Laboratorio de Diagnstico Clnico

Profesor: Francisco A. LAJO SOTO

INTRODUCCIN
Cocos Gram +: Comprende tres familias
segn el Bergeys Manual: Micrococaceae,
Streptococaceae y Peptococaceae. Siendo
de mayor inters clnico los gneros
Staphylococcus y Streptococcus (de la
primera y segunda familia
respectivamente).
Staphylococcus Catalasa positivos y
agrupados en racimos.
Streptococcus Catalasa negativos y
agrupados en cadenas.
Cocos Gram
Neisseria
Branhamella
Gnero Staphylococcus.
Concepto y caracteres generales.
En el Manual de Bergey: Pertenece a la familia
Micrococaceae (junto con los gneros
Micrococcus, Stomacoccus y Planococcus de
menor inters clnico)
Gnero Staphylococcus:
Cocos G+ inmoviles, aerobios y anaerobios
facultativos no formadores de esporas.
Agrupacin en racimo.
Catalasa positivos
Fermentan azcares
Forman parte de la flora normal de la piel y
mucosas.
Participan en procesos infecciosos (heridas,
intoxicaciones alimentarias, etc)
Gnero Staphylococcus.
Especies ms importantes
S. aureus (estafilococo dorado): La ms patgena.
Pigmento no difusible de color amarillo.
Produce coagulasa
Fermenta el manitol
Antgenos en su pared: Polisacrido A y Protena A
S. epidermis y S. saprophyticus:
Son oportunistas (presentes en el medio ambiente,
piel y mucosas)
No producen toxinas ni pigmento amarillo.
Coagulasa negativo y manitol negativo.
S. aureus. Accin patgena e inters clnico:
Antgenos, toxinas y enzimas
ANTGENOS DE SUPERFICIE
(PARED):
Polisacrido A y Protena A: Presentan
propiedades antifagocitarias e inducen a la
liberacin de factores quimiotcticos que
intervienen en la formacin de estructuras
pigenas (caracteristicas de las lesiones por
Staphylococcus).
S. aureus. Accin patgena e inters clnico:
Antgenos, toxinas y enzimas
TOXINAS:
HEMOLISISNAS: Exotoxinas citotxicas muy sensibles al calor
(lisan G.R. y afectan a macrfagos y leucocitos). En funcin del grado
de hemlisis enmedios de agar sangre a 37 C se clasifican:
Hemolisina : Hemlisis parcial
Hemolisina : Hemlisis total
Hemolisina : No producen hemlisis. Poca importancia patgena
aunque pueden intervenir en lesiones y heridas.
TOXINA EXFOLIATIVA: Exotoxina causante de eritemas.
LEUCOCIDINAS: Destruyen leucocitos (polimorfonucleares y
macrfagos) Gran resistencia.
ENTEROTOXINAS: Exotoxinas que producen vmitos y en menor
proporcin diarreas.
S. Aureus - Hemolisinas
S. Aureus - Hemolisinas
S. aureus. Accin patgena e inters clnico:
Antgenos, toxinas y enzimas
ENZIMAS:
COAGULASA: Coagula el plasma sanguneo (activa la
protrombina) facilitando procesos spticos
localizados
FIBRINOLISINAS: Efecto proteoltico, rompiendo los
cogulos de fibrina.
PENICILINASA (o -lactamasas) rompen el anillo -
lactmico de las penicilinas, por lo que provocan
resistencia a estos antibiticos.
S. aureus. Accin patgena e inters clnico:
S. aureus puede estar presente en la flora normal
en piel y mucosa nasal.
La patogenicidad depende de la mayor o menor
presencia de los factores de virulencia
(antgenos, toxinas y enzimas), pudiendo
afectar:
Piel y mucosas: Fornculos, infecciones de
heridas y quemaduras, procesos inflamatorios,
supurativos y pigenos, etc.
De forma generalizada : Trombos intravenosos
(por la coagulasa), septicemia, artritis,
endocarditis, pleuritis, etc. en individuos
debilitados.
Aparato digestivo: Cuadros de gastroenteritis
por intoxicacin alimentaria debido a la
enterotoxina producida cuando crece sobre
alimentos (sobre todo en cremas ricas en
hidratos de carbono).
No presenta fiebre (intoxicacin, no infeccin)
S Nauseas, vmitos y diarreas durante 1 a 2
das.
Se transmite por manipuladores portadores
sanos.
Aislamiento de Staphilococcus

Medio selectivo y diferencial:

Medio Manitol Salado (Medio
Chapman):
NaCl: Selectivo para Staphilococcus
spp (por su carcter halfilo)
Manitol: Fermentacin
Diferencial para S. aureus (manitol
+).
Tras obtener cultivo puro
Resiembra en Agar Sangre para ver
posible hemlisis y morfologa y
color de las colonias.
Caracteres Bioqumicos de Staphilococcus
Cocos G+ y catalasa +
Oxidasa negativos
Fermentan muchos azcares (glucosa, sacarosa, fructosa, etc.) con
produccin de cidos.
Indol
Gelatinasa +
Reducen NO3 a NO2
No poseen fibrinolisinas (excepto excepciones)
Coagulasa (salvo S.aureus)
Colonias grandes aplanadas y lisas con alfa y beta hemlisis en agar
sangre o agar chocolate
Caracteres Bioqumicos de Staphilococcus
Diagnstico bacteriolgico de
Staphilococcus
Toma de muestra con torunda estril
(heridas y lesiones superficiales) o por
puncin.
Tincin de Gram de la muestra
Aislamiento: Medio Chapman
Cultivo puro en Agar Sangre
Pruebas bioqumicas:
Coagulasa
Fermentacin de glucosa en medio O/F
Catalsa y gelatinasa
Sensibilidad a la novobiocina
Diagnstico bacteriolgico de Staphilococcus
Streptococcus
Cocos Gram +
Anaerobios facultativos
Agrupacin en cadenas
Catalasa
Oxidasa
Fermentan la glucosa (produccin de
cidos)
Solo algunas especies son patgenas.
Muchas especies son saprfitas de la
flora normal y patgenas oportunistas.
Clasificacin de Streptococcus
Se clasifican en funcin de:
Tipo de hemlisis.
Clasificacin de Lancefield: Por los
caracteres antignicos del carbohidrato
C de su pared (polisacrido).
Comportamiento antignico frente a
diversas pruebas serolgicas de
aglutinacin pasiva,
inmunofluorescencia, etc.
Streptococcus.
Tipo de hemlisis en placas de agar sangre.

-hemoltico: No hemlisis
-hemoltico: Tipo viridans (de
verde). Hemlisis parcial:
Decoloracin pardo-verdosa.
Ej.: S. pneumoniae
-hemoltico: Hemlisis total
Halos de transparencia grandes
alrededor de las colonias.
Streptococcus.
Clasificacin de Lancefield.
Rebeca Lancefield (1895 1981)
Se designan por letras de la A a la V en funcin de las
diferentes caractersticas antignicas que puede
presentar el carbohidrato C de su pared.
Existen Streptococcus que no tienen carbohidrato C, por
lo que no pueden clasificarse en estos grupos.
El grupo ms importante en patologa humana es el A.
Presentan diferentes factores de virulencia adems del
carbohidrato A:
Protena M en su pared.
En las cpsula: cido hialurnico con caractersticas
antifagocitarias (Grs. A y C) y un carbohidrato asociado
infecciones Respiratorias y nerviosas (S. pneumoniae)
 Streptococcus. Clasificacin
por pruebas serolgicas
+ hemlisis + pruebas bioqumicas
Streptococcus -hemolticos de los grupos A,B,C,G y F.
Streptococcus del grupo D de Lancefield enterococo y
Streptococcus del grupo D de Lancefield no
enterococo.
Streptococcus tipo viridans.
Streptococcus del grupo A (S. pyogenes).
-hemolticos

Patgenos (suponen el 90% de las infecciones estreptoccicas).

Se encuentra en la mucosa nasal y farngea de los enfermos y

tambin en portadores sanos.

Streptococcus
Accin patgena e inters Clnico
Accin patgena e inters Clnico en
Streptococcus del grupo A (S. pyogenes)

Efecto patgeno por factores de virulencia:

ANTGENOS:
Polisacrido C: Carctersticas de grupo.
Protena M (solo en Gr. A): Facilita adherencia y proteccin frente a
fagocitosis.
TOXINAS:
Hemolisinas: Estreptolisina O y Estreptolisina S (Antignica y
Afecta tambin a leucocitos)
Toxina eritrognica (Exantema de la escarlatina)
ENZIMAS:
Estreptoquinasas: Lisis de fibrina (rotura de cogulos).
Desoxiribonucleasa estreptoccica (4 grupos antignicos A, B, C,
y D): Despolimeriza el ADN
Hialuronidasas: Hidroliza el cido hialurnico del tej. conectivo.
Proteinasa estreptoccica: Acta sobre el tejido conectivo ayuda a
la difusin. Procesos inflamatorios y necrosis.
Accin patgena e inters Clnico en
Streptococcus del grupo A (S. pyogenes)
PROCESOS INFECCIOSOS:
Localizadas en piel (escarlatina)
o mucosas (anginas, sinusitis,
etc.)
Localizadas en vsceras
(endocarditis, meningitis)
Infecciones generalizadas
(sepsis)
Accin patgena e inters Clnico en
Streptococcus del grupo A (S. pyogenes)
Los cuadros ms frecuentes son de
ANGINAS o FARINGITIS
Pueden dar lugar a
complicaciones:
Supuradas: Otitis, sinusitis,
meningitis, etc.
No supuradas:
Glomerulonefritis

Fiebres reumticas (x infecciones no

tratadas) afectando a articulaciones e
incluso al corazn.
 Accin patgena e inters Clnico en
Streptococcus del grupo B

Solo una especie: S.agalactiae

Saprfito
Localizacin: Rinofaringe, aparato urogenital e intestinal.
Patgeno oportunista: En tracto respiratorio, mucosas, piel, etc. y
meningitis e infecciones pulmonares en neonatos contagiados a partir
de la vagina de la madre.
-Hemolticos (la mayora).
Descomponen el hipurato sdico
Accin patgena e inters Clnico en
Streptococcus del grupo D
- y -Hemolticos.
Resisten a bien agentes externos y antibioticos
Enterococos (S. faecalis y S. faecium ahora en el gnero
Enterococcus): Saprfitos del intestino.
Crecen bien en medios ricos en NaCl (6,5%)
Utilizan la esculina
No enterococos (S. bobis y S. equinus) afectan a vacas y caballos.
Los enterococos se encuentra en la flora intestinal normal y la
infeccin a menudo procede de contaminacin fecal.
Son una causa importante de infecciones del tracto urinario
(mucho menos comn que E. coli) y tambin infecciones
oportunistas (incluyendo infeccin intra-abdominal, septicemia
y endocarditis).
Accin patgena e inters Clnico en
Streptococcus de los grupos:
Grupo C, G, F y E :
-Hemolticos
Sensible a agentes externos
Saprfito de rinofaringe (G, F y E tambin vas genitales e
intestino).
Pocas veces patgenos oportunistas (en vas urinarias, heridas, etc.)
Grupos H (S. sanguis) y K (S. salivarius):
Saprfitos de la rinofaringe.
No patgenos
- y -Hemolticos (cuando lo son)
Grupo N (S. thermophilus, S. lactis, etc):
Estreptococos lcticos (industria): Fermentadores de lactosa
No patgenos
No hemolticos
Accin patgena e inters Clnico en
Streptococcus de los grupos:
Grupo viridans:
- y -Hemolticos
Saprfitos de orofaringe, mucosa bucal y placa dental.
Patgeno oportunista:
Caries dental
Endocarditis y complicaciones de valvulopatas tras la
extraccin de un diente (si pasan a la sangre).
Streptococcus neumoniae (neumococo):
Diplococos
No crecen en medios de bilis-esculina.
Sprofitos en la flora normal del aparato respiratorio.
Patgenos en neumonas o en procesos pigenos e inflamatorios
como meningitis, sinusitis, otitis, etc.
Son patgenos si presentan cpsula con un polisacrido que facilita
la invasin. Tambin protena M y polisacrido C se relacionan con
la virulencia.
Identificacin de Cocos G+
Aislamiento. Caracteres Bioqumicos
Toma de muestras:
De rinofaringe con Hisopo estril.
Muestra del pus si hay.
Frotis y tincin de gram de las
muestras.
+ Tincin de cpsulas (tincin
negativa)
Aislamiento. Caracteres Bioqumicos
Aislamiento por cultivo:
2 Tubos de agar sangre (uno aerobio y
otro microaeroflico): Siembra por
picadura (hemlisis en profundidad
tpica de S. pyogenes).
Placa de agar sangre o chocolate:
Agotamiento del asa.
En Agar sangre de Carnero al 5%:
Colonias grisceas redondas bordes
lisos.
Aislamiento. Caracteres Bioqumicos
PRUEBAS BIOQUMICAS:

Catalasa ()
Hemlisis en Agar sangre
Sensibilidad a la optoquina (S. pneumoniae)
Sensibilidad a la bacitracina (Gr. A: +).
Hidrlisis del hipurato (Gr. A: +).
Crecimiento en Bilis Esculina
Crecimiento en medios al 6,5% de NaCl (D
enterococo:+)
Grupos antignicos de Lancefield para los
distintos tipos de sustancia C: Por mtodos
inmuolgicos.
Pruebas serolgicas: Buscan anticuerpos en el
suero del paciente:
ASLO (Antiestreptolisina O)
ASK (antiestreptoquinasas)
ASH (antihialuronidasas)
DNAasa, etc.
 Identificacin de Streptococcus por grupos
Hemlisis Inhibicin Inhibicin Crec. En Hidrolisis NaCl Grupo
bacitracina optoquina Bilis Hipurato 6,5%
esculina sdico

B
Beta
D enterococo

D no
enterococo

C, G y F

Alfa Viridans

S.
pneumoniae
Neisseria
Familia Neisseriaceae
Gram
Diplococos
Aerobios estrictos
Saprfitas o patgenas de la especie
humana y animales.
Oxidasa y catalasa positivos
Neisseria. Especies ms importantes.
Neisseria meningitidis (meningococo)
Producen meningitis
Neisseria gonorrhoeae (gonococo)
Producen gonorrea.
Neisseria spp saprfitas. Habituales de rinofaringe y aparato genital,
no patgenas.
-----------------------------------------------
Las neiserias saprfitas son poco exigentes, fciles de cultivar en medios
comunes y crecen entre 22 y 35 C.
N. meningitidis y N. gonorrhoeae son muy exigentes, dificiles de
cultivar y solo crecen entre 35 y 37 C
Neisseria meningitidis: Accin patgena
Diplococos en granos de caf
Afecta a vas respiratorias superiores y causa
meningitis epidmica (sobre todo en nios con alta
tasa de mortalidad).
Factores de virulencia:
La cpsula que le confiere gran resistencia
Protenas de membrana con accin muy txica.
Fimbrias para adherirse al epitelio que invade
La cpsula presenta un polisacrido con distintas
propiedades antignicas que permiten clasificar al
menigococo en serogrupos (las cepas ms
patgenos pertenecen a los serogrupos A, B, y C).
Los serogrupos ms frecuentes en Espaa son el B y
el C
Neisseria meningitidis: Cuadro clnico
Comienza con rinofaringitis leve que
evoluciona a ms severa y posible
bronquitis.
Puede pasar a sangre y de all a piel
dando petequias, fiebres altas y
artralgias.
Puede pasar a lquido cefalorraqudeo y
meninges (meningitis): Fiebres muy
altas, cefala, rigidez de nuca, vmitos,
diarreas, etc. que pueden acabar en
muerte si no se trata rpidamente.
El examen de lquido cefalorraqudeo es
turbio, purulento y con abundantes
meningococos.
Neisseria gonorrhoeae: Accin patgena

Diplococos con afinidad por las

mucosas urogenitales.
Produce la Gonorrea de transmisin
por contacto sexual.
Factores de virulencia:
Protenas de membrana con diferentes
caractersticas antignicas.
Fimbrias (adherencia y dificultad para
ser fagocitadas)
Endotoxina que inactiva anticuerpos
prximos.
Neisseria gonorrhoeae: Accin patgena
Tras el contacto sexual:
A las pocas horas los gonococos se adhieren
a las mucosas mediante las fimbrias
Penetran a tejidos subepiteliales, se
multiplican y liberan endotoxinas con
efecto sobre uretra, cuello uterino, ano, etc.
con destruccin de clulas epiteliales,
formacin de procesos supurativos
purulentos, dolor a la miccin por uretritis,
afectando tambin a cuello de tero y
vaginitis en mujeres.
Sobre el 50% son asintomticos
cronificacin (al no ser tratado).
Neisseria meningitidis. Aislamiento.
Caracteres bioqumicos.
TOMA DE MUESTRAS:
De LCR por puncin lumbar
Examinar rpidamente (sensible)
A la muestra de LCR turbio y purulento se le
realiza:
Examen directo: Se centrifuga:
Sedimento Frotis para tinciones (gram, tinta
china, etc.)
Sobrenadante: Tcnicas inmunolgicas para
detectar Polisacridos capsulares y protenas.
Siembra en Agar sangre, agar chocolate, etc.
Puede realizarse tambin un hemocultivo.
Neisseria meningitidis. Aislamiento.
Caracteres bioqumicos.
Pruebas bioqumicas:
Catalasa (+)
Oxidasa (+)
O/F con glucosa y maltosa
(oxidativo)
Reduccin de NO3 a NO2 (-)
Estudios serolgicos del LCR o
del Suero.
Neisseria gonorrhoeae. Aislamiento.
Caracteres bioqumicos.
TOMA DE MUESTRA:
En el laboratorio a primera hora antes de la
primera miccin (si es posible)
De uretra, recto y cuello de tero.
EXAMEN DIRECTO: Frotis y tincin de gram.
CULTIVO: en medios enriquecidos (agar sangre,
agar chocolate, Thayer Martin modificado,
NYC medium)
Incubar a 35 37 C, humedad al 70 % y 5 10 %
de CO2.
Pruebas bioqumicas: O/F, oxidasa, catalasa, etc.
Pruebas serolgicas (ELISA).
.