BILIRRUBINAS (B)

T. Hayde Ziga Cceres

 BILIRRUBINA
Pigmento biliar amarillo naranja formado a partir de la
degradacin de:
Hb de GRs destruidos en bazo, hgado y M.O. 70-90 %

Hemoprotenas no Hbnicas (Mioglobina, Citocromos

P450, Catalasas, peroxidasas) en hgado: 20-25 %
Eritropoyesis ineficaz: destruccin prematura de GR

Al exponerla a la luz se forma fotobilirrubina y

ciclobilirrubina (+ solubles).
ICTERICIA indica un increm. en la conc sang. de B.

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La Hb se rompe en 2 partes:
GLOBINA: Se degrada en aa y se reutiliza

HEM: anillo que se abre para dar:

Fe libre q es transport como transferrina

4 ncleos pirrol, sustrato a partir del cual se forma

la bilirrubina

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 CO Fe

HEMO BILIVERDINA
Hemooxigenasa
microsmica

BILIVERDINA BILIRRUBINA
Biliverdina reductasa
citoplasmtica

Aves, peces y reptiles excretan biliverdina.

Mamferos excretan bilirrubina, excepto conejo y nutria.

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Formacin de diglucornido de B
(Conjugacin)

Bilirrubina

Glucuroniltransferasa cido glucurnico 2

de B UDP

2 UDP

Diglucurnido de B
B. Conjugada o directa

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Diglucuronato de Bilirrubina

Excrecin de B
en bilis
Se transporta
mediante gradiente de
conc. dependiente de
energa hacia los
canalculos biliares y
luego a la bilis.

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 La B es transportada x la albmina.
c. grasos libres, sulfonamidas, salicilatos,
ampicilina impiden la fijacin.
Aum. de B en la sangre, puede atravesar barrera
hematoenceflica y producir dao al Sist. Nerv.
Requiere conc. muy elevadas o una
hipoalbuminemia.
B puede unirse irreversiblemente a albmina
formando -bilirrubina o bil-alb. No es eliminada x
rin, causando elevados niveles de bilirrubina
persistentes.

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Captacin de la B x el hgado
En el plasma
B-Alb. x enlaces no covalentes. Se disoc de la Alb. p
entrar al hepatocito y une a protenas intracelulares.
B-Glucuronato
.Desplazan a la B de la Alb.:
Aumento de B no conj.:
Agentes de contraste
radiogrfico Kernicterus
Sulfamidas Obst. x litiasis biliar
Salicilatos
Furosemida

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 La B es transportada x la albmina.
En el hgado, se separa de la alb. y atraviesa memb.
sinusoidal
En el retculo se conjuga formando complejos:
compuestos mono y diconjugados con el cido
glucurnico.

B conjugada directa y
B no conjugada indirecta.

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 Bilirrubina directa

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 Bilirrubina directa
Diazo cido
Fundamento:
La mayora de mtodos utilizados para det. bilirrubina
utilizan c. sulfanlico diazotizado, formndose
azobilirrubina coloreada.
En medio acuoso slo reacciona la B conjugada o
directa. En presencia de c.. sulfanlico diazotizado, los
glucurnidos de bilirrubina y la bilirrubina-delta
reaccionan, formndose azobilirrubina que en pH cido
pta un pico de absorcin a 560 nm.
La azobilirrubina formada es medida entre 540 y 600
nm, siendo la intensidad del color formado directam.
proporcional a la cantidad de B directa pte en la
muestra.

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Muestras:
Utilizar suero o plasma libre de hemlisis.
Realizar el ensayo dentro de las 2 horas, en
caso contrario refrigerar la muestra entre 2 y 8
C., congelar a -20 C. para perodos ms
largos. Mantener protegidas de la luz.

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Procedimiento
MP Bl react
Muestra 0.1 mL -
Reactivo 1 1 mL
trabajo

H2O dest - 0.1 mL

Mezclar e incubar exactamente 3 min. a
temp. amb. 1 min a 37 C llevando a 0
con el Bl de reactivo

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 BILIRRUBINA TOTAL Y
BILIRRUBINA DIRECTA

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Significacin Clnica

La B, compuesto de degrad. de la Hb, es captada x el

hgado p. su conjug. y excrecin en la bilis.
Alteraciones hepatocelulares u obstrucc. biliares
pueden provocar hiperbilirrubinemias.
La eritroblastosis fetal o an. hemoltica del RN es una
patologa provocada x incompatibilidad materno-fetal
en la q se produce una destruccin excesiva de GRs.
Esto resulta en un severo aum. de la B srica con el
consecuente riesgo de difusin del pigmento al SNC,
x lo q la determ. de bilirrubina en estos RN es muy
importante.

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Fundamentos del mtodo
La B reacciona con el c. sulfanlico diazotado produciendo
un pigmento color rojo-violceo (azobilirrubina) que se mide
a 530 m.
La B conjugada (directa) reacciona directamente con el
diazorreactivo,
La bilirrubina no conjugada (indirecta) requiere de la pcia de
un desarrollador acuoso (Reactivo A) que posibilite su
reaccin.
Para q reaccione la bilirrubina total (conjugada y no
conjugada) pte en la muestra, debe agregarse benzoato de
cafena al medio de reaccin.

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 Reactivos Provistos

Reactivo A: sol. acuosa de benzoato de

cafena 0,13 mol/L, tamponada y
estabilizada.
Reactivo B: sol. de cido sulfanlico 29 mmol/L
y cido clorhdrico 0,17 mol/L.
Reactivo C: sol. de nitrito de sodio 0,07 mol/L.

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Instrucciones para su uso

Reactivo A: listo p usar.

Reactivo B: listo p usar.
Diazorreactivo: de acuerdo al volumen de
trabajo, mezclar 1 parte de Reactivo C con
21 partes de Reactivo B. Rotular y fechar.

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Procedimiento
Bl BD BT
Muestra (suero) 200 200 200 l
Agua dest 2.5 2.5 mL -
React A - - 2.5 mL
React B 200 L - -
Diazo React - 200 200 L

Mezclar inmediata. c/tubo x inversin.

Llevar a 0 con agua dest. y leer a 530 nm:
BD luego de 5 min exactos y
B.T. a los 15 min.

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 PROCEDIMIENTO
En 6 tubos (1, B1, 2, B2, 3, B3) colocar:
Conc
Tubo St React A Agua Diazo R React B
(mg/L)
1 50 L 2.6 mL --- 0.2 mL --- 25
B1 50 L --- 2.6 mL --- 0.2 mL ---

2 100 L 2.6 mL --- 0.2 mL --- 50

B2 100 L --- 2.6 --- 0.2 mL ---

3 200 L 2.6 mL --- 0.2 mL --- 100

B3 200 L --- 2.6 --- 0.2 mL ---

Al agregar el Diazo R, mezclar inmediatam. c/tubo x inversin.

A los 5 min., leer a 530 m, llevando a cero con agua dest.

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Valores de referencia

Bilirrubina en suero o plasma

- Adultos:
Directa: hasta 2 mg/L
Total: hasta 10 mg/L

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 ICTERICIAS
Pre Hepticas Hemolticas: Congnitas
Adquiridas
Trast. familiares en el metabolismo de las B
(disenzimicas)
a) Defecto de captacin. Sind. de Gilbert
b) Def. de conjugacin Ict. Neonatales
Enf. de Clijer Najjar
c) Def. de excrecin Enf. de Dubin Johnson
Enf. de Rotor

Hepticas Ict. Hepatocelulares: Agudas Hepatitis viral,

drogas
Crnicas: Cirrosis
Post Hepticas Extrahepticas (Quirrgicas)
Colestsicas Intrahepticas (Mdicas)

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 Gracias a la HPLC se distinguen 3
alteraciones en el metabolismo de la B:
Hiperbilirrubinemia no conjugada pura
(Sinds. de Gilbert y Crigler-Najjar)
Hiperbilirrubinemia predominantemente
conjugada (enf. hepatocelulares o en la
obstruccin heptica)
Hiperproduccin de bilirrubina
(hemlisis y eritropoyesis ineficaz)

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