CITOMETRA DE FLUJO

Pa Cern
Nataly Sotomayor
Seccin 6
 Estructura Bsica de un Citmetro de
Flujo
Sistema hidrulico o fludico:

Inyeccin de la muetra
Cmara de flujo

Sistema ptico

Fuentes de luz
Detectores
Sistema de filtros y espejos

Sistema electrnico

Amplificador y convertidor
Sistema informativo
 Sistema Hidrulico o Fludico.
Inyeccin de la muestra:
De presin diferencial: Es el ms frecuente, pero no permite determinar la velocidad
de flujo de la muestra y la concentracin celular.
Volumtrico: Se puede ajustar la velocidad de flujo, y el lavado entre muestras es
ms complicado y requiere ms tiempo.
Cmara de Flujo:
o Constituido por 2 fluidos:
Uno que contiene en suspensin
a la muestra
Otro que lo envuelve con el fin
de otorgarle estabilidad.
 Sistema ptico

Fuente de Luz:
Constituida por un haz de luz
Laser
La luz emitida excita los
fluorocromos
Dispersin de la luz informa
caractersticas celulares.
 Detectores:
FORWARD SCATTER
Es la parte de la luz que se dispersa en la direccin del haz de luz
incidente.
La magnitud de esta dispersin constituye la primera medida importante
en la citometra, ya que es proporcional al tamao de la clula.
 SIDE SCATTER
La complejidad de la clula puede hacer que muchos fotones sean
dispersados.
Esta dispersin es recogido por un detector especfico situados en un
ngulo de 90 de la luz del laser incidente.
Entrega una idea de la variabilidad de clulas en una poblacin.
 FLUORESCENCIA:
Las clulas pueden ser marcadas especficamente con anticuerpos
conjugados con molculas fluorescentes, permitiendo que slo las
clulas que exhiban cierto marcador queden marcadas.
Esta fluorescencia emitida es recogida en la misma direccin que el side
scatter, aunque en este caso, los fotones atraviesan una serie de filtros
adaptados a la longitud de onda de la fluorescencia que se quiere
detectar, antes de llegar al detector correspondiente.
CONCEPTOS ESCENCIALES EN FLUORESCENCIA:

Fluorocromo: Molcula capaz de absorber fotones y emitir fotones de

menor energa (mayor longitud de onda).
Fluorforo: Parte del fluorocromo responsable de la emisin de
fluorescencia.
Marcador fluorescente o sonda fluorescente: Fluorocromo diseado para
unirse a una regin especfica de una muestra biolgica o responder a
un determinado estmulo.
-Marcadores fluorescentes de unin covalente: Isoticianato de fluorecena,
picoeritrina, rodamina, rojo texas, cianinas.
-Marcadores fluorescentes de unin no covalente: Hoechst, DAPI, Naranja
de acridina, yoduro de propidio, rh12.
 SISTEMA DE FILTROS Y ESPEJOS
FILTROS OPTICOS: Son aquellos que seleccionan las longitudes de onda que deja
pasar hacia el detector. Estos pueden ser:
De interferencia
De absorcin:
-Filtros Band Pass : Dejan pasar un rango de longitudes de onda (Por ej: 620 640
nm)
-Filtros Short Pass: Dejan pasar por debajo de una longitud de onda determinada
( Por ej: < 575 nm)
-Filtros Long Pass: Dejan pasar por encima de una longitud de onda determinada
(Por ej: > 520 nm)
 Sistema Electrnico

AMPLIFICADOR DE SEALES y CONVERSIN

ANALGICA-DIGITAL:
Transformacin de seal luminosa en pulso elctrico.
SISTEMA INFORMATICO:
Permite el anlisis multidimensional sensible y objetivo en cada clula
Representaciones
 La tcnica se realiza en tres etapas independientes:
-Fase precitometra: preparacin de los reactivos, preparacin de las clulas, diseo
del protocolo y coloracin de las clulas con los reactivos fluorescentes.
-Fase de citometra de flujo: involucra el procesamiento de las clulas marcadas y la
recoleccin de los datos para cada una de las medidas (parmetros) realizados en
cada clula individual.
-Fase de anlisis: anlisis de los datos. Actualmente hay sistemas informatizados
que brindan una informacin automtica de las poblaciones celulares que se
analizan.
Aplicaciones de la Citometra de Flujo
Cmara de neubauer
Citometra de Flujo VS Cmara de Neubauer
(esto es opcional, la tabla estaba en otro power)
Aplicacin al SIDA