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Reaes de precipitao com desnaturao

As protenas possuem uma estrutura tridimensional bem


definida, que est relacionada com suas propriedades fsicas
e biolgicas. A modificao na estrutura tridimensional nativa
de uma protena, com conseqente alterao de suas
propriedades, conhecida como desnaturao.
A Agentes
desnaturao
envolve
alteraes
nas estruturas
desnaturantes
de protenas:
calor, cidos,
lcalis,
quaternria,
e secundria
de protenas,demas
no
solventesterciria
orgnicos,
solues concentradas
uria
e da
primria.
guanidina, detergentes, sais de metais pesados etc.

A solubilidade de uma protena muito varivel e depende da


distribuio e da proporo dos grupos polares (hidroflicos) e dos
apolares (hidrofbicos) na molcula.
Muitas protenas so solveis em gua ou em solues
salinas. Como uma protena possui muitos grupos carregados
positiva e negativamente, provenientes das cadeias laterais dos
aminocidos, as molculas proticas podem interagir umas com
as outras, com ons de cargas opostas e com a gua.
Assim, ocorrem interaes protena-protena, protena-gua e
protena-ons. Se a interao protena-gua alta, a protena
tende a ser solvel. Se as interaes protena-protena e
protena-ons forem altas, ela tende a ser insolvel.

Precipitao por ao de calor


O calor pode desnaturar a maioria das protenas, uma vez que a
agitao trmica afeta as interaes que estabilizam a estrutura
tridimensional das protenas, como por exemplo as ligaes de
hidrognio.

Precipitao por interao com sais de metais pesados


Em pH 7,0 ou acima, as protenas esto normalmente
carregadas com cargas negativas. Os ctions de metais
pesados neutralizam estas cargas, fazendo com que as
protenas precipitem, formando proteinatos insolveis
solvel em excesso de metais pesados, desde que o excesso
de ons confira uma carga positiva estabilizadora sobre as
partculas.

Precipitao por interao com os reagentes acdicos


Os nions dos reagentes acdicos podem combinar-se com
as protenas que possuem carga positiva (quando o pH da
soluo estiver no lado cido do ponto isoeltrico da
protena), formando sais insolveis. Dentre estes reagentes
tem-se: cido pcrico, cido tnico, cido fosfotngstico,
cido sulfossaliclico e cido tricloroactico. Estes reagentes
so, portanto, mais efetivos em pH cido, no qual as
protenas esto carregadas positivamente.

4.1.d. Precipitao por ao de solventes orgnicos


A adio de solventes orgnicos como o etanol, ter etlico e acetona s
solues aquosas de protenas pode levar a precipitao das mesmas. Isto
pode ser explicado pelo fato desses solventes apresentarem uma constante
dieltrica inferior da gua. A constante dieltrica de uma substncia uma
medida da sua capacidade de se orientar de tal modo a neutralizar uma
determinada carga nas suas proximidades.
A fora de atrao entre dois ons de cargas opostas (F), pode ser expressa
como:
e +e F =
D r2
onde e+ e e- so as cargas dos ons, D a constante dieltrica e r, a distncia
entre as cargas.
A gua tem uma constante dieltrica extremamente alta (80, a 20C) e, deste
modo, a fora de atrao entre molculas proticas contendo radicais com
cargas opostas baixa, predominando a interao protena-gua em vez da
interao protena-protena. A adio de solventes pode inverter esta situao,
levando a agregao e precipitao das molculas proticas.

Precipitao isoeltrica
O pH em que a protena tem sua menor solubilidade o pH
isoltrico, que definido como o pH no qual a molcula de
protena no apresenta carga eltrica efetiva, sendo incapaz de
deslocar-se em um campo eltrico.
Nessas condies, no existe repulso eletrosttica entre as
molculas proticas vizinhas, e elas tendem a precipitar.
Contudo, em valores de pH acima ou abaixo do ponto isoeltrico,
todas as molculas proticas possuem uma carga efetiva de
mesmo sinal. Em conseqncia elas repelir-se-o umas s
outras, evitando a coalescncia das molculas isoladas em
agregados insolveis. A protena precipitada isoeletricamente
permanece na sua conformao nativa e pode ser redissolvida
em um meio que apresente um pH adequado e concentrao de
sal conveniente.