SELECCION,

MANTENIMIENTO
Y MEJORAMIENTO
DE
MICROORGANISM
OS DE INTERES
INDUSTRIAL
La cepa a utilizar debe ser genticamente estable.

Su
Su velocidad
velocidad de
de crecimiento
crecimiento debera
debera ser
ser alta.
alta.

La cepa debe estar libre de contaminantes,

incluidos fagos.

Sus
Sus requerimientos nutricionales deberan
requerimientos nutricionales deberan ser
ser
satisfechos
satisfechos a partir de medios de cultivo de costo
a partir de medios de cultivo de costo
reducido.
reducido.

Debe ser de fcil conservacin por largos

perodos de tiempo, sin prdida de sus
caractersticas particulares.
Los microorganismos que se utilizan en un proceso, pueden
ser obtenidos por aislamiento a partir de fuentes naturales o
de una coleccin de cultivos. A nivel industrial, en general,
cada firma posee su propia coleccin de organismos, muchos
de los cuales han sido mejorados a travs de tcnicas
clsicas de mutacin o de ingeniera gentica.

Si el organismo a utilizar es aislado de fuentes naturales

como agua, suelo, plantas y desechos, la eleccin del
material de partida puede hacerse teniendo en cuenta
que el organismo exprese en ese ambiente las
propiedades que son de inters.
 incrementar
incrementar en
en
En
En este
este caso aislamiento
aislamiento directo,
una
una poblacin
caso directo,
mixta
poblacin
mixta el
el nmero
nmero
es deseable
es deseable
que o
o
organismos
organismos de
de
que el
el medio
medio inters
inters
que
que se utiliza
se utiliza
para
para el
el
aislamiento
aislamiento
permita
permita la
Elegida
Elegida la
la fuente
fuente de
de mxima
la
aislamiento, las mxima
aislamiento, las expresin
expresin del
del
posibilidades
posibilidades de
de xito
xito material
material
dependen de la tcnica
dependen de la tcnica gentico
gentico del
del
elegida
elegida para
para el
el mismo;
mismo; organismo
organismo..
en
en este caso las
este caso las
alternativas son:
alternativas son: enriquecimiento
enriquecimiento del
del
cultivo con o sin
cultivo con o sin
pretratamiento
pretratamiento de
de la
la
muestra.
muestra.
 Los objetivos de la conservacin de los
cultivos se podran resumir en los
siguientes aspectos:

preservar
preservar lala pureza
pureza gentica
gentica del
del cultivo
cultivo sin
sin
prdida de ninguna de sus propiedades
prdida de ninguna de sus propiedades
bioqumicas;
bioqumicas;
preservar
preservar los
los niveles
niveles de
de su
su productividad
productividad
inicial;
inicial;

lograr
lograr que
que el
el cultivo
cultivo pueda
pueda ser
ser transportado
transportado y
y
manejado
manejado con
con facilidad.
facilidad. Esto
Esto ltimo
ltimo puede
puede ser
ser un
un
factor esencial en la seleccin de un mtodo
factor esencial en la seleccin de un mtodo dede
preservacin.
preservacin.
 Tanto para el
mantenimiento,
preparacin y
propagacin de inculos
se deben usar mtodos
reproducibles que no
produzcan variaciones o
prdidas de las
caractersticas de la cepa
empleada.
Mejoramiento de
microorganismos
industriales
 En general los organismos aislados de la
naturaleza productores de metabolitos de inters
industrial producen a los mismos en niveles muy
Optimizacin del medio de
bajosEl mejoramiento gentico
cultivo y de las condiciones
de operacin de la cepa

Con el organismo modificado, se reexaminan

las condiciones del cultivo para lograr
nuevamente la mxima productividad.
Una readaptacin del medio de
Los programas de
desarrollo involucran una cultivo a los nuevos
requerimientos, mejoras de las
continua modificacin condiciones de operacin y
gentica del tambin de los procesos de
microorganismo extraccin y purificacin
 La obtencin de
cepas
modificadas
genticamente
se puede realizar
por

Seleccin
Mutacin Recombinaci
natural de
inducida n gentica
variantes
Seleccin natural
En cada
divisin
celular hay
una En las mutaciones espontneas el
pequea
probabilid
elemento responsable de la
ad de que
ocurra un
mutacin
Son estables no es conocido
y
cambio hereditarias
gentico y tienen una En la seleccin de variantes naturales, una
frecuencia prctica que todava es utilizada se refiere
Problemas de estadsticam a la observacin de las caractersticas
Estos estudios
rendimientos en-te Se asocian con
debido a que La frecuencia involucran una
morfolgicas de las colonias
en general las
medible
de mutaciones mayor o menor etapa de
variantes espontneas productividad, lo que
tienen crecimiento
vara entre 10- permite seleccionar y
menores 6
a 10-9 posteriormente seguida por
niveles de
produccin
mutaciones
estudiar los clones ensayos de
por genoma y
que la
por aislados. evaluacin del
poblacin
parental generacin producto
Estos estudios involucran una etapa de
crecimiento seguida por ensayos de
evaluacin del producto

A veces es Por ejemplo, En estas

posible el clulas no condiciones se
diseo de un mutadas que aslan
procedimiento mueren en un mutantes con
simple de plaqueo por un esfuerzo
"screening" seleccin de mnimo an de
selectivo para mutantes poblaciones
un tipo resistentes a donde la tasa
particular de drogas, de mutacin es
mutantes metales, etc. menor a 1 x 10 6
Mutacin inducida

El Empricamente el empleo de diferentes agentes

procedimiento
de mutacin resulta en el aislamiento de distintos
mediante el
empleo de un "espectros" de mutantes
agente
determinado
implica dos En algunos de
etapas los casos es
ms
conveniente el
empleo de ms
El aislamiento del mutante debera
de uno en lugar
del uso masivo
utilizar la caracterstica
El tratamiento de uno solo mejorada del mismo como
de la
poblacin con factor de seleccin
El incremento de su
el mutgeno La tcnica a emplear productividad podra ser el
elegido y puede producir una
resultado de una El conocimiento de las
alta tasa de mutacin
luego el o puede favorecer la modificacin en los rutas y mecanismos de
aislamiento de separacin de un mecanismos de control que control de la biosntesis
nmero reducido de
los mutantes tipos deseables de un
limitan el nivel de de un producto facilitan
para su gran nmero de produccin y/o de una la estrategia a seguir en
posterior productores variacin en los precursores el aislamiento
mediocres
ensayo y que llevan al producto
seleccin
 Fsicos,
Fsicos, como
como la
la luz
luz ultravioleta
ultravioleta
Los agentes Otros
Otros agentes como rayos
agentes como rayos X
Xy y rayos
rayos v
v son
son
mutagnicos actualmente poco utilizados
pueden ser actualmente poco utilizados
agrupados
en:

Qumicos:
Qumicos: Estos
Estos agentes
agentes se
se emplean
emplean en
en
concentraciones
concentraciones del orden de 0.05 M con
del orden de 0.05 M con
exposiciones de 0.5 a 12 horas
exposiciones de 0.5 a 12 horas
Entre
Entre estos
estos agentes
agentes se
se destacan
destacan los
los siguientes:
siguientes:

Acido
Acido nitroso
nitroso
N-metil-N'-nitro-N-nitrosoguanidina
N-metil-N'-nitro-N-nitrosoguanidina (NTG)
(NTG)
Anlogos
Anlogos dede base
base
Mutgenos
Mutgenos estructurales
estructurales
 Mutantes con niveles
mejorados de metabolitos
primarios El
Metabolitos
conocimiento
primarios
de la va El producto
son aquellos
metablica y No se final es
esenciales
su control produce eliminado de
para la vida
facilita la El mutante producto la clula
de un
construccin no reconoce final, que es debido a una
microorganis
del mutante la presencia el que modificacin
mo como por
deseado. del inhibidor controla la en la
ejemplo,
Estos o represor enzima clave permeabilida
aminocidos,
pueden de la va d de la
nucletidos,
tener metablica membrana
vitaminas,
distintas celular
cidos
modificacion
orgnicos
es:
Al no producirse el producto final de la ruta, el control de la misma es
eliminado, pero como estos productos son esenciales para el
crecimiento, los mismos se deben incorporar al medio en
concentraciones tales que permitan el desarrollo
En este caso los mutantes son auxotrficos para uno o ms productos finales
El aislamiento d estos mutantes puede resultar en la obtencin de un cepa altamente
productora, si la mutacin ocurre en el sitio correcto.

La seleccin de auxtrofos se puede realizar empleando tcnicas de

enriquecimiento o mediante la identificacin visual de mutantes
la separacin mecnica de esporos auxtrofos y prototrficos de organismos
filamentosos ha sido alcanzada por el mtodo de "enriquecimiento por filtracin".
Se ha aplicado a Aspergillus, Neurospora, etc.. El procedimiento implica la incubacin
de una suspensin de esporos mutada, en un medio lquido mnimo; los prottrofos
desarrollan en tanto que los auxtrofos no

Mutantes resistentes a anlogos de aminocidos han sido empleados

en procesos de mejoramiento de cepas, para la obtencin de
antibiticos
El mejor ejemplo de mutantes modificados en la permeabilidad es el caso de la
fermentacin de cido glutmico
Se ha aislado un mutante de Corynebacterium glutamicum, cuya permeabilidad puede
ser modificada por el nivel de biotina
 Mutantes productores
de enzimas de inters
Las tcnicas de
industrial
mutacin en este Las mutaciones
caso pretenden pueden tener
Los mutantes que
alterar los lugar en un gen
producen enzimas
mecanismos de regulador,
inducibles en
control para eliminando la
ausencia de
obtener mutantes produccin de un
inductor se
que puedan represor activo, o
denominan
producir enzimas si se producen en
mutantes
en ausencia de el operador, se
constitutivos
inductor y an en podra evitar la
presencia de unin del represor
represores
 Mutantes con mejores
rendimientos de metabolitos
secundarios
Las tcnicas de
mutacin clsica han
permitido obtener
Metabolitos secundarios son sustancias no mutantes adecuados
imprescindibles para las funciones vitales para la aplicacin
como por ejemplo alcaloides, toxinas, posterior de tcnicas
antibiticos, giberelinas, etc. ms recientes como la
fusin de protoplastos
y las de clonaje de
Debido a que la genes
produccin de estos
Los programas iniciales
metabolitos es
en la industria de
afectada por Se pueden emplear dos
antibiticos inducan
mecanismos de control tcnicas de seleccin al
mutaciones sobre
genticamente azar, de mutantes
clulas o esporos
determinados, las obtenidos despus de
mediante el empleo de
mutaciones pueden un tratamiento
agentes fsicos y
tener efectos
qumicos
importantes en el
mejoramiento de cepas
Recombinacin gentica
El
mejoramient
o de una
cepa
Cualquier proceso que genere nuevas
industrial combinaciones de genes los cuales
empleando
tcnicas de estaban originalmente en individuos
mutagnesis
seleccin diferentes
Procesos no
conduce a la meiticos en
clulas vegetativas
creacin de que llevan a
lineas
divergentes
recombinacin son
llamados
conjugacin, en donde la
parasexuales y
aparecen tanto en
transferencia de material gentico se
Reagrupar las
potencialidades
organismos realiza a travs de pilis,
procariotes como
de distintas
variantes con el
eucariotes
transduccin, la transferencia de
objeto de En bacterias ADN se realiza mediante una partcula
seleccionar la el fenmeno
mejor de viral que acta como vector;
transformacin,
combinacin de recombinaci
genes
n se observa donde la
responsables
de codificar la en: recombinacin puede ocurrir despus de
produccin de la insercin experimental de un ADN
determinado
metabolito aislado, a una bacteria receptora;