica de una o ms sustancias
de naturaleza no proteica que reciben el nombre de cofactores. No debe entenderse que los
cofactores son sustancias que meramente potencian la actividad enzimtica sino que, en
determinados enzimas, son absolutamente imprescindibles para que sta se realice. En
ausencia de cofactor el enzima resulta catalticamente inactivo y recibe el nombre de
apoenzima; la combinacin de apoenzima y cofactor da el holoenzima catalticamente activo.
Existen dos tipos de cofactores enzimticos: los iones metlicos y los coenzimas.
Los iones metlicos que actan como cofactores enzimticos son generalmente cationes mono
o divalentes. Pueden actuar de varias maneras: 1) En algunos enzimas el ion metlico
constituye el verdadero centro cataltico; en estos casos el ion suele presentar por s solo una
cierta actividad cataltica, que se ve incrementada cuando forma parte del enzima.
2) En otros enzimas el ion metlico constituye un grupo puente para unir el sustrato al centro
activo.
3) A veces el ion metlico no forma parte del centro activo sino que se encuentra en un lugar
del enzima muy alejado del mismo, actuando como agente estabilizador de la conformacin
nativa del enzima

Un tercio de los enzimas requieren algn in metlico

para cataliza

Cuando el cofactor es una sustancia orgnica de naturaleza no

proteica recibe el nombre de coenzima. Los coenzimas actan
generalmente como transportadores intermediarios de grupos
funcionales, de determinados tomos o de electrones, los cuales son
transferidos de una sustancia a otra en la reaccin enzimtica global.
A veces los coenzimas se hallan ntimamente unidos a la molcula
proteica constituyendo un verdadero grupo prosttico. En otros casos
la unin es dbil y el coenzima acta en realidad como si de un
sustrato ms del enzima se tratase. Cuando se analiza la estructura
qumica de muchos coenzimas se comprueba que tienen formando
parte de ella a alguna de las sustancias conocidas como vitaminas.
Existe pues una clara relacin entre vitaminas y coenzimas.

VITAMINAS.
Las vitaminas son una serie de sustancias de naturaleza qumica variada
que, en 18 cantidades mnimas, son necesarias para el normal desarrollo
y funcionamiento de muchos organismos. Su importancia biolgica se
manifest debido a que algunos organismos no las pueden sintetizar y
deben adquirirlas por tanto de procedencia exgena. Desde muy antiguo
se saba que determinados alimentos tenan propiedades curativas o
preventivas para determinadas enfermedades. El fraccionamiento
qumico de estos alimentos condujo al aislamiento y purificacin de las
sustancias responsables de este efecto preventivo, las cuales recibieron
el nombre de vitaminas debido a que la primera que se identific era una
amina (de "vital amina"). Pudo constatarse entonces su variada
naturaleza qumica, siendo clasificadas en hidrosolubles y liposolubles
segn su mayor o menor afinidad por el agua o por las sustancias
lipdicas.

CINTICA ENZIMTICA
La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por
enzimas. Estos estudios proporcionan informacin directa acerca del mecanismo de
la reaccin cataltica y de la especifidad del enzima. La velocidad de una reaccin
catalizada por un enzima puede medirse con relativa facilidad, ya que en muchos
casos no es necesario purificar o aislar el enzima.
La medida se realiza siempre en las condiciones ptimas de pH, temperatura,
presencia de cofactores, etc, y se utilizan concentraciones saturantes de sustrato. En
estas condiciones, la velocidad de reaccin observada es la velocidad mxima (Vmax).
La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparicin de los productos o la
desaparicin de los reactivos.

Para estudiar la cintica enzimtica se mide el

efecto de concentracin inicial de sustrato
sobre la velocidad inicial de la reaccin,
manteniendo la cantidad de enzima constante. Si
representamos v0 frente a [S]0 obtenemos una
grfica como la de la Figura de la derecha.
Cuando [S]0 es pequea, la velocidad inicial es
directamente proporcional a la concentracin de
sustrato, y por tanto, la reaccin es de primer
orden. A altas [S]0, el enzima se encuentra
saturada por el sustrato, y la velocidad ya no
depende de [S]0. En este punto, la reaccin es de
orden cero y la velocidad es mxima (Vmax).

Siendo:
en donde la expresin (k2+k3)/k1 se ha sustitudo por KM, o constante de
Michaelis-Menten. Este enlace nos aporta una explicacin sobre las
razones que hacen de la KM un parmetro cintico importante.
Se puede distinguir entre enzima libre (E) y enzima unido al sustrato (ES), de
forma que la concentracin total de enzima, [ET], (que es constante a lo largo de
la reaccin) es:
[ET] = [E] + [ES]

Para cualquier reaccin enzimtica, [ET], k3 y KM son constantes. Vamos a

considerar dos casos extremos:
A concentraciones de sustrato pequeas ([S] << KM) v = (k3 [ET]/KM) [S]. Como

Para cualquier reaccin enzimtica, [ET], k3 y KM son constantes. Vamos a

considerar dos casos extremos:
A concentraciones de sustrato pequeas ([S] << KM) v = (k3 [ET]/KM) [S].
Como los trminos entre parntesis son constantes, pueden englobarse en una
nueva constante, kobs, de forma que la expresin queda reducida a: v = kobs [S],
con lo cual la reaccin es un proceso cintico de primer orden.
A concentraciones de sustrato elevadas ([S] >> KM), v = k3 [ET]. La velocidad
de reaccin es independiente de la concentracin del sustrato, y por tanto, la
reaccin es un proceso cintico de orden cero. Adems, tanto k3 como [ET]
son constantes, y nos permite definir un nuevo parmetro, la velocidad mxima
de la reaccin (Vmax): Vmax = k3 [ET], que es la velocidad que se alcanzara
cuando todo el enzima disponible se encuantra unido al sustrato.
Si introducimos el parmetro Vmax en la ecuacin general obtenemos la
expresin ms conocida de la ecuacin de Michaelis-Menten:

Hay enzimas que no obedecen la ecuacin

de Michaelis-Menten. Se dice que su
cintica no es Michaeliana. Esto ocurre con
los enzimas alostricos, cuya grfica v
frente a [S] no es una hiprbola, sino una
sigmoide (Figura de la derecha). En la
cintica sigmoidea, pequeas variaciones
en la [S] en una zona crtica (cercana a la
KM) se traduce en grandes variaciones en
la velocidad de reaccin.

CLCULO DE LA KM Y DE LA Vmax DE UN ENZIMA

La representacin grfica de la ecuacin de

Michaelis-Menten (v0 frente a [S]0) es una
hiprbola (Figura de la izquierda). La Vmax
corresponde al valor mximo al que tiende
la curva experimental, y la KM corresponde
a la concentracin de sustrato a la cual la
velocidad de la reaccin es la mitad de la
Vmax.

Para determinar grficamente los valores

de KM y Vmax es ms sencillo utilizar la
representacin doble recproca (1/v0
frente a 1/[S]0), ya que es una lnea recta.
Esta representacin doble recproca recibe
el nombre de representacin de
Lineweaver-Burk (Figura de la derecha).
Es una recta en la cual:
La pendiente es KM/Vmax
La abscisa en el origen (1/v0 = 0) es -1/KM
La ordenada en el origen (1/[S]0 = 0) es
1/Vmax
De esta forma, a partir de los datos
experimentales
se
puede
calcular
grficamente, los valores de K y V
de

MOTIVOS QUE HACEN DE KM UN PARMETRO CINTICO IMPORTANTE

KM es la concentracin de sustrato para la
cual la velocidad de reaccin es la mitad
de la velocidad mxima se reduce a:
v = Vmax/2.
El valor de KM da idea de la afinidad del
enzima por el sustrato: A menor KM,
mayor afinidad del enzima por el sustrato,
y a mayor KM, menor afinidad. La KM del
sustrato natural es menor que la de los
sustratos anlogos.
donde la v = Vmax.
Los valores de KM de muchos enzimas
son prximos a los de la concentracin
fisiolgica de sus sustratos, de forma que
pequeas variaciones en la [S] pueden
suponer grandes cambios en la velocidad de
toda una ruta metablica.

INHIBICIN ENZIMATICA.
Existen una serie de sustancias, llamadas inhibidores, que inhiben o anulan la accin de los enzimas sin
ser transformados por ellos. Su estudio resulta de gran utilidad a la hora de comprender los mecanismos de
catlisis, la especificidad de los enzimas y otros aspectos de la actividad enzimtica.
La inhibicin enzimtica puede ser irreversible o reversible, esta ltima comprende a su vez tres tipos:
inhibicin competitiva, acompetitiva y no competitiva
INHIBICIN IRREVERSIBLE.
Algunos inhibidores se combinan de modo permanente con el enzima unindose
covalentemente a algn grupo funcional esencial para la catlisis con lo que el enzima queda
inactivado irreversiblemente. El estudio de este tipo de inhibidores ha resultado de gran utilidad
para identificar los grupos funcionales esenciales para la catlisis en aquellos enzimas a los que
inactivan.
Este tipo de inhibicin se conoce tambin como "envenenamiento" del enzima. Por ejemplo
algunos compuestos organofosforados txicos llamados venenos nerviosos, que se utilizan
como insecticidas, actan inhibiendo irreversiblemente al enzima acetilcolinesterasa, la cual
interviene en la actividad del sistema nervioso. Se sabe que estos compuestos
organofosforados inactivan al enzima formando un enlace ster fosfrico con el grupo hidroxilo
de un determinado resto del aminocido serina, lo que demuestra que ese grupo funcional es
esencial para la catlisis

INHIBICIN NO COMPETITIVA.

El inhibidor puede combinarse con el enzima libre o bien con el

complejo enzima-sustrato, interfiriendo en la accin de ambos . Los
inhibidores no competitivos se unen a un lugar del enzima diferente del
centro activo provocando en el una alteracin que dificulta bien la
formacin del complejo enzima-sustrato o bien la descomposicin de
ste para dar lugar a los productos. La unin con el inhibidor produce
dos formas inactivas: los complejos EI y ESI, ninguna de las cuales
puede descomponerse para dar lugar a los productos y al enzima libre:
E + I EI
ES + I ESI

ENZIMAS REGULADORES.
La clula es una mquina qumica que debe ser capaz de autoajustarse o regular su
propio funcionamiento para no desperdiciar tiempo ni energa en realizar procesos que
no le son tiles en un momento dado, siguiendo as un principio de mxima economa
molecular. Este autoajuste se lleva a cabo a varios niveles entre los que destaca la
regulacin de la propia actividad enzimtica. Todos los enzimas presentan propiedades
que los hacen candidatos a constituir elementos reguladores del metabolismo. Estas
propiedades son su sensibilidad a los cambios de pH, a la concentracin del sustrato o
a la concentracin de otras sustancias accesorias que denominaremos cofactores. Sin
embargo, existen una serie de enzimas que, adems de estas propiedades comunes a
todos ellos, poseen otras que les confieren un papel especficamente regulador del
metabolismo: son los enzimas reguladores. Existen dos tipos principales de enzimas
reguladores: los enzimas alostricos y los enzimas modulados covalentemente. Ambos
tipos son responsables de alteraciones en el estado metablico de las clulas en
intervalos cortos de tiempo (los enzimas alostricos en cuestin de segundos, los
modulados covalentemente en cuestin de minutos).

ENZIMAS ALOSTRICOS.
Los enzimas alostricos son aquellos que, adems del centro activo mediante el
cual interactan con el sustrato, poseen otro centro de unin llamado centro
alostrico mediante el cual interactan con otra molcula denominada efector o
modulador (la palabra "alostrico" hace referencia a la existencia de ese "otro
lugar"). La interaccin del modulador con el centro alostrico es tan especfica
como lo es la interaccin del sustrato con el centro activo y tambin est basada
en la complementariedad estructural . Los enzimas alostricos presentan pesos
moleculares en general superiores a los de otros enzimas y en la mayor parte de
los casos son protenas oligomricas, es decir estn formados por varias
subunidades E + I EI ES + I ESI 15 (normalmente en nmero par). Los
moduladores alostricos pueden ser de dos tipos: unos estimulan la actividad del
enzima al unirse al centro alostrico, reciben el nombre de moduladores positivos
o activadores; otros la inhiben y se llaman moduladores negativos o inhibidores.
Los inhibidores alostricos no responden a ninguno de los modelos de inhibicin
enzimtica estudiados en el apartado anterior

Los enzimas alostricos presentan siempre dos formas, una activa y

otra inactiva, interconvertibles por efecto del modulador. Existen dos
tipos de control alostrico: el control heterotrpico que se da cuando el
modulador es una molcula diferente del sustrato, y el control
homotrpico que se da cuando el modulador es el propio sustrato. En
ambos casos el modulador puede ser positivo o negativo. Los enzimas
con control homotrpico poseen dos o ms centros de unin para el
sustrato; en ellos la interconversin entre las formas activa e inactiva
depende de cuntos sean los centros de unin que estn ocupados por
molculas de sustrato.

ENZIMAS MODULADOS COVALENTEMENTE

Los enzimas modulados covalentemente tambin presentan dos formas, una

activa y otra inactiva, que son interconvertibles por modificacin covalente de
sus estructuras catalizada por otros enzimas, denominados enzimas
moduladores. Tal modificacin suele consistir en la adicin o eliminacin de un
grupo qumico esencial para la catlisis (generalmente un grupo fosfato, metilo,
adenilato u otros) de manera que el enzima modulado se activa cuando est
unido a dicho grupo y se inactiva cuando ste se elimina. En la mayor parte de
los casos son necesarios dos enzimas moduladores diferentes, uno que activa el
enzima modulado y otro que lo inactiva. Un ejemplo clsico de modulacin
covalente lo constituye el enzima glucgenofosforilasa, que acta en el
metabolismo de los glcidos liberando unidades de glucosa-1- fosfato a partir de
las cadenas polisacardicas del glucgeno. La glucgeno-fosforilasa es activada
por un enzima modulador, la fosforilasa-quinasa, que une covalentemente un
grupo fosfato a un resto especfico de serina en cada una de las dos
subunidades del enzima modulado. Otro enzima modulador, la fosforilasafosfatasa, escinde hidrolticamente dichos grupos fosfato desactivando as el
enzima.

Zimgeno
zimgeno o proenzima es un precursor enzimtico inactivo, es decir, no cataliza ninguna reaccin
como hacen las enzimas. Para activarse, necesita de un cambio bioqumico en su estructura que le
lleve a conformar un centro activo donde pueda realizar la catlisis. En ese momento, el zimgeno
pasa a ser una enzima activa. La cadena de aminocidos que se libera por la activacin se llama
pptido de activacin.

Funcin
Los zimgenos son utilizados en muchas reacciones biolgicas, como en la digestin o en la
coagulacin sangunea. Son un brillante ejemplo de regulacin endgena de las enzimas, de cmo
controlar su funcin. Las modificaciones que sufren los zimgenos son irreversibles, por lo que para
poder detener las reacciones que llevan a cabo es necesario un inhibidor de la enzima a la que dan
lugar. Cabe destacar el ejemplo del tripsingeno (zimgeno), que da lugar a la tripsina (enzima), que
a su vez activa otros zimgenos. Para poder detener la activacin de los zimgenos, la tripsina no
se puede volver a convertir en tripsingeno, sino que debe secretarse un inhibidor de la tripsina para
detener su accin.

ZIMOGENOS DIGESTIVOS

Ejm.
El tripsingeno es una proenzima (zimgeno) secretada por el pncreas, precursora de la tripsina.
Tras ser producido por el pncreas, pasa a travs de la bilis al intestino delgado, donde se activa y
se convierte en tripsina. El paso de tripsinogeno a tripsina es posible gracias a la enzima
enteropeptidasa secretada por las clulas de la mucosa duodenal, esta enzima extrae el
hexapeptido N terminal del tripsingeno y lo convierte en tripsina, la forma activa. Las pequeas
cantidades de tripsina que se forman mediante este proceso actan como catalizador de la reaccin
y forman a su vez ms tripsina, por ello el paso de tripsingeno a tripsina es una transformacin
autocataltica.1
El quimotripsingeno es una peptidasa precursora (zimgeno) de la enzima digestiva quimotripsina.
Es una cadena polipeptdica simple que cuenta con 245 residuos aminocidos. Es sintetizada en las
clulas acinares del pncreas y es almacenada dentro de grnulos membranosos en el pice de la
clula acinar. La clula es posteriormente estimulada por una seal hormonal o un impulso nervioso y
el contenido de los grnulos es vertido en un conducto que comunica con el duodeno.
El quimotripsingeno debe ser inactivo hasta que llegue al tracto digestivo, para prevenir daos en el
pncreas y otros rganos (de no estar inactivado, el pncreas se destruira a s mismo por la accin de
la peptidasa). Es activado por otra enzima llamada tripsina. La forma activa es llamada quimotripsina y es utilizada para crear -quimotripsina. La tripsina escinde el quimotripsingeno en el
enlace peptdico entre la arginina y la isoleucina. Esto crea dos molculas de -quimotripsina. Una
molcula de -quimotripsina acta sobre la otra rompiendo el enlace peptdico entre la leucina y la
serina. Esta reaccin produce la -quimotripsina.

El pepsingeno es una proenzima, precursora de la pepsina. Es secretada por las

clulas principales o zimognicas, halladas en las glndulas fndicas u oxnticas delestmago,
que se encuentran principalmente en el cuerpo y fondo del mismo. El pepsingeno se activa
transformndose en pepsina al entrar en contacto con el cido clorhdrico del estmago
(secretado por las clulas parietales), ya que el ambiente ptimo para que la pepsina acte es
cido (pH 1,8 - 2).
Actualmente se reconocen dos tipos de pepsingeno: pepsingenos I y II. Si bien inicialmente se
crea que ambos tipos eran secretados por las clulas zimognicas gstricas, recientes estudios
han puesto en evidencia que las clulas mucosas del estmago son las encargadas de liberar el
pepsingeno. De esta forma el pepsingeno queda convertido en la luz gstrica en pepsina por
la accin de los cidos gstricos. La pepsina es importante al principio de la vida para la
digestin de la leche, posteriormente su accin se dirige sobre la carne y otras protenas.

Isoenzima
Las isoenzimas o isozimas son enzimas que difieren en la secuencia de aminocidos, pero que catalizan la
misma reaccin qumica. Estas enzimas suelen mostrar diferentes parmetros cinticos (i.e. diferentes
valores de KM), o propiedades de regulacin diferentes. La existencia de las isoenzimas permite el ajuste del
metabolismo para satisfacer las necesidades particulares de un determinado tejido o etapa del desarrollo. En
bioqumica, las isoenzimas son isoformas (variantes estrechamente relacionadas) de las enzimas. En muchos
casos, son codificadas por genes homlogos que han divergido con el tiempo. Las isoenzimas representan
enzimas de diferentes genes cuyos productos catalizan la misma reaccin, los dos trminos se suelen usar
indistintamente.

Ejemplo de isoenzima
Un ejemplo de una isoenzima es la glucoquinasa, una variante de hexoquinasa que no es inhibida
por la glucosa-6-fosfato. Sus diferentes funciones de regulacin y su menor afinidad por la glucosa
(en comparacin con otros hexoquinasas), le permiten tener diferentes funciones en las clulas
de determinados rganos, como el control de la liberacin de insulina por las clulas beta del
pncreas, o la iniciacin de la sntesis de glucgeno por las clulas del hgado. Ambos procesos
deben ocurrir solamente cuando la glucosa es abundante, u ocurre algn problema.

Ejemplos del uso diagnostico de isoenzimas

son el estudio de la Lactato Deshidrogenasa y
de la Creatin quinasa
Deshidrogenasa Lctica (LDH)
Esta enzima esta formada por la asociacin de cinco cadenas peptdicas de dos diferentes tipos de
monmeros: M y H.
Las variantes encontradas en el ser humano son:

LDH1: M M M M (abundante en el corazn, el cerebro y los eritrocitos; alrededor del 33 % de la

LDH en el suero humano es de este tipo)

LDH2: M M M H (abundante en el corazn, el cerebro y los eritrocitos; alrededor del 45 % de la

LDH en el suero humano es de este tipo)

LDH3: M M H H (abundante en el cerebro, los riones y los pulmones; constituye alrededor del 18
% de la LDH en suero humano)

LDH4: M H H H ((abundante en el hgado, musculo esqueltico y el tejido renal; constituye

alrededor del 3 % de la LDH srica)

LDH5: H H H H ((abundante en el tejido heptico, musculo esqueltico y el leon; apenas hasta 1

% de la LDH del suero humano es LDH5)