Benemrita Universidad Autnoma

de Puebla
FAC U LTA D D E C I E N C I A S Q U M I C A S
L A BO RAT O R I O D E Q U M I C A O R G N I C A I
SEMINARIO N IV

PURIFICACIN DE SLIDOS
CROMATOGRAFA

CROMATOGRAFA
Es un mtodo fsico de
separacin en la cual los
componente s
de
una
me zcla
ms
o
menos
compleja
se
distribuyen
entre dos fases, una que
es fi ja (fase estacionaria) y
la otra que se mueve en
una
direccin
defi nida
(fase mvil).

Principios fsicos

Un sistema cromatogrfico consta de dos

fases:
Fase mvil (liquida o
gaseosa): contiene los
componentes a separar
y fluye a travs de la
fase estacionaria.

Fase
estacionaria
(liquida o solida): a
travs de la cual fluye la
fase mvil y donde
quedan
momentneamente
retenidos
los
componentes
de
la
muestra.

Coeficiente de particin (K)

Se define como el cociente entre la concentracin de
componente presente en la fase estacionaria y la
concentracin de componente presente en la fase mvil.

K=
Cuando K=1, el soluto se
distribuido entre las dos fases

encuentra

igualmente

Clasificacin de los mtodos

cromatogrficos

Cromatografa de particin
Esta tcnica se basa en la retencin del analito en una
columna slida sobre la cual hay distribuida una capa fina
de un disolvente afn al analito.
Una fase mvil liquida o gaseosa y la estacionaria esta
mediado por el analito, que se reparte entre ambas y
queda al final disuelto en la fase estacionaria.

El soluto se equilibra entre el liquido de la fase estacionaria

y la fase movil, por diferencia de solubilidad.

Cromatografa de adsorcin
Se basa en el proceso de adsorcin-desorcin de
sustancias contenidas en la fase mvil sobre un solido
estacionario.

Cromatografa de intercambio inico

Es un proceso que permite la separacin de iones y
molculas polares basado en las propiedades de carga
de las molculas.

Cromatografa de exclusin
Se basa en la separacin de la
muestra con base a su
tamao. La matriz de la
columna esta formada por un
polmero entrecruzado con
poros
de
tamao
predeterminados; la muestras
de mayor tamao migran a lo
largo de la columna con
mayor velocidad que las de
tamao pequeo.

Caractersticas de las principales fases

estacionarias
Gel de slice:
Es una sustancia qumica de aspecto cristalino, porosa, inerte, no
txica e inodora, insoluble en agua ni en cualquier otro solvente,
qumicamente estable.
Gracias a su composicin qumica nica y a su estructura fsica, el
gel de slice posee unas caractersticas incomparables con otros
materiales similares.
El gel de slice tambin puede diferenciar la adsorcin de
diferentes molculas actuando como un absorbente selectivo.
Se utiliza para separar sustancias ms polares

 ALUMINA
Es un adsorbente ligeramente bsico debido a que en el
proceso de extraccin de la almina a partir de la bauxita
quedan algunas molculas de hidrxido de aluminio
adheridas a la almina, dndole a sta un carcter bsico.
Se utiliza para separar compuestos relativamente apolares.
La almina puede ser tratada qumicamente para conseguir
alminas cidas, bsicas y neutras.
Es un adsorbente de carcter polar, de tal forma que
retendr con mayor avidez a los componentes polares.

Disolventes ms empleados acuerdo a su

polaridad y punto de ebullicin.

En general,
estos disolventes
se caracterizan
por tener bajos
puntos de
ebullicin y
viscosidad, lo que
les permite
moverse con
rapidez.

El orden de
elucin de un
compuesto se
incrementa al
aumentar la
polaridad de la
fase mvil o
eluyente

Cromatografa en capa fina

Es una tcnica analtica rpida y sencilla, se utiliza una placa recubierta con
el adsorbente (fase estacionaria) en forma de una capa delgada, de espesor
constante, adherida sobre un soporte rgido. El eluyente (fase mvil)
ascender por capilaridad por la placa y arrastrar los componentes en
forma diferenciada a lo largo de sta, produciendo manchas de los
componentes. El grado de elucin de las sustancias depender tanto de su
propia polaridad como de la polaridad del eluyente utilizado.
Nos permite:
Determinar el grado de pureza
Comparar muestras

Procedimiento

Preparacin de la cuba cromatogrfica

Se rodea la cuba con papel
absorbente dejando una ventanita.
Colocar el solvente de desarrollo.
Esperar que se moje el papel.
Despus de logrado esto, el nivel
del lquido no debe alcanzar la
lnea de siembra porque se
arrastraran los pigmentos hacia el
fondo de la cuba.
Tapar la cuba y dejar 5 a 10
minutos para que se sature con los
vapores de la mezcla de solventes.

Eleccin de la fase estacionaria y la fase

mvil.
Fase
Fase mvil
estacionari
a
Slida
Lquida
lquida

Lquida

Tcnica

C.C.F
C.C.F