Clase 18

15 de junio 2015
Prof. Katiuska Ramos
 Titulaciones
espectrofotomtricas
apotransferrin + 2Fe3+
(Fe3+)2transferrin
colorless red (465 nm)
 Titrations
Spectrophotometric Titrations

1.) Use Absorbance of Light to Follow Progress of Titration

Example:
- Titrate a protein with Fe3+ where product (complex) has red color
- Product has an absorbance maximum at 465 nm
- Absorbance is proportional to the concentration of iron bound to protein

Analyte titrant (red)

(colorless) (colorless)

As Fe3+ binds protein

solution turns red

 Titrations
Spectrophotometric Titrations

1.) Use Absorbance of Light to Follow Progress of Titration

Example:
- As more Fe3+ is added, red color and absorbance increases,
- When the protein is saturated with iron, no further color can form
- End point intersection of two lines (titrant has some absorbance at 465nm)

When all the protein is bound to Fe3+,

no further increase in absorbance.

As Fe3+ continues to bind protein

red color and absorbance increases.
 Titrations
Spectrophotometric Titrations

1.) Use Absorbance of Light to Follow Progress of Titration

Example:
- As more Fe3+ is added, concentration changes due to dilution
- Need to correct absorbance for dilution.

total volume
Corrected absorbance observed absorbance
initial volume

Total volume changes after each addition

 Si el soluto, el titulante o el producto
absorbe radiacin, las medidas de
absorbancia a una longitud de onda
fija, pueden utilizarse para localizar el
punto final de la titulacin.
Para mayor simplicidad, generalmente
se escoge una longitud de onda, donde
slo uno de estos componentes absorba,
aunque si los otros componentes
absorben tambin es posible seguir la
valoracin y determinar el punto final.
 Las curvas de titulacin presentan
formas diferentes dependiendo de la
especie absorbente que se escoja para
seguir la titulacin y de si una o varias
especies son absorbentes a la longitud
de onda escogida.
Spectrophotometric titration
Lets consider the analysis of hydrogen
peroxide with potassium permanganate in
an acidic solution.
The potassium permanganate or MnO4- is
the only colored substance in the
reaction. (It can serve as its own
indicator.)
How would the absorbance change as
titrant was added?
PGCC CHM 103 Sinex
5H2O2 + 2MnO4- + 6H+ 5O2 (g) + 2Mn+2 + 8H2O
purple

Notice you do not need to have a

data point at the equivalence point.
Equivalence point located by
absorbance

extrapolation of the two lines.

Equivalence point

MnO4- reacting,
color disappears xs MnO4-
accumulates

Volume of titrant (mL KMnO4)

PGCC CHM 103 Sinex
a a) Donde solo absorbe el titulante

b b) Donde el producto de reaccin absorbe

c) Donde las especies se convierten en

c productos no absorbentes

d) Donde una especie coloreada se

d convierte a un producto incoloro por un
titulante coloreado
 Experimentalmente, las medidas de
absorbancia se realizan despus de
cada adicin del titulante, el cual se
debe utilizar de una concentracin
20 o mas veces mayor que la del
analto para minimizar los efectos
que sobre la absorbancia tiene el
aumento del volumen de la solucin
o efectos por dilucin.
C
o
re
c
td
a
b
s
oitn
ra
n
c
e o
aeo
lv
o
u
m b
s
e
rvd
titulante,donde:

a
b
s
o
ra
n
c
e
Se construyen grficas de:
absorbancia corregidade la especie
absorbente,A* vsVolumen de

A* = [AEXPERIMENTAL O LEIDAx ( VINICIAL O DE ALICUOTA+ VTITULANTE) / VINICIAL O

ALICUOTA]
 Las grficas obtenidas constan de
dos segmentos de rectas, uno
anterior y otro posterior al punto
estequiomtrico, que se extrapolan y
en el punto de interseccin se
localiza el punto final.
Titulacin de Mg2+ (o Ca2+) con EDTA
Mg2+ + HY3 MgY2 + H+
Espectro de Absorcin de la camalgita

Punto final de la reaccin

MgIn + HY3 HIn2 + MgY2

MgIn
Red form
HIn2
Blue form

Monitor absorbance at
wavelength with maximum
change in absorbance.

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Titulacin de Mg2+ (o Ca2+) con EDTA
Mg2+ + HY3 MgY2 + H+
42.55 mL

Ca 2 HY 3 2
CaY H Adding excess EDTA

Indicator present as complexed red form MgIn Indicator present as free blue form HIn2

Endpoint reaction:
MgIn HY 3 2
HIn MgY 2

MgIn + HY3 HIn2 + MgY2

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