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UMA VISO GERAL SOBRE CULTURAS MISTAS

MICROBIANAS EM PROCESSOS BIOTECNOLGICOS:


DESENVOLVIMENTO E APLICAO

Discente: Leonardo Peixoto Carvalho


1. Introduo

2. Vantagens e Desvantagens das Culturas Mistas

3. Interaes Entre Microrganismos na Natureza

4. Desenvolvimento de Cultura Mista em Laboratrio

5. Aplicaes De Culturas Mistas Nas reas de


Biotecnologia

6. Consideraes Finais
Introduo 3

A comunidade microbiana presente em seu habitat natural se


encontra em constante interao com fatores ambientais e biolgicos.

Temperatura Interaes
Falta de
nutrientes

Adaptar seu metabolismo s condies onde se


desenvolve.
4
Fontes de carbono,
glicose, nitrognio, sais
minerais;

Sem competio.

Caractersticas adquiridas em
interao so perdidas.
5
Muitos processos industriais utilizam culturas puras de
microrganismos;

A cultura mista utilizada a muito tempo na sociedade.


6
O desenvolvimento de culturas mistas tem demonstrado
grandes vantagens.

Maior rendimento Maior estabilidade

Utilizao de Produo de novos


subprodutos metabolitos

A compatibilidade entre as linhagens um fator crtico na


cultura mista.
Objetivo 7

Foi analisar o uso e desenvolvimento de culturas mistas;

Sua aplicao em sistemas de cultivos submersos;

Sua agregao de valor de biomassas agroindustriais;

Aplicao em processos biotecnolgicos.


Vantagens e Desvantagens 8
Desvantagens 9
Interaes entre Microrganismos 10

na Natureza
Tipos de interao entre os
Cultivo misto
microrganismos

Competio Antagonismo

Predao Comensalismo

Parasitismo Mutualismo
Competio 11

Indivduos da mesma ou espcies diferentes buscam o mesmo


recurso.

Quantidade limitada

Desenvolvimento instvel.

Microrganismos que apresentam os


mesmos requisitos nutricionais.
Predao 12

Protozorios

Bactrias
Predador Presa Mixobactrias Bdellovibrio

O uso de microrganismos predadores em processos industrias geralmente


ocorre em tratamentos de efluentes.

Segundo Piedade (1994) os protozorios melhoram a qualidade do


efluente atravs da predao de grande parte das bactrias presentes
no meio.
Parasitismo 13

Parasita Hospedeiro

Ectoparasitas: onde eles vivem sobre seus hospedeiros.

Endoparasitas: em que eles vivem dentro de seus


hospedeiros.
Culturas mistas;

Podendo ser aplicadas em


processos.
Antagonismo 14

Antagonismo uma interao na qual uma espcie


inibida ou eliminada por outra espcie substncias
toxicas.
Weindling (1934) observou que o fungo Trichoderma um excelente
antagonista, pois ele tem a capacidade de sintetizar substncias txicas no
meio.

Martins-Corder e Melo (1998) testaram a capacidade


antagnica de Trichoderma spp. ao fungo Verticillium
dahliae.
47 isolados de Trichoderma spp.

7 apresentaram antagonismo.
Trichoderma spp. Verticillium
Comensalismo 15

Em uma interao comensal o benefcio observado em apenas um


organismo, porm no h nenhum tipo de prejuzo com o outro
organismo.

Fungos Bactrias

Celulose Glicose
Mutualismo 16

Na interao mutualstica ambos os organismos envolvidos


se beneficiam.

Cianobactrias:
Fungos: umidade
compostos
e suporte
fotossintticos
Tabela 1. Efeito das interaes nos microrganismos. 17
(0): as espcies no so afetadas,
(+): a vida da espcie se tornou possvel ou melhorou,
(-): a vida da espcie foi reduzida ou tornou-se impossvel.
Interaes Espcie A Espcie B
Competio - -
Antagonismo (B antagonista inibe A) - 0
Parasitismo (A parasita B) + -
Predao (A o predador de B) + -
Comensalismo (A comensal e B o + 0
hospedeiro)
Mutualismo + +
Dajoz, 2005.
Desenvolvimento de Cultura 18

Mistas em Laboratrio
Antes de aplicar a co-cultura um processo industrial deve-se
realizar alguns testes.

Conhecer melhor os microrganismos

Os testes foram propostos atravs das observaes feitas por


Porter (1924) e Stahl e Christensen (1992).

Determinao da taxa de Teste de compatibilidade


crescimento in vitro
Determinao da Taxa de Crescimento 19
Evitar que um microrganismo se desenvolva mais rapidamente
que o outro.

Rpido: 3 dias

Lento: + 3 dias

Molla (2001), avaliou da taxa de crescimento de seis estirpes


de fungos filamentosos:
T. harzianumS, T. harzianumC, 7 dias RW-P1512,
M. hiemalis P. chrysosporuim 2094. A. versicolor.
Teste de Compatibilidade in vitro 20

Oposio direta entre as estirpes avaliadas

Bactria-fungo; Fungo-fungo;

Bactria-bactria; Fungo-levedura;

De acordo com Skidmore e Dickinson (1976), Sthal e Christensen (1992),


Molla (2001) e Mohammad et al., (2011) podem ser observados cinco tipos de
interaes entre os microrganismos
Tabela 2. Tipos de interaes entre microrganismos. 21
Interao Definio
Crescimento em que ambos os microrganismos
1 Entrelaamento mtuo
crescem sem sinal macroscpico de interconexes.

Crescimento onde o microrganismo cresce acima ou


2 Entrelaamento mtuo parcial
abaixo do outro sem qualquer zona de inibio.

Um microrganismo cresce sobre o outro e comea a


3 Invaso/substituio
consumi-lo, podendo substitu-lo.

Os microrganismos aproximam-se um do outro at


4 Inibio (ponto de contato) com uma linha de demarcao de 1 a 2 mm, entre
as duas colnias claramente visveis.
5 Inibio (a distncia) Inibio a uma distncia > 2 mm.
Esquematizao das interaes entre
22
duas linhagens de microrganismos

1- Entrelaamento 2- Entrelaamentos mtuos 3a- Invaso/substituio


mtuo parciais (fase inicial)

3b- Invaso/substituio 4- Inibio (ponto de contato) 5- Inibio (a distncia)


(fase final)
Adaptado de Mohammad et al., 2011
Inibio ao ponto de contato 23

Verso Reverso
Invaso/ Substituio Fase 24

Inicial

Verso Reverso
Invaso/ Substituio Fase Final 25

Verso Reverso
Entrelaamento Mtuo 26

Verso Reverso
Interaes entre Fungos 27

Bertrand et al., (2013) observaram os tipos de interaes entre os


fungos Aspergillus clavatus, Cladosporuium sp., Fusarium sp. e
Hohenbuehelia reniforms

Adaptado de Bertrand, 2013


Microscopia eletrnica de varredura das 28
interaes

(A) Aspergillus niger (b) Panus tigrinus M609RQY (c) inibio no ponto entre A. niger e
Trichoderma viride e (d) inibio a distncia P. tigrinus M609RQY e T. viride
Microscopia eletrnica de varredura das 29
interaes

a) b)
a) A. niger/ BC-4/1 (inibio ao ponto de contato), b) P. ostreatus. / BC-9
(invaso / substituio fase inicial).
Aplicaes de Culturas Mistas nas reas 30
de Biotecnologia

Tratamento de Efluentes Enzimas Alimentos e bebidas

Frmacos Bioplsticos
Industria Farmacutica 31

WHITT et al., 2014 props o cultivo misto entre o fungo Fusarium


pallidoroseum e a bactria Saccharopolyspora erythraea.

F. pallidoroseum - controle
Equisetina

Ofiosetina
Cultivo misto
Palidorosetina A Palidorosetina B

N-desmetil-
ofiosetina
S. erythraea - controle
Industria Alimentcia 32
Aumentar a produo de certo produto; st
e
Melhorar as caractersticas particulares dos produtos. de res
etil
o
Mateus (2013) props um sistema de cultivo misto entre
duas leveduras

Saccharomyces cerevisiae Hanseniaspora guilliermondii


(Sc) Sacchamoryces cerevisiae, (Hg) UTAD222
Hanseniaspora guilliermondii, (Sc-Hg) S.
cerevisiae- H. guilliermondii.
Industria Alimentcia 33

NGuessan et al. (2010), props um sistema de cultivo misto


entre as leveduras Candida tropicalis e Saccharomyces
cerevisiae.
C. tropicalis S. cerevisiae
Taxa de etanol (%)

C. tropicalis + C. tropicalis + C. tropicalis + C. tropicalis +


S. cerevisiae S. cerevisiae S. cerevisiae S. cerevisiae
(2:1) (25:4) (1:4) (2:3)

Tempo de Fermentao (h)


Tchapalo Sorgo
Industria Enzimtica 34

A produo e aplicao de enzimas um dos principais setores


na indstria biotecnolgica;

Os processos industriais enzimas


Menor impacto ambiental Menor consumo energtico

Cultivo misto podem ser uma alternativa para baratear a


produo de enzimas industriais.
Industria Enzimtica 35

Ma e Ruan, (2015) realizou o cultivo misto de fungos Coprinus comatus

Atividade ligninoltica (U/mL)


Atividade hidroltica (IU/mL)
Atividade hidroltica (IU/mL)

Atividade ligninoltica (U/mL)


e Trichoderma reesei.

Lignoceluloltic Celuloltica Xilanoltica


a (lacase) (CMCase) (xilanase)
Atividade hidroltica (IU/mL)

Atividade ligninoltica (U/mL)


2,6
x
(A)C. comatus,
(B) T. reesei,
(C) Co-cultura
Industria Enzimtica 36

Nunes et al., (2015) realizou um cultivo misto entre os fungos


Ganoderma lucigum e o Trichoderma sp;

Co-cultivo apresentou menores valores que as culturas puras.

m o
g o n is
a
An t
Enzimas Celulolticas 37

As enzimas celulolticas so o terceiro grupo de enzimas mais


utilizadas nas industrias.

Indstria txtil Indstria de


detergentes
Indstria Indstria de
alimentcia papel e celulose

Capacidade de converso de biomassa em etano

Combustveis fsseis
Enzimas Celulolticas 38

Brijwani e seus colaboradores (2010), utilizaram os fungos


Trichoderma reesei e Aspergillus oryzae em co-cultura.
FPase CMCase -glucosidases

Tabela 3: Comparao das atividades enzimticas em cultura pura e cultura mista


Microrganismo Celulase Totais (U.g- -glucosidases Endoglucana
s 1
) (U.g-1) se (U.g-1)

T. reesei 6.55 6.30 60.17


A. Oryzae 6.70 9.45 68.36
Co-cultura 10.78 10.71 100.67
(Adaptado de Brijwani et al., 2010)
Produo de Polihidroxialcanoatos (PHAs) 39
Bioplstico

PHAs so polisteres sintetizados em diversas bactrias na forma de


grnulos intracelulares, como um material de reserva energtica.
A sntese de PHAs ocorre quando um nutriente essencial para a
Similarcomo
multiplicao celular ao o nitrognio,Plsticos
fsforo, de origem
enxofre ou oxignio
polipropileno
est limitado e se tem excesso de petroqumica
fonte de carbono.

Biby, (2002) afirma que a produo de PHAs custa 9x mais que a


produo de polipropileno.
Produo de Polihidroxialcanoatos (PHAs) 40
Bioplstico

Fotomicrografia eletrnica de grnulos de PHAs dentro da clula bacteriana


Cultura mista tratamentos de efluentes.

Bactrias
Condies transientes na
acumuladoras de
disponibilidade de carbono ou oxignio.
fsforo

Reserva
Fsforo energtica

(Serafim, 2003).
Bioconverso de Resduos 41
Industriais
Ngome,
Os resduos
2013industrias
realizou so
o cultivo
os maiores
misto entre
responsveis
as bactrias
pelos
Propionibacterium
impactos ambientas. freudenreichii PS-1 e Lactobacillus
helveticus em resduos de laticnio.
Laufenberg, et al. (2004) os resduos industriais podem ser
convertidos em produtos comerciais ou em matrias-
cido propinico cido actico
primas.

2,1978 g acidez total


1,1998 g acidez total
Bioconverso de Resduos 42
Industriais
Resduos slidos compostagem e silagem.

5,80%
Joshi e Sandhu (1996) utilizaram polpa de maa para
%.
residual, com o intuito de aumentar seu teor proteico. 18,50
(Saccharomyces cerevisiae, Candida utilis e Torula
utilis)
Rao animal
Monteiro et al. (1991) tambm avaliou o aumento 1,59%
proteico na biomassa de cana-de-acar. para
(Trichoderma reesei e Rhizopus oligosporus) .
7,70%
Consideraes Finais 43

Os estudos de cultivos mistos no esto totalmente


desenvolvidos;

Se utilizado de maneira correta a co-cultura s tem a


contribuir;

O cultivo misto empregado nas mais diversas reas


industrias, porm a regulao para utiliza-los mais rigorosa.
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