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Mtodo: Lisado de Amebocitos de Limulus(LAL)

Reactivo LAL
Mtodo in vitro que detecta
con alta sensibilidad la
presencia de endotoxinas
bacterianas.

es el extracto acuoso de
amebocitos extrados de la
sangre del cangrejo de herradura

Mtodo para la
cuantificacin de
endotoxinas bacterianas.
Eliminar los pirogenos de todo material de vidrio y otros materiales termoestables en
APARATO un horno de aire caliente, mediante proceso validado. (minimo 30 minutos a 250 C).
Si se emplean materiales de plastico deben estar exentos de endotoxinas y no
S interferir con la prueba

REACTIVOS Lisado de Amebocitos: Un producto liofilizado obtenido a partir de un lisado de


Y amebocitos cangrejo herradura, Limulus polyphemus.
Agua para Prueba de Endotoxinas Bacteriana: Agua para inyeccin o agua
SOLUCIONES producida por otros procedimientos y que no reaccione con el lisado empleado.
DE PRUEBA

Solucion Madre del Estandar de Endotoxina: Se prepara a partir de un estandar de


Referencia de endotoxina USP .
PREPARACION Soluciones estandar de endotoxina: Dilucion de Solucion Madre del Estandar de
DE Endotoxina, usando agua para inyectables.
Soluciones muestra: Disolviendo o diluyendo los medicamentos. Si es necesario
SOLUCIONES ajustar el pH, generalmente 6-8
Tcnica de Gelificacin
Mtodo original descrito por la
USP

Propiedad que tiene el lisado de amebocitos del Limulus


polyphemus de gelificar en presencia de endotoxinas de
bacterias Gram negativas.

Consiste en la adicin de 0,1 mL de lisado y 0,1 mL de producto a evaluar en tubos


despirogenizados, que se colocan al bao Mara a c y luego se invierte el tubo con
cuidado a 180.

Positivo: forma un gel Negativa : si la solucin


intacto permanece lquida
Tcnica Turbidimtrica
se basan en el desarrollo de turbidez despus de la reaccin de un sustrato
endgeno.
Este mtodo mide el incremento de la turbidez que
precede la formacin del gel de la prueba de
Gelificacion.

Se llevan acabo a temperatura 37C

Los mtodos turbidimtricos son los ms sensibles, capaces de detectar hasta 0,001 UE/mL. Y
presentan 2 variantes

Punto final turbidimtrico: Esta basado


en la relacin cuantitativa entre la Cintica turbidimtrica: Mide el tiempo que
concentracin de endotoxinas y la requiere la mezcla de reaccin para
turbidez de la mezcla de reaccin al desarrollar un porcentaje de turbidez
final de la incubacin. determinada.
Tcnica Cromognica

ensayo cintico cuantitativo para la deteccin de endotoxinas


bacterianas.

Se mezcla una muestra con el reactivo de LAL/Substrato, se coloca en un lector


de placas con incubadora y se monitorea el desarrollo de un color amarillo a
travs del tiempo.

La naturaleza cromognica de este mtodo la que la hace la forma ms


apropiada de ensayo para parenterales de bajo volumen.
BIBLIOGRAFIA
Perdomo R., Montero V. Estandarizacin del ensayo del lisado de amebocitos de Limulus (LAL):: mtodo
de gelificacin. Rev Cubana Farm [revista en la Internet]. 2004 Abr [citado 2016 Nov 19] ; 38(1): 1-1.
Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-75152004000100004&lng=es
.

Jenny Solis, Validacin de la prueba de endotoxinas bacterianas LAL por metodo de Gel Clot en
clindamicina 600mg inyectable. Peru. Disponible en: http://
cybertesis.unmsm.edu.pe/xmlui/bitstream/handle/cybertesis/2322/Solis_aj.pdf?sequence=1
Laboratorios de Cumplimientomicrobiolgico. Prueba de Deteccin de Endotoxina
Bacteriana. [citado 2016 Nov 19]. Disponible en: http
://www.mclmicro.com/es/servicios/prueba-de-deteccion-de-endotoxina-bacteriana-lal-bet/