Dra.

Judith Garca de Rodas

Saln 207
El estudiante podr:
Definir conceptos de: cultivo, enzimas
restrictivas, ADN recombinante,
vectores, clonacin, hibridacin celular
y molecular.

Explicar la importancia del de la

recombinacin gentica en la
investigacin medica.
 La biotecnologa tiene diversas aplicaciones: en la alimentacin, la prevencin
de enfermedades hereditarias, la terapia gnica y la produccin de sustancias
teraputicas y la elaboracin de vacunas.

A partir del cultivo de microorganismos, se obtienen importantes sustancias

como la penicilina (extrada de un hongo), la insulina (extrada de bacterias-
1982)).

Se han obtenido a travs de plantas y animales transgnicos, el factor VIII, que

interviene en la coagulacin de la sangre,

Produccin de hormonas humanas para tratar muchas enfermedades

carenciales, como el enanismo por dficit de hormona del crecimiento,

Las vacunas se obtienen cultivando virus en clulas vivas en el laboratorio, los

cuales se matan o se debilitan para preparar vacunas contra la hepatitis B,
contra el sida y el paludismo.
Comprende un conjunto de tcnicas biotecnolgicas entre las que
se destacan:
La tecnologa del ADN recombinante: que permite aislar y
manipular un fragmento de ADN de un organismo para introducirlo en
otro.
Secuenciacin del ADN: permite conocer secuencia de los
nucletidos que forman parte de un gen.
Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR): permite aumentar el
nmero de copias de un fragmento determinado de ADN, a partir de una
mnima cantidad de muestra
Esta tecnologa es muy
importante para la
investigacin en biologa
celular y molecular.
 Proceso mediante el cual, clulas procariotasoeucariotas,
pueden cultivarse en condiciones controladas.

Los "cultivos celulares" hacen referencia a la siembra de clulas aisladas de

eucariotaspluricelulares, especialmenteclulas animales., para cultivo de
rganos y tejidos

Cultivo de clulas
humanas en medios
Medios de cultivo enriquecidos con
slidos para aminocidos, vitaminas y
siembra de las factores de crecimiento
clulas
(Variedad de agares)
Procesamiento de cultivo de clulas
madre
Corte del ADN en posiciones Seleccin del
ADN con el
precisas (secuencias palndromes) Vector de gen de inters
con endonucleasas de restriccin, clonacin
Corte con enzima
de restriccin
Unin de fragmentos por la
ADNligasa,

Seleccin de un fragmento de ADN

capz de autoreplicarse,

Insertar los vectores de clonacin a

clulas especficas que contienen Plsmido
toda la maquinaria gentica para la recombinado Cromosoma
bacteriano
expresin de la informacin contenida
en el vector

Seleccin o identificacin de las

clulas que contienen al ADN Plsmido dentro
de la bacteria
recombinante. cultivo de bacteria
recombinada
 Manipulacin del ADN
Las 2 molculas de ADN
son digeridas con la
misma endonucleasa de
restriccin,
La enzima corta
extremos
complementarios que
se aparean,
La ligasa repara hebras
cortadas de ADN y
rehace las nuevas
bicatenarias.
Catalizan la hidrlisis de los enlaces fosfodester de los cidos nucleicos y son
capaces de cortar ambas hebras del DNA en sitios especficos
Ciertas cepas de E. coli degradan (cortan) el DNA de ciertos virus fagos
infectivos, a menos que los cidos nuclecos presenten metilacin (adicin de
grupos metilo) en algunos residuos de adenina o citosina del sitio de corte.
Corte de hebras por enzimas restrictivas

extremo o adhesivo
o pegajoso

Secuencia palndrome se
lee igual en ambos
sentidos
 Son molculas que transportan y replican fragmentos de ADN que
llevan insertados.

Plsmidos son
molculas de ADN
extra cromosmico
de forma circular en
bacterias

Cosmidos son
Bacterifagos: son virus vectores sintticos que
que sirven de portadores de combinan
Material gentico a bacterias caractersticas del fago
lambda que posee
extremos cohesivos o
regiones cos
Partculas infectantes de bacterias,

Algunos (Lambda y M13) han sido utilizados por bilogos moleculares, que
han modificado oportunamente sus genomas.

Pueden tener efecto ltico o lisognico en las bacterias.

Actividad de los virus bacterifagos
 CLON significa copia exacta de una clula o molcula de ADN,
Las secuencias a clonar se introducen en clulas bacterianas
por medio de vectores.

Losplsmidos, los virus bacteriofagos y los csmidos se usan

como vectores;

Para clonar genes especficos se elaboran bibliotecas genicas

que son coleccines de fragmentos deADN genmicos,
clonados en vectores (plsmidos, bacterifagos o csmidos),
que representan el genoma entero del organismo.
Los csmidos son son vectores artificiales obtenidos de
levaduras y de bacterias.

Las bibliotecas decDNA representan la coleccin completa de

losmRNA que se sintetizan en un momento en una clula dada.
 Utiliza
microorganismos
modificados
geneticamente, asi
como plantas y
bacterifagos) animales
transgnicos para
elaboracin de
antibiticos,
hormonas y variedad
de sustancias de
utilidad para el
hombre.
 Aislamiento del ADN de las 2 fuentes diferentes
Tomar en cuenta la complementariedad de bases
pricas y pirimdicas para la formacin de puentes de
hidrgeno
Aplicar enzimas de restriccin, para el corte del ADN e
insercin de nuevo ADN
Utilizacin de plsmidos para la clonacin
La hibridacin molecular entre ADN-ADN y ADN-ARN
En la transcripcin inversa que permite la sntesis de
ADN a partir de ARNpara obtener cADN (ADN
complementario)
La necesidad de primers o cebadores para la sntesis
de las nuevas cadenas.

 El desarrollo de la Genmica y
la Protemica, as como la
aplicacin de la Biotecnologa a
la Medicina, ha permitido
identificar genes alterados
productores de enfermedades y
elaborar frmacos para reducir
la incidencia de patologas
Lainvestigacin biotecnolgica genticas.
permiti antes de 2010, conocer
la predisposin que tiene cada
individuo a padecer un tipo de
cncer y detectar tumores antes
de que existan, por la posibilidad
de examinar los mas de 30.000
genes que tiene cada ser
humano.
Actividad de los virus bacterifagos
 Tcnica que permite la formacin de
cadenas complementarias de ADN-ARN

Se basa en cambios de temperatura

para desnaturalizar el ADN y separar las
cadenas.

Si baja la temperatura se vuelven a

aparear las cadenas complementarias.
Algunas se aparean con ARN (hibridacin)
 Tcnica que permite la formacin
de cadenas complementarias de
ADN-ARN

Utiliza altas temperaturas para

desnaturalizar el ADN y separar las
cadenas.

Si baja la temperatura se vuelven a

aparear las cadenas
ADN complementarias. Algunas se
aparean con ARN y se produce la
hibridacin
ARN

Hibrido ADN-ARN
 Hibridacin in situ
Utilizando tcnicas inmunohistoqumicas se puede conocer la localizacin
precisa de los tejidos y clulas que estn expresando los genes de
secuencia complementaria a las sondas utilizadas.

En esta categora destaca el

FISH, tcnica de hibridacin in
situ, donde las sondas son
secuencias de ADN marcadas
que se unen a secuencias de
ADN conocidas dentro del
cromosoma
Hibridacin celular:
En biotecnologa la hibridacin
somtica es el proceso por el cual se
obtienen plantas hbridas a partir de la
fusin de clulas o de
protoplastos derivados de clulas
somticas .
Esta tcnica surgi hace unos 30 aos
como una herramienta muy promisoria
para sortear problemas de
incompatibilidad precigtica

Esta tecnica demostr ser til en la mejora

gentica de plantas, principalmente por permitir la
introduccin limitada de genes de especies silvestres en
los cultivos. Se utiliza, por ejemplo, cuando se quiere
transferir resistencia a enfermedades o tolerancia a
estreses
Transcriptasas inversas son
utilizadas para obtener ADCc a
partir de ARNm

Segmentos de oligonucletidos
contienen endonucleasas de
restricin

El ADNC es incorporado a un
vector adecuado
ADN c clonado
Reaccin en cadena de la
polimerasa
El ADN complementario o ADNc es
un ADN de doble cadena. Se
sintetiza a partir de una hebra simple
de ARNm maduro. Se suele utilizar
para la clonacin de genes propios
de clulas eucariotas en
clulas procariotas, debido a que,
dada la naturaleza de su sntesis,
carece de intrones
 Acidos nucleicos: biomolculas formadas por macropolmeros de
desoxiribonucletidos, o ribonucletidos.
ADN desnudo: ADN desprovisto de cubierta protenica o lipdica
para transcripcin, replicacin o transferencia de genes.
ADNr= ADN recombinante: molcula de ADN formado por recombinacin de
fragmentos de ADN de orgenes diferentes.
ARNHn= ARN heterogneo nuclear = ARNmprimario: localizado en el ncleo que
presenta intrones y exones.
Biologa Molecular: parte de la biologa que trata de los fenmenos biolgicos a nivel
molecular.
Biotecnologa: toda aplicacin tecnolgica que utilice sistemas biolgicos y
organismos vivos o sus derivados para la creacin o modificacin de productos o
procesos en usos especficos.
Clulas sexuales: clulas que al unirse forman el huevo fertilizado, en la especie
humana los gametos.
Clones: grupo de clulas o de organismos de idntica constitucin gentica entre s de
ancestro comn del que proceden por divisin binaria o por reproduccin asexual.

Acidos nucleicos: biomolculas formadas por macropolmeros de

desoxiribonucletidos, o ribonucletidos.
ADN desnudo: ADN desprovisto de cubierta protenica o lipdica
para transcripcin, replicacin o transferencia de genes.
ADNr = ADN recombinante: molcula de ADN formado por recombinacin de
fragmentos de ADN de orgenes diferentes.
ARNHn = ARN heterogneo nuclear = ARNm primario: localizado en el ncleo que
presenta intrones y exones.
Biologa Molecular: parte de la biologa que trata de los fenmenos biolgicos a nivel
molecular.
Biotecnologa: toda aplicacin tecnolgica que utilice sistemas biolgicos y organismos
vivos o sus derivados para la creacin o modificacin de productos o procesos en usos
especficos.
Clulas sexuales: clulas que al unirse forman el huevo fertilizado, en la especie
humana los gametos.
Clones: grupo de clulas o de organismos de idntica constitucin gentica entre s de
ancestro comn del que proceden por divisin binaria o por reproduccin asexual.
Hibridacin: proceso de generacin de una molcula, clula u organismo combinado con
material gentico procedente de organismos diferentes.
Ingeniera gentica: conjunto de tcnicas utilizadas para introducir un gen extrao en un
organismo con el fin de modificar su material gentico y los productos de expresin.
Locus (loci): en gentica, punto de un cromosoma ocupado por un gen.
Manipulacin gentica: formacin de nuevas combinaciones de material hereditario por
insercin de molculas de cido nucleico, en el interior de virus, plsmido bacteriano u otro sistema
vector fuera de la clula.
Mapa gentico: diagrama descriptivo de los genes en cada cromosoma
Mosaico: individuo que presenta dos o mas lneas celulares genticamente diferentes como
consecuencia de una anomala en las primeras mitosis del cigoto.
Mutacin: cambio del material gentico, en un par de bases del ADN, en un gen especfico o en
la estructura cromosmica. En clulas somticas la mutacin constituye el origen de algunos
cnceres y de ciertos aspectos del envejecimiento.
Palindromos: segmentos capicas que resultan iguales vistos en uno u otro sentido, como el capica
alfabtico anilina, anita lava la tina (Se leen igual en ambos sentidos )
Plsmido: forma acelular de vida, fragmento circular de ADN bicatenario que contienen unos cuantos genes y
se encuentran en el interior de ciertas bacterias, se replican de forma in fundamental para la secuenciacin del
Proyecto Genoma Humano dependiente al ADN bacteriano y pueden pasar de unas bacterias a otras. Se utilizan
como vectores en manipulacin gentica.
RCP = Reaccin en cadena de polimerasa: tcnica de anlisis del genoma mediante la
amplificacin ilimitada de porciones especficas del ADN, fundamental para la secuenciacin del
Proyecto Genoma Humano
Sonda de ADN: fragmento de ADN conocido que se utiliza para averiguar si los cromosomas
investigados contienen la secuencia complementaria
Transcripcin inversa: proceso de sntesis de ADN complementario a partir del ARN genmico
de los retrovirus efectuado por la enzima transcriptasa inversa.
 Copia de DNA a partir de RNA
Obtenido con Transcriptasa inversa (enzima de
retrovirus)
Este DNA es complementario al RNA
Este DNA se clona
til para entender la estructura y funcin de los
genes
Vector: portador, que transfiere material gentico de un husped a otro.
Southern blot: metodo desarrollado para la deteccin de genes
especficos en el ADN celular.
Northern blot: se utiliza para identificar las cadenas de ARN de
secuencia semejante al ADN que se usa como sonda; a diferencia del tipo
Southern que se utiliza para identificar ADN, el mtodo Northern sirve para identificar ARN.
PCR: (reaccin en Cadena de la Polimerasa), utiliza un paso de hibridacin
de oligonuclotidos para la secuenciacin de ADN de un organismo.