COLINEARIDAD DEL GEN Y

LAS PROTEINAS

Mgr. Giovanni Aragn

Alvarado
C. Yanofsky establece el concepto de
colinearidad entre la secuencia de
nucletidos del DNA y la secuencia de
aminocidos de la protena, al comprobar
que el orden relativo de las mutaciones
mapeadas en uno de los genes de la ruta de
biosntesis de triptfano se corresponde con
el mismo orden relativo de los aminocidos
afectados en la cadena polipeptdica.
Met-Pro-Leu-Asp-Arg-Fin-Arg-Tre-Fin POLIPEPTIDO
El ADN en el genoma de un organismo
podra dividirse conceptualmente en dos, el
que codifica las protenas y el que no
codifica.
En el proceso de elaborar una protena, el
ADN de un gen se lee y se transcribe a
ARNm.
El ARN mensajero instruye a la maquinaria
que elabora las protenas, para que
ensamble los aminocidos en el orden
preciso para armar la protena.
El mal llamado ADN basura corresponde a
secuencias del genoma procedentes de
duplicaciones, translocaciones y recombinaciones
de virus, etc, que parecen no tener utilidad alguna.
No deben confundirse con los intrones.
Corresponde a ms del 90% de nuestro genoma,
que cuenta con 20.000 25.000 genes.
Se pensaba que no tenan utilidad alguna, pero
tiene funciones, como regular la expresin
diferencial de los genes.
Llamado tambin como ADN no codificante.
Chips de ADN (Microarrays)
Son colecciones de oligonucletidos de ADN
complementario dispuestos en hileras fijadas. Estos
chips de ADN se usan para el estudio de mutaciones
genticas de genes conocidos o para monitorizar la
expresin gnica de una preparacin de ARN.
Los chips de DNA que se estn utilizando hoy
consisten en fragmentos de DNA de diferente longitud
que son tratados, adheridos y fijados, mediante un
procedimiento robotizado, a una superficie no porosa:
un portaobjetos de microscopio. El DNA empleado
proviene directamente de la purificacin de leucocitos,
biopsias o clulas de estudios de expresin, y se
sintetiza a partir de un molde de RNA mensajero
(molcula intermediaria entre el cdigo de DNA y la
fabricacin de protenas en la clula).
DNA satlite: Un tipo de DNA repetitivo en
tndem, que forma bandas satlite cuando el
DNA genmico se fracciona, mediante
centrifugacin, en gradientes de cloruro de
Cesio.

No se transcribe en RNA, no tiene

funciones gnicas,ubicado en centrmero y
constricciones secundarias, participan en la
organizacin cromosmica y nuclear.
Codigo gentico
Cada ribosoma tiene tres sitios:
P (peptidil) donde se forma el
enlace peptidico
A (aminoacil) se descarga el AA.
E (salida) - el tRNA's se aleja del
ribosoma
 MUTACIONES
Una mutacin es una alteracin o cambio en la informacin
gentica (genotipo) de un ser vivo y que, por lo tanto, va a
producir un cambio de caractersticas, que se presenta sbita
y espontneamente, y que se puede transmitir o heredar a la
descendencia.
La unidad gentica capaz de mutar es el gen (mutn).
En los seres multicelulares, las mutaciones slo pueden ser
heredadas cuando afectan a las clulas reproductivas.
Las consecuencias fenotpicas de las mutaciones son muy
variadas, desde grandes cambios hasta pequeas diferencias
tan sutiles que es necesario emplear tcnicas muy elaboradas
para su deteccin.
Mutaciones condicionales
Son aquellas que slo presentan un fenotipo en ciertas
condiciones determinadas, por ejemplo, de temperatura
(mutaciones termosensibles y criosensibles). Esta clase de
mutacin es condicional porque en terminos biologicos las
causas para determinar que clase de mutacion es se pueden
ver al exponer al individuo a determinadas condiciones.

Mutaciones bioqumicas
Prdida o cambio de alguna funcin bioqumica, como una
actividad enzimtica. Por ejemplo, los mutantes auxtrofos
no pueden crecer en medio mnimo.

Mutaciones de prdida de funcin

Cuando desaparece alguna funcin. Suelen ser recesivas.
Mutaciones morfolgicas
Afectan a la morfologa del individuo, a su distribucin
corporal. Modifican el color o la forma de cualquier
rgano de un animal o planta. Suelen producir
malformaciones.
Mutaciones letales
Producen la muerte del individuo. Suelen ocurrir en genes
esenciales, imprescindibles para la supervivencia del
individuo. Por el dao producido en su mutacin el gen no
sobrevive. Esto se caracteriza por distintos medios y se
puede identificar por que el individuo tuvo durante su
fecundacion algunos factores que afectaron su desarrollo,
por ejemplo: si durante el embarazo la madre tuvo contacto
con algun veneno o algun tipo de sustancia toxica se corre
el peligro de que el embrion nazca con algun tipo de
mutacion letal en sus genes.
Mutaciones de ganancia de funcin
Lo ms comn es que se corrompa algn
proceso normal del ser vivo.
Sin embargo, existen raras ocasiones donde
una mutacin puede producir una nueva
funcin al gen, generando un fenotipo
nuevo.
Si ese gen mantiene la funcin original, o si
se trata de un gen duplicado, puede dar lugar
a un primer paso en la evolucin.
 Tipos de mutacin segn el
mecanismo causal
Segn el mecanismo que ha provocado el cambio
en el material gentico, se suele hablar de tres
tipos de mutaciones: mutaciones cariotpicas o
genmicas, mutaciones cromosmicas y
mutaciones gnicas o moleculares.
Hay una tendencia actual a considerar como
mutaciones en sentido estricto solamente las
gnicas, mientras que los otros tipos entraran en
el trmino de aberraciones cromosmicas.
Mutaciones gnicas o moleculares.
Son las mutaciones que alteran la secuencia
de nucletidos del ADN. Entre las
mutaciones gnicas se puede distinguir:
Mutacin por sustitucin de bases: Se
producen al cambiar en una posicin un par
de bases por otro (son las bases
nitrogenadas las que distinguen los
nucletidos de una cadena). Se Distinguen
dos tipos que se producen por diferentes
mecanismos bioqumicos:
 Por sustitucion de bases
Mutaciones transicionales, cuando un par de
bases es sustituido por su alternativa del mismo
tipo. Las dos bases pricas son adenina (A) y
guanina (G), y las dos pirimdicas son citosina
(C) y timina (T). La sustitucin de un par AT,
por ejemplo, por un par GC, sera una
transicin.
Mutaciones transversionales, cuando un par
de bases es sustituida por otra del otro tipo. Por
ejemplo, la sustitucin del par AT por TA o por
CG.
Mutaciones de corrimiento estructural, cuando se aaden
o se quitan pares de nucletidos alterndose la longitud de
la cadena. Si se aaden o quitan pares en un nmero que no
sea mltiplo de tres (es decir si no se trata de un nmero
exacto de codones), las consecuencias son especialmente
graves, porque a partir de ese punto, y no slo en l, toda la
informacin queda alterada. Hay dos casos:
Mutacin por prdida o delecin de nucletidos: En la
secuencia de nucletidos se pierde uno y la cadena se
acorta en una unidad.
Mutacin por insercin de nuevos nucletidos: Dentro de
la secuencia del ADN se introducen nucletidos
adicionales, interpuestos entre los que ya haba,
alargndose correspondientemente la cadena.
Puntuales
Tales mutaciones recurrentes alteran la secuencia de ADN
sustituyendo una base nucleotdica por otra.Las
sustituciones se clasifican en (1) transiciones, cuando se
sustituye una purina por purina (A <--> G) o una
pirimidina por pirimidina (C <--> T); (2) transversiones,
cuando se sustituye una pirimidina por una purina o
viceversa (T o C <--> G o A).
mutaciones no sinnimas:Las sustituciones nucleotdicas
que cambian un aminocido por otro .
mutaciones sinnimas:La mutacin altera la base situada
en la tercera posicin del codn pero no causa sustitucin
aminoacdica.
mutaciones neutras:La mutacin silenciosa se refiere a
aquellas presentes en sitios no codificantes del genoma.
Los agentes mutgenos no producen mutaciones especficas.
Entre los efectos de las mutaciones se encuentra:
Efectos Nocivos: Son especialmente peligrosas en los
gametos, cigotos o clulas de un embrin del que pueden
surgir individuos u rganos anmalos. Si afecta a clulas en
continua divisin puede surgir un cncer, al alterar los
oncogenes o los genes supresores.
- La mayora de las mutaciones son letales, pero tambin
pueden producir numerosas enfermedades hereditarias,
congnitas y enfermedades crnicas en el adulto.
- Muchos de los contaminantes ambientales son agentes
mutagnicos que no slo afectan al ser humano sino
tambin a los componentes biolgicos de los ecosistemas,
provocando en muchos casos severos desequilibrios y daos
permanentes.
Beneficiosos: Las mutaciones pueden inducir
cambios que adaptan los seres vivos al medio
ambiente.
- Una sustitucin de un nucletido en la secuencia
del ADN puede pasar desapercibida, pero tambin
puede producir alteraciones importantes en la
funcin biolgica de una protena.
- Las mutaciones nuevas tienen ms probabilidad
de ser perjudiciales que beneficiosas en los
organismos, eso se debe a que son eventos
aleatorios con respecto a la adaptacin, es decir, el
que ocurra o no una mutacin particular es
independiente de las consecuencias que puedan
tener en sus portadores
 Mutaciones espontneas o inducidas
Las espontneas son aquellas que surgen normalmente
como consecuencia de errores durante el proceso de
replicacin del ADN.
Tales errores ocurren con una probabilidad de 10 ^ -7 en
clulas haploides y 10 ^ -14 en diploides.
Las mutaciones inducidas surgen como consecuencia de la
exposicin a mutgenos qumicos o biolgicos o a
radiaciones.
Mutgenos qumicos: los anlogos de bases del ADN
(como la 2-aminopurina), molculas que se parecen
estructuralmente a las bases pricas o pirimidnicas pero
que muestran propiedades de apareamiento errneas;
Agentes alquilantes como la nitrosoguanidina, que
reacciona directamente con el ADN originando cambios
qumicos en una u otra base y produciendo tambin
apareamientos errneos; y
los agentes intercalantes como las acridinas, que se
intercalan entre 2 pares de bases del ADN, separndolas
entre s.
Como mutgenos biolgicos se puede considerar la
existencia de transposones o virus capaces de
integrarse en el genoma.
Mutgenos fsicos: las radiaciones ionizantes
(rayos X, rayos csmicos y rayos gamma) y no
ionizantes (sobre todo la radiacin ultravioleta)
tambin inducen mutaciones en el ADN; las
primeras se originan por los radicales libres que
reaccionan con el ADN inactivndolo, y las
segundas aparecen como consecuencia de la
formacin de dmeros de pirimidina en el ADN,
como consecuencia de la unin covalente de 2
bases pirimidnicas adyacentes.
Mutaciones y polimorfismos
Las mutaciones pueden considerarse
patolgicas o anormales, mientras que los
polimorfismos son variaciones normales en
la secuencia del ADN entre unos individuos
a otros y que superan el uno por ciento en la
poblacin, por lo que no puede considerarse
patolgico. La mayora de los polimorfismos
proceden de mutaciones silentes.
 Mutacin y evolucin
Las mutaciones son la materia prima de la
evolucin, con nueva versin de un gen, surgido
por una mutacin.
Aumenta su frecuencia y se extiende a la especie
gracias a la seleccin natural o a tendencias
genticas aleatorias
Sin mutaciones las especies no evolucionaran.
La seleccin natural acta para incrementar la
frecuencia de las mutaciones ventajosas, con ms
posibilidades de sobrevivir, reproducirse y
transmitir las mutaciones a su descendencia.
La seleccin natural no acta sobre las
mutaciones neutrales, pero las mutaciones
neutrales pueden cambiar de frecuencia por
procesos aleatorios.

La seleccin natural suele actuar para

reducir el porcentaje de mutaciones al
mnimo posible; de hecho, el porcentaje de
mutaciones observado es bastante bajo.
 MECANISMOS DE REPARACION
DEL DNA
Mecanismos de reparacin de ADN
Las clulas no toleran daos del ADN que
comprometan la integridad del genoma, aunque las
clulas se mantengan funcionando mnimamente al
perder o alteren los genes no esenciales.
Dependiendo del dao causado a la estructura del
DNA, se desarrollan varios tipos de estrategias de
reparacin para recuperar la informacin perdida.
La clula utiliza cadenas complementarias no daadas
o el cromosoma hermano como plantilla de
recuperacin.
Daos en cadena simple
Cuando slo una de las dos hebras de un cromosoma tiene
un defecto, la otra cadena puede utilizarse como plantilla
para guiar la correccin de la cadena daada. hay
numerosos mecanismos para reparar el ADN:
Inversin directa del dao son varios mecanismos
especializados en invertir daos especficos: ejemplo, la
metil-guanina-metil-transferasa (MGMT) elimina
especficamente grupos metilo de la guanina, y la fotoliasa
en bacterias rompe el enlace qumico creado por la luz UV
entre bases adyacentes de timidina. Estas enzimas no
necesitan una cadena normal.
Mecanismos de reparacin por escisin que eliminan el
nucletido daado por un nucletido no daado. Se
incluyen:
Reparacin por escisin de bases (BER), que repara el dao
sobre un solo nucletido causado por oxidacin, alquilacin,
hidrlisis o desaminacin,
Terapia gentica
Para utilizar la reparacin de ADN con fines
teraputicos, el desafo es descubrir qu
enzimas especficos muestran mayor
especificidad para los lugares daados, de
forma que su sobreexpresin conduzca a
una reparacin del ADN ms eficiente.
Una vez que se conozcan los factores de
reparacin adecuados, el paso siguiente es
seleccionar los medios apropiados para
insertarlos en la clula, para producir
tratamientos viables de enfermedades y
envejecimiento.
Reparacin gentica
A diferencia de la reparacin endgena del ADN, la
reparacin gentica (o correccin gentica) se refiere a
una variante de terapia gnica, que se dirige directamente a
las mutaciones heredadas o adquiridas relacionadas con una
enfermedad y las corrige.
Funcionan reemplazando la secuencia de ADN afectado con
la secuencia deseada, utilizando tcnicas como la
mutagnesis dirigida de oligonucletidos.
Los pasos que se siguen para la reparacin de ADN, son los
siguientes: la DNA- POLIMERASA detecta el error al
haber pasado leyendo; luego, la ENDONUCLEASA
escinde, determina la seccion gnica,y elimina el trozo de
cadena de ADN que tiene error; seguido, la ADN-
POLIMERASA lo sintetiza; y finalmente, la ADN- LIGASA
lo sella y queda perfectamente.
Reparacin de dmeros de pirimidinas
mediante fotoreactivacin
Reparacin del DNA:
remocin de grupos metilo
Reparacin del
DNA:
bases mal
apareadas
Reparacin
del DNA
durante o
despus de
su
replicacin
Reparacin directa
Son sistemas que eliminan directamente el
dao del UV en el DNA, como es el caso de
los dmeros de timina. La luz visible activa
la fotoliasa que rompe los dmeros de
timina.
Otro ejemplo son las alquiltransferasas y su
actividad consiste en eliminar los grupos
alquilo, tambin se repara la
despurinizacin gracias a las glicosidasas
del ADN.
Dependiente de replicacin
Todas las clulas contienen endonucleasas que
atacan los sitios que quedan tras la prdida
espontnea de resduos de purina o pirimidina.
Las endonucleasas AP(sitios sin purina o
pirimidina) son vitales para la clula porque, la
despurinizacin espontnea es relativamente
frecuente. Estas enzimas introducen hendiduras en
la cadena mediante la rotura de enlaces
fosfodisteres en los sitios AP. Esto promueve un
proceso de reparacin por escisin mediado por
otras tres enzimas: una exonucleasa, la polimerasa
de DNA I y la ligasa de DNA.
Escisin
Esta va de reparacin est determinada por
tres genes denominados uvrA, uvrB y uvrC.
Este sistema reconoce lesiones en el de
DNA. Una endonucleasa: nucleasa uvrABC
realiza una incisin alejada varios pares de
bases a cualquier lado de la base daada,
eliminndose a continuacin un fragmento
de DNA de cadena sencilla.
El pequeo hueco se rellena entonces
mediante sntesis de reparacin y queda
sellado por la ligasa de DNA.
Sistema GO
Dos glucosilasas actan conjuntamente para
eliminar las mutaciones causadas por las lesiones
que produce en el DNA el 8-oxodG. Las
glucosilasas junto al producto del gen mutT forman
el sistema GO.
Cuando se originan lesiones GO en el DNA, por
dao oxidativo espontneo, una glucosilasa cifrada
en el gen mutM elimina la lesin. An as persisten
algunas lesiones GO que emparejan errneamente
con adenina. Una segunda glucosilasa producto del
gen mutY elimina la adenina de este
emparejamiento errneo especfico, llevando al
restablecimiento de la citosina correcta por sntesis
de reparacin.
Sistema SOS
En E. coli depende de los genes recA, umuC
y umuD. Cuando se encuentra un tramo sin
cifrar acta el sistema SOS.
Se activa la protena recA que induce la
presencia de las protenas SulA y SulB que
interaccionan con la DNA pol III. sta hace
que pierda afinidad y prosiga la sntesis de
ADN y dejando el hueco y sin que la clula
muera.
Reparacin postreplicativa
Algunas vas de reparacin reconocen errores que haya
tenido lugar la replicacin. Uno de estos, es el sistema,
denominado sistema de reparacin de emparejamientos
errneos.
Para averiguar cual de las dos bases es la errnea debe
diferenciar entre la cadena progenitora y la cadena hija.
Lo diferencia la enzima metiladora metilasa de la adenina
que tarda varios minutos en metilar la cadena hija. Las
protenas mut S y mut L interaccionan con el sitio mal
emparejado y una protena mutH rompe la cadena recin
sintetizada.
Alrededor del emparejamiento errneo, las cadenas de DNA
se separan con ayuda de una protena denominada MutU y
se estabilizan con SSB. Y las polimerasas copian el
segmento de DNA.
 RECOMBINACION
Existen varios tipos de recombinacin gentica, en las clulas
eucariotas:
Se da la recombinacin homloga o recombinacin general,
sucede en la profase I de la meiosis, usa largas regiones del ADN
homlogas.
Otro es la recombinacin de Sitio especfico tiene lugar por
rotura y posterior unin de regiones de homologa corta y
especfica de dos ADN diferentes, o dentro de la misma
molcula. Genes saltarines que se transpuestan, normalmente son
plsmidos.
Y la Recombinacin no homologa que es una recombinacin
entre secuencias de nucletidos no homologos, acontece
raramente en procariotas y levaduras, pero es ms frecuente en
clulas de mamferos.
Las recombinaciones se dan al azar, entre cortar y pegar
segmentos de ADN, y entre esos cambios puede que se de un
nuevo gen que sea bueno para la evolucin, cause mejoras.
La recombinacin es el proceso por el que la
informacin gentica se ve redistribuida, tras la
transferencia del exogenote al endogenote. La
recombinacin permite barajar grandes conjuntos
de genes, suministrando una fuente de variacin y
seleccin para la evolucin, ms rpida que la
mutacin.
En bacterias encontramos los siguientes tipos
principales de recombinacin:
1) Recombinacin general u homloga
2) Recombinacin especfica (no-homloga), en
la que a su vez distinguimos:
a) Rec. especfica legtima, conservativa;
b) Rec. especfica ilegtima, propiciada por
elementos genticos transponibles.
Recombinacin general u homloga

Puede ocurrir en cualquier lugar del

genomio, por emparejamiento entre pares de
secuencias que presenten una homologa
suficientemente extensa.
Depende de la intervencin de un equipo
enzimtico caracterstico, en el que la
protena RecA (o equivalente) es central en
el proceso.
Recombinacin especfica legtima
(conservativa)

Requiere cortas secuencias de homologa

entre el exogenote y el endogenote (por eso
se llama tambin especfica de sitio), que
son reconocidas por protenas especficas.
Es independiente de RecA.
Este tipo de recombinacin es tpica de la
integracin de genomios de fagos en sitios
concretos del genomio de bacterias
hospedadoras.
Recombinacin especfica ilegtima: fenmenos
de transposicin

No depende de homologas (ni siquiera cortas) entre el

exogenote (un elemento gentico transponible, IS) y el
endogenote.
Tambin es independiente de RecA.
El elemento transponible codifica una enzima (transposasa)
que reconoce secuencias especficas inversamente repetidas
en los extremos del propio elemento, lo cual se requiere
para el proceso de transposicin.
Muchos elementos transponibles (pero no todos) poseen un
mecanismo replicativo de transposicin: es decir, al
transponerse dejan una copia de s mismos en el sitio
original, y generan una copia nueva en el sitio a donde se
transponen (recombinacin especfica duplicativa).
El modelo de Holliday predice
que un intermediario en la
recombinacin es un
heterodplex (es decir una
regin de DNA de dos bandas
en la cual cada banda tiene
orgenes diferentes) y en caso
de diferir los dos DNA, el uno
del otro por, por ejemplo en
una base (la mayor parte del
heteroduplex es en tal caso una
doble hlice perfecta), el
heterodplex presentar un
slo sitio representado por un
solo nucletido de mal
apareamiento.
La importancia de la recombinacin puede resultar
del hecho de que la identidad de los cromosomas
homlogos no es completa.
Las diferencias entre cromosomas homlogos se
deben principalmente a mutaciones, que se han
acumulado a lo largo de la historia de la especie.
Parte o an todo un gene puede estar ausente de uno
de los cromosomas o puede estar interrumpido por
una secuencia extraa de DNA.
Por va de la recombinacin es posible producir un
nmero enorme de combinaciones, es decir la
recombinacin aumenta enormemente el nmero de
gametos diferentes que un organismo produce.
RECOMBINACIN
TRANSPOSICIONAL.

Es mediada por elementos

transponibles o
transposones. Estos son
secuencias de DNA que se
mueven de una localizacin
gentica a otra, estudiados
en bacterias, pero se han
encontrado en muchos
organismos eucariticos,
incluyendo el humano.
Hallados en trabajos en
maz, por Barbara
McClintock en las dcadas
de los 40 y 50, y por los
que ella obtuvo tardamente
el premio Nobel en 1982.
La transposicin es efectuada por recombinacin
replicadora.
En la transposicin hay por aumento de copias del
transposn.
La transposicin comprende dos conjuntos de reacciones, la
primera reaccin es la replicacin del transposn, sin
replicacin de secuencias cromosmicas adyacentes, y la
segunda incluye el rompimiento de la secuencia blanco para
generar un sitio de insercin del transposn.
Las secuencias de insercin (IS) son transposones bsicos y
constituyentes normales de cromosomas bacterianos y de
plsmidos.
Las IS poseen repeticiones terminales invertidas cortas
(frecuentemente entre 15 y 25 pb), pero no idnticas,
rodeadas por repeticiones directas muy cortas.
La mayor parte de los transposones tienen mdulos IS y
otros marcadores y secuencias que pueden especificar
funciones importantes en la transposicin.
Son cuatro clases de transposones en eucariotas con base en
propiedades estructurales que reflejan su modo de transposicin.
Han sido descritos en muchos eucaritas, lo que sugiere una
distribucin universal, son universales por transferencia
promiscua de una especie a otra o por su aparicin temprana en
las primeras clulas o por improbables eventos independientes de
aparicin.
Los elementos transponibles con repeticiones terminales directas
largas o Retroposones, son elementos con una estructura que se
puede correlacionar con un modo de transposicin que incluye un
intermediario de RNA.
Los elementos transponibles con repeticiones terminales
invertidas largas: la estructura de repeticiones invertidas se
origina de la reiteracin de una secuencia corta.
Los elementos transponibles con repeticiones terminales
invertidas cortas.
Los elementos transponibles con una estructura que sugiere que
se originaron por transcripcin inversa de RNA celulares
poliadenilados y que incluyen varios transposones de plantas y
otros organismos.
 La ingeniera gentica es una tcnica que consiste en la
introduccin de genes en el genoma de un individuo que
carece de ellos.
Se realiza a travs de las enzimas de restriccin que son
capaces de "cortar" el ADN en puntos concretos.
Se denomina ADN recombinante al que se ha formado al
intercalar un segmento de ADN extrao en un ADN receptor.
Por ejemplo, la integracin de un ADN vrico en un ADN
celular.
TECNICAS BIOTECNOLOGICAS
La tecnologa del ADN recombinante: con la que es posible
aislar y manipular un fragmento de ADN de un organismo para
introducirlo en otro.

La secuenciacin del ADN: Tcnica que permite saber el orden o

secuencia de los nucletidos que forman parte de un gen.

La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR): con la que se

consigue aumentar el nmero de copias de un fragmento
determinado de ADN, por lo tanto, con una mnima cantidad de
muestra de ADN, se puede conseguir toda la que se necesite para
un determinado estudio.

Las aplicaciones de la ingeniera gentica: Son numerosas las

aplicaciones prcticas y comerciales de la ingeniera gentica.
 Este ADN puede incorporarse a las clulas de otros
organismos (vegetales, animales, bacterias...) en los que
se podr "expresar" la informacin de dichos genes.

De una manera muy simple podemos decir que

"cortamos" un gen humano y se lo "pegamos" al ADN de
una bacteria; si por ejemplo es el gen que regula la
fabricacin de insulina, lo que haramos al ponrselo a
una bacteria es "obligar" a sta a que fabrique la
insulina. Por lo tanto en la tecnologa del ADN
recombinante podemos diferenciar cuatro etapas bsicas:
1. OBTENCION DE FRAGMENTOS DE ADN
A) Las enzimas de restriccin actan as:

En este esquema se indica el lugar en el que corta

la enzima de restriccin. Se aprecia la actuacin en
ambas hebras.
B) Luego se observa:

Se ve el resultado de la actuacin de la enzima de

restriccin. Ha quedado rota la molcula de ADN,
quedando unos bordes pegajosos por donde
puede unirse este ADN, con otro aunque sea de
una especie diferente.
La enzimas de restriccin actan de la siguiente
manera:

Los fragmentos de restriccin,

se pueden separar por
tamaos, es decir, segn el
nmero de pares de
nucletidos que llevan,
mediante la tcnica de
electroforesis y as estudiar los
distintos trozos.

Segn donde se hallen las

secuencias de reconocimiento,
un gen determinado puede
estar fragmentado en varios
trozos, o bien un trozo puede
contener varios genes,
posibilidades que hay que
confirmar.
INSERCION DE FRAGMENTOS
Vector.- Es un segmento de
Insercin de los ADN que se puede auto-
fragmentos de ADN. replicar independientemente
Se realiza en vectores del ADN de la clula
de clonado, que son los husped.
agentes
transportadores Permiten obtener mltiples
capaces de copias de un trozo especfico
introducirlos en las de ADN, lo que proporciona
clulas hospedadoras. una gran cantidad de
material fiable con el que se
Se utilizan con pueda trabajar.
frecuencia dos tipos de
vectores de clonacin: El proceso de
plsmidos y virus. transformacin de una
porcin de ADN en un
vector se denomina
clonacin.
ENZIMAS DE RESTRICCION
Las secuencias de reconocimiento de las enzimas de restriccin
frecuentemente tienen seis pares de bases de longitud, palindrmos.
Algunas enzimas como EcoRI y HindIII escinden el DNA dando como
resultado extremos "pegajosos". Las enzimas de restriccin
generalmente se obtienen de bacterias y su nombre deriva del nombre
cientfico de esas bacterias: HpaI es de Hemophilus parainfluenzae;
EcoRI es de E. coli y HindIII es de Hemophilus influenzae.
a) Plsmidos
Son molculas de
ADN circular, con
un tamao menor
que el del
cromosoma. Se
replican con
independencia del
cromosoma
bacteriano ya que
tienen su propio
origen de
replicacin.
Bacterifagos
El proceso es
similar, se trata
de insertar el
gen deseado en
un fragmento de
ADN vrico. En
un siguiente
paso se
insertar este
ADN por el
proceso de la
TRANSDUCCI
N.
c. Csmidos
Plsmidos que contienen
el fragmento de ADN
que posee un borde
cohesivo procedente del
genoma del fago lambda
(extremo cos) y se
empaqueta en el
interior de un fago.

El propsito es
introducir en la clula
receptora fragmentos
de ADN.
 3. Mtodos de introduccin
del vector
3.1Transformacin.
Ocurre espontneamente
en ciertos tipos de
bacterias y se consigue
artificialmente
sometiendo a la clula
bacteriana a tratamientos
fsicos y qumicos.
La clula capta molculas
de ADN que se
encuentran en el medio
externo, las introduce en
su interior y las incorpora
a su genoma. En las
siguiente animacin puede
verse el proceso.
 Transduccin
Este mtodo consiste en introducir el ADN en la clula
hospedadora mediante un virus, utilizando como vector de
clonacin el genoma del virus.
El nmero 1 corresponde al
virus aproximndose a una
bacteria. Se puede
observar como lleva un
genoma ya con el gen que
interesa clonar. El siguiente
momento 2, corresponde al
contacto entre el virus y la
pared bacteriana, en cuya
zona de contacto se
produce un poro por donde
como vemos en la etapa 3,
el virus inyecta su ADN al
interior de la clula
bacteriana.
Procedimiento en animacin...
Clonado del ADN
Una vez que se ha conseguido
la poblacin de bacterias
transformadas, llevan adems
del gen de inters otro gen.
Luego se ponen a las bacterias
en un medio de cultivo
apropiado para que se
multipliquen. A la vez que se
reproducen las bacterias lo
hace tambin el plsmido con
el gen que interesa. Se
pueden formar por tanto
diferentes clones con genes de
inters para el hombre. Este
conjunto de clones se
denomina biblioteca genmica.
 SECUENCIACION:
TECNICA DEL
DIDESOXI
Una tcnica propia de la Ingeniera
Gentica es la determinacin de la
secuencia de nucletidos de un ADN,
conocida como secuenciacin de dicho
cido nuclico.
Se ha conseguido gracias a las enzimas
de restriccin y a la posibilidad de
obtener numerosas copias de un cido
nuclico por clonacin.
TECNICA DEL DIDESOXI

Se denomina as
por ser necesarios
los di-
desoxirribonucleti
dos
Los cuales han
perdido su grupo
alcohol OH del
carbono 3'.
TECNICA DEL
DIDESOXI
Como los nucletidos se
unen por este grupo OH
del carbono 3', hay que
pensar que si nos
encontramos con un
didesoxinucletido ser
imposible que se una otro
nucletido y la cadena
terminar aqu. (Es
necesario tener esto
presente para comprender
la tcnica del didesoxi)
REACCION EN CADENA DE
LA POLIMERASA
Permite duplicar un nmero ilimitado de veces
un fragmento de ADN en un tubo de ensayo.
Se pueden generar millones de molculas
idnticas, a partir de una molcula de ADN. En
en unas pocas horas. La reaccin es muy sencilla,
necesita cantidades de ADN muy pequeas y slo
se precisa un tubo de ensayo, algunos reactivos,
una fuente de calor y unas pequeas cadena de
nucletidos que actan como cebadores.
REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA
La reaccin es un proceso cclico:
REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA
En esta animacin puede verse simplificado el proceso.
APLICACIONES DE LA PCR
1. Secuenciacin
Genera suficiente cantidad de ADN molde para su secuenciacin. Es
mucho mas sencillo y rpido que la clonacin en clulas.
2. Estudios evolutivos
Con la amplificacin genes de organismos ya extinguidos, como del
mamut, o restos antiguos humanos, se pueden comparar estos genes
con los genes semejantes de organismos actuales y poder reconstruir
rboles filogenticos. El PCR tambin se ha utilizado para conseguir el
mapa del genoma humano.
3. Huellas dactilares del ADN.
Es posible comparar muestras diferentes de ADN para comprobar si
pertenecen al mismo individuo o no, o si existe parentesco entre ellas.
Se aplica en Medicina forense e investigaciones policiales, con el fin de
identificar individuos a partir de muestras biolgicas, como sangre,
semen, piel o cabellos. Tambin se utiliza en las pruebas de paternidad.
APLICACIONES
MEDICAS
DE LA INGENIERIA
GENETICA
OBTENCIN DE VACUNAS
RECOMBINANTES
El sistema tradicional de obtencin de
vacunas a partir de microorganismos
patgenos inactivos, puede comportar un
riesgo potencial.
Muchas vacunas, como la de la hepatitis
B, se obtienen actualmente por ingeniera
gentica. Como la mayora de los factores
antignicos son protenas lo que se hace
es clonar el gen de la protena
correspondiente.
DIAGNTICO DE ENFERMEDADES DE
ORIGEN GENTICO

Conociendo la secuencia de
nucletidos de un gen
responsable de una cierta
anomala, se puede diagnosticar
si este gen anmalo est
presente en un determinado
individuo. En el siguiente dibujo
se explica brevemente la base
del diagnstico
TERAPIA
GENETICA
La terapia gnica consiste en la aportacin de un gen
funcionante a las clulas que carecen de esta
funcin, con el fin de corregir una alteracin
gentica o enfermedad adquirida. La terapia gnica
se divide en dos categoras.
1. Alteracin de clulas germinales (espermatozoides
u vulos), lo que origina un cambio permanente de
todo el organismo y generaciones posteriores. Esta
terapia no se utiliza en seres humanos por
cuestiones ticas.
2.Terapia somtica celular. Uno o ms tejidos son
sometidos a la adicin de uno o ms genes
teraputicos, mediante tratamiento directo o previa
extirpacin del tejido. Esta tcnica se ha utilizado
para el tratamiento de cnceres o enfermedades
sanguneas, hepticas o pulmonares.
TRANSGENESIS EN
ANIMALES
La transgnesis es la introduccin de ADN
extrao en un genoma, que sea estable y
se herede y afecte a todas las clulas en
los organismos multicelulares.

Generalmente, en animales, el ADN

extrao, llamado transgen, se introduce en
zigotos, y los embriones que hayan
integrado el ADN extrao en su genoma,
previamente a la primera divisin ,
producirn un organismo transgnico y que
lo transmita a las siguientes generaciones.
CLONACION DE ANIMALES
POR DISGREACION DE CELULAS
EMBRIONARIAS
Se basa en el mismo principio por el que
nacen gemelos de forma natural.
Se pueden separar las clulas de un
embrin en diferentes estados de
desarrollo, desde el estado de 2 clulas
hasta el estado de mrula.
Cada clula separada puede funcionar
como un zigoto que puede desarrollarse
para dar un individuo completo.
 POR TRANSFERENCIA
NUCLEAR
Se toman clulas embrionarias en fase de
mrula o blstula, obtenidas por
disgregacin, se cultivan in vitro, y
despus se transfieren a ovocitos a los que
se les ha quitado el ncleo.
Se provoca la fusin de las dos clulas
animales de modo que el ncleo de la clula
embrionaria quede en el interior del
ovocito, pudiendo ste empezar a
funcionar como un zigoto.
Transgenesis
Un gen hbrido que contiene el
gen humano que codifica la
sntesis de una protena de
inters biolgico junto con el
promotor del gen que codifica
una protena de la leche de
rata, se introducen por
microinyeccin en un vulo de
cerda fecundado.
El desarrollo de ese vulo da
lugar a un animal transgnico
que tiene en todas sus clulas el
gen hbrido. Debido al promotor
elegido, ese gen solamente se
expresa en la glndula mamaria
de la cerda induciendo la
produccin de la proteina
humana en la leche
PROYECTO GENOMA
HUMANO
MAPAS GENETICOS

MAPAS FISICOS
HASTA LA PRXIMA