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J. Watson
Traducido y Modificado
por G. Toledo
1
Resumen
Material gentico
Transformacin
Estructura del DNA
Watson y Crick
Replicacin del DNA
Procariota versus Eucariota
Errores de replicacin
Transcripcin
Traduccin
Estructura of Eucariota cromosoma
2
Material gentico
Frederick Griffith investig la virulencia de
Streptococcus pneumoniae
Griffith postul la existencia de un factor de
transformacin.
Investigaciones posteriores hechas por Avery
et al. descubrieron que el DNA es la sustancia
transformante.
DNA de clulas muertas fueron incorporadas
en el genoma de las clulas vivas
3
Experimento de Transformacin,
realizado por Griffith
Las ratas fueron inyectadas con dos cepas
de neumococos: una encapsulada (S) y
una no encapsulada (R).
La Cepa S es virulenta (Las ratas mueren);
tienen una cpsula mucosa y forma colonias
brillantes.
La cepa R no es virulenta (Las ratas viven); no
tienen cpsula y forman colonias opacas.
4
Experimento de transformacin de
Griffith
cpsula
Se les inyect
Se les inyect cepas R vivas sin Se les inyect Se les inyect cepas S
cepas S vivas con cpsula y las cepas S muertas muertas por calor ms
cpsula y causan ratas viven por calor y no cepas R vivas. Esto
la muerte a las causan la muerte caus la muerte a las Bacterias de la cepa S
ratas a las ratas. ratas. vivas fueron retiradas
de las ratas.
Hiptesis que se
plante Griffith?
a. b. c. d.
5
Animacin
(Todo lo explicado en esta excelente animacin,
fue traducido gentilmente por su profesor. La
traduccin del texto est en el sector de Notas
del orador)
http://dnaftb.org/17/concept/index.html
Y, obviamente, respondern 3 problemas que
estn en la ltima seccin de esta herramienta
de aprendizaje, relacionada con el experimento
de Avery et al.
6
Estructura del DNA
DNA contiene:
dos Nucletidos con bases pricas
Adenina (A)
Guanina (G)
7
Del cromosoma al ADN
http://www.biologieenflash.net/animation.php?ref=bio-0023-2
8
Regla de Chargaff
La cantidad de A, T, G, y C en el DNA:
Idntica en gemelos Idnticos
Vara entre individuos de una especie
Vara ms de especie a especie
En cada especie, hay igual cantidad de:
AyT
GyC
Todo esto sugiere que el DNA usa bases
complementarias que se parean para almacenar
informacin gentica
Los cromosomas humanos contienen, en
promedio, 140 millones de pares de bases
El nmero de posibles secuencias de
Nucletidos es de 4.140.000,000
9
Composicin del Nucletido del DNA
NH2
C CH3
Adenina C N Timina HN C
(A) N C (T)
CH O C CH
HC C Base que contiene
N N
N Nitrgeno.
O O
5 5
HO P O CH2 O HO P O CH2 O
O 4
C H H C1 O 4
C H H C1 azcar= desoxiribosa
H C C H H C C H NH2
3 2 3 2
O
OH H OH H C
Guanina C N Citosina N CH
(G) HN C (C)
CH O C CH
H2N C C N N
O N
O
5 5
fosfato HO P O CH2 O HO P O CH2 O
O 4
C H H C1 O C H H C1
4
H C C H H C C H
3 2 3 2
a. Nucletidos Purina OH H b. Nucletidos Pirimidina OH H
c. Datos de Chargaf
10
Animacin
11
Modelo de Watson y Crick
Watson y Crick, 1953
Construyeron un modelo del DNA
12
Modelo Del DNA de Watson/Crick
3.4 nm
0.34 nm
2 nm
b.
d.
C
a.
Esqueleto de
G
Azcar-fosfato
3 T
P 5
5
2
4 G C 3 P
1 A
S 1 4
S
A
3 2 5
T
P
P
c.
G
C
P
Bases C
complementarias
G
P
Puentes de H
Azcar
13
Difraccin de rayos X del DNA
Rosalind Franklin estudi la estructura del DNA
usando rayos X.
Descubri que si se haca una solucin viscosa y
concentrada de DNA, la molcula poda ser separada
en fibras.
Bajo condiciones correctas, las fibras pueden
producir patrones de difraccin bajo rayos X.
Ella produjo fotografas de difraccin de rayos X.
Esto aport evidenca que el DNA tena los siguientes
caracteres:
DNA es una hlice.
Alguna porcin de la hlice est repetida.
14
Difraccin de rayos X del DNA
http://www2.uacj.mx/IIT/CULCYT/Enero-Febrero2007/6ARTCULOCAMACHO.PDF Si desea saber ms sobre R. Franklin, lea este
apasionante artculo: Quien fue Rosalind Franklin
Rosalind Franklin
Patrn de difraccin
Difraccin de
Rayos X
a.
Haz de rayos X
DNA
cristalino
c.
b.
Photo Researchers, Inc.; c: Science Source/Photo Researchers, Inc.
15
Flujo Info gentica desde el ADN a
las protenas: Pulso y caza
16
Flujo de la Informacin Gentica y el
Dogma Central de la Biologa molecular
hebra no molde, sentido o codificante
5' 3'
A G G G A C C C C
T C G C T G G G G
DNA
3' 5'
5' 3'
A G G G A C C C C
mRN
N C C N C C N C C
R1 R2 R3
17
Replicacin Del DNA
Replicacin del DNA es el proceso de
copiado de una molcula de DNA.
La replicacin es semiconservativa, con
cada hebra de la doble hlice original
(molcula parental) sirviendo como un
molde (modelo) para una hebra nueva en
una molcula hija.
18
Animacin
20
Animacin
22
Animacin
25
Animacin
G
C G
C G
A T
A
regin de replicacin: C
nuevos Nucletidos G C
se pairean con los G A
de la hebra parental T A
T
A T
T
A G
C T
C A
A G T
A T A
T A
A G
A G
regin G
T
T Replicacin C
A C A
C complementada
G
C
G Hebra nueva Hebra vieja
A
Hebra vieja Hebra nueva
DNA hijo doble hlice
DNA hijo doble hlice
27
Animacin
28
Animacin
OH P se une aqu
Base Nitrogenada se une aqu
5
CH2
O OH
4 C C1
H H 1
H H
C C
3 2
OH H
Molcula desoxirribosa
2 DNA polimerasa
Se une a un nuevo
5 end Nucletido en el
Carbono 3 del
P
Nucletido previo.
T
P A
P
P G C
Ext.3
P
P C G
5
3
P
P T A
P hebra molde
P C G
P DNA polimerasa
Extr.3 Extr.5 4 Hebra adelantada
nueva 3
hebra molde hebra nueva
Direccin de replicacin 3 Helicasa en la horquilla de replicacin
RNA primer
6 Fragmento de Okazaki
hebra molde
3
5 Hebra retrasada
5
5
Hlice de DNA perental
7 DNA ligasa DNA polimerasa
3
Horquilla de replicacin introducescomplicaciones
30
Replicacin: Procariota
Replicacin en Procariota
Bacteria (la mayora) y Archaea tienen un solo
cromosoma circular
replicacin est
completa
Replicacin
est
ocurriendo
en dos
a. replicacin en procariotas direcciones
horquilla de replicacin Burbuja de replicacin
Hebra parental
nuevo DNA
duplex
hebra hija
b. Replicacin en eucariotas
32
Errores de replicacin
Las variaciones genticas son la materia prima
para el cambio evolutivo
Mutacin:
Un cambio permanente (pero no planificado) en la
secuencia de las bases pareadas
Algunos se deben a errores en la Replicacin del DNA
Otros, debido al dao del DNA
El DNA tiene enzimas que generalmente estn
disponibles para revertir la mayora de los errores
33
Funcin de los Genes
Genes codifican para Enzimas
Beadle y Tatum:
Experimentos en el hongo Neurospora crassa
Propusieron que cada gen tiene informacin para la
sntesis de una enzima
Hiptesis un-gen-una-enzima
34
Sntesis de protenas: desde el DNA al
RNA a la Protena
El mecanismo de la expresin del gen
El DNA en los genes poseen informacin, pero la
informacin no es Estructura ni Funcin
La informacin gentica es expresada en
Estructura y Funcin a travs de la sntesis de
protena
La expresin de la informacin gentica en
estructura y funcin:
El DNA en el gen controla la secuencia de los
Nucletidos en una molcula de RNA
El RNA controla la Estructura primaria de una
protena
35
Animacin
P
G
G
U S
A
P U La base es
Uracilo en vez
C de Timina
S
P
A
P
C
ribosa
un Nucletido
38
Estructura del DNA vs. RNA
Su trabajo ahora es hacer un cuadro comparativo entre la estructura y funcin
del ADN y del ARN. Tiene 10 minutos para esto
39
El cdigo gentico
Propiedades del cdigo gentico:
Universal
con pocas excepciones, todas las especies usan el cdigo
gentico de la misma manera (casi universal, entonces)
Codifica 20 aminocidos con 64 tripletes
Degenerado (redundante)
hay 64 codones disponibles para 20 aminocidos
La mayora de los aminocidos estn codificados por dos o ms
codones
No ambiguo (Los codones son exclusivos)
Ninguno de los codones codifica para dos o ms aminocidos
Cada codn especifica slo uno de los 20 aminocidos
Contiene seales start (inicio) y stop (parada)
Codones de Puntuacin
Como las letras maysculas que usamos en inicio de una frase
y un punto, que indica el momento del trmino.
40
El cdigo gentico
La unidad de un cdigo son los codones, cada uno de
los cuales tiene un arreglo simblico nico.
Cada uno de los 20 aminocidos presentes en las
protenas es codificado nicamente por uno o ms
codones
Los smbolos usados por el cdigo gentico son las bases
nitrogenadas del mRNA
Funcionan como letras del alfabeto gentico
El alfabeto gentico tiene solo 4 letras (U, A, C, G)
Todos los codones en el cdigo gentico tienen 3 bases
(smbolos) de largo
Funcionan como palabras de la informacin gentica
Permutaciones:
hay 64 posibles ordenamientos de los 4 smbolos
combinndolos de a 3
A menudo los libros le denominan tripletes a los codones
El lenguage gentico slo tiene 64 palabras
41
Codones del RNA mensajero
42
Pasos en la Expresin: Transcripcin
Transcripcin
Los Genes se abren y exponen las bases no
pareadas
Son como moldes para la formacin del mRNA
Los Nucletidos sueltos del RNA se unen a las
bases expuestas del DNA usando la regla C=G y
A=U
Cuando un gen completo es transcrito a mRNA,
ste es un pre-mRNA transcrito del gen
La secuencia de bases del pre-mRNA se
complementa con la secuencia del DNA
43
Animacin
45
Animacin
C G
T A
A T
G
Hebra no C Hebra molde
molde
C
G
A 3' T
A A
C C G
RNA
G C
polimerasa
G
A
U Hebra molde
del DNA
T G
C
mRNA
C
C transcrito
T
A
C C
A T
G
C G
T A 5'
47
Animacin
49
RNA polimerasa
a. 200m
Espliceosoma
DNA
RNA
polimerasa
RNA
transcrito
b.
50
Procesando al RNA mensajero
El Pre-mRNA, se modifica antes de salir del
ncleo de Eucariotas.
Modificaciones en los extremos del transcrito
primario:
Capucha de Guanina modificada en el extremo 5
La cap es un nucletido de Guanina (G) modificado
Ayuda al ribosoma a enlazarse cuando comienza la
traduccin
Cola Poli-A de 150+ adeninas en el extremo 3
Facilita el transporte del mRNA fuera del ncleo
Inhibe la degradacin del mRNA por enzimas
hidrolticas.
51
Procesando al RNA mensajero
El Pre-mRNA, posee exones e intrones.
Los exones sern expresados,
Los intrones, estn entre los exones.
Permite a una clula tomar y elegir cules exones irn en un
mRNA particular
RNA splicing (corte):
El transcrito primario consta de:
Algunos segmentos que no sern expresados (intrones)
Los segmentos que sern expresados (exones)
Lo ejecuta el complejo espliceosoma en el nucleoplasma
intrones son eliminados
Los exones remanentes son vueltos a unir
Resultado: un transcrito de mRNA maduro
52
RNA Splicing
En procariotas, los intrones son removidos
por auto-splicingesto es, el intrn por si
mismo tiene la capacidad enzimtica de
cortarse y eliminarse del pre-mRNA
53
Animacin
54
Procesando al RNA mensajero
espliceosoma
Splicing del
pre-mRNA
intron RNA
mRNA
5' 3'
cap Cola poli-A
Poro nuclear en la
membrana nuclear
ncleo
citoplasma
55
Animacin
57
Pasos en la Expresin del gen:
traduccin
La molcula de tRNA tiene dos sitios de enlace
Uno asociado con el mRNA transcrito
El otro asociado con un aminocido especfico
Cada uno de los 20 aminocidos de las protenas se asocia
con una o ms de las 64 especies de tRNA
Traduccin
Un mRNA transcrito migra al RER
Se asocia con el rRNA de un ribosoma
El ribosoma lee la informacin en el transcrito
El Ribosoma dirige a varias especies tRNA a que traigan los
amino cidos especficos
El tRNA especifico es determinado por el cdigo siendo
traducido en el mRNA transcrito
58
tRNA
Hay 64 tipos diferentes de molculas de tRNA
Todos muy similares excepto que
un extremo lleva un triplete especfico (de 64
posibles) llamado anticodn
Al otro extremo se une un aminocido especfico
La tRNA sintetasa une los aminocidos correctos
a la molcula de tRNA
Todas las molculas de tRNA con un
anticodn especfico siempre se unir con el
mismo aminocido
59
Animacin
amino
cido
leucina
3
5
Puente de
Hidrogeno
Extremo del
aminocido
anticodn
Extremo del
anticodn
mRNA
5' 3'
codn
b.
61
Ribosomas
RNA Ribosomal (rRNA):
Producido de un molde de DNA en el nucleolo
Combinado con protenas en subunidades grande y
pequea
Un ribosomaa completo tiene 3 sitios de unin
para facilitar el pareo entre el tRNA y el mRNA
El sitio E (por exit)
El sitio P (por pptido) y
El sitio A (por aminocido)
62
Ribosoma: Estructura y Funcin
Subunidad grande
3
5
mRNA
Sitio de unin
Del tRNA
subunidad pequea
b.Sitios de unin del ribosoma
a. Estructura de un ribosoma tRNA
saliendo
polipptido
tRNA
entrando
mRNA
63
Pasos en la traduccin: Iniciacin
Los Componentes necesarios para la iniciacin
son:
Pequea subunidad ribosomal
mRNA transcrito
tRNA iniciador, y
Subunidad grande ribosomal
Factores de Iniciacin (protenas especiales que
colaboran en el proceso. Sern vistas ms adelante)
tRNA Iniciador:
Siempre tiene el anticodn UAC
Siempre lleva el aminocido metionina
Capaz de unirse al sitio P
64
Pasos en la traduccin: Iniciacin
Unidad ribosomal pequea se une al
mRNA transcrito
aminocido metionina
Met
tRNA iniciador
E sitio P sitio A sitio
mRNA
U A
5' A U C
G
3' Met
subunidad pequea
ribosomal subunidad grande
ribosomal
U A C
A UG
5' 3'
codn de inicio
Initiation
67
Pasos en la traduccin: Elongacin
Elongacin se refiere al crecimiento de l
tamao del polipptido
Molculas de tRNA llevan su aminocidos
al ribosoma
Ribosoma lee un codn en el mRNA
Permite que solo un tipo de tRNA lleve su aa
Debe tener el anticodn complementario para que el
codn del mRNA se lea
Une el ribosoma a su sitio A
69
Animacin
Met Met
asp
Met Enlace Met Ser Ser Thr
tRNA
Ser peptdico Ser Ala Ala
Ala C U G
Ala Trp Enlace Trp G G
U
Trp anticodn Trp Val peptdico Val
Val Asp
Val Asp Asp
U
A
C A U C U G C C U G
C A U C A U C U G
G U A G A C G U A G A C G U A G A C G U A G A C A C C
3 3 3
3 5 5 5
1 Un tRNAaminocido 2 Dos tRNAs pueden estar 3 Formacin de enlace 4 El ribosoma se mueve hacia
Se acerca al ribosoma en el ribosoma al mismo peptdico que une el adelante; el tRNA vaco sale del
y se une al sitio A. tiempo; los anticodones Aminocido a la nueva sitio E ; el prximo complejo
se parean a los codones. cadena en formacin. aminocidotRNA esta llegando
al ribosoma.
Elongacin
71
Pasos en la traduccin: Terminacin
El tRNA se mueve al sitio P
El tRNA se mueve al sitio E y sale
El ribosoma lee el codn STOP al final del
mRNA
UAA, UAG, or UGA
No codifican para un aminocido
El polipptido es liberado del ltimo tRNA por el
factor liberador
El ribosoma libera al mRNA y se disocia en
subunidades
mRNA es ledo por otro ribosoma
72
Animacin
Terminacin
74
Animacin
75
Resumen de la expresin del gen
(Eucariotas)
Transcripcin traduccin
1. El DNA en el ncleo sirve
pre-mRNA intrones
3'
mRNA amino
4. Los tRNAs con
pptido cido
anticodones
Poro nuclear
lleve aminocidos
ribosoma al mRNA.
tRNA
UA
UA C C
5 AUG 3
anticodn
codn
5. Durante la iniciacin, comienza el
pareo de bases complementarias
CC anticodn-codn a medida que las 8. Durante la terminacin, un
C subundades ribosomales se juntan ribosoma alcanza un codn
en un codn stop. stop; el mRNA y las
C C C U GG U U U subunidades ribosomales se
5 G GG A C C A A A G U A desmantelan..
3'
76
Animacin
78
Estructura del cromosoma Eucariota
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2 nm
DNA
doble hlice
1 nm
1. Empaquetamiento del DNA
a. Nucleosoma) alrededor de protenas histonas
histonas
nucleosoma
eucromatina
d. Heterocromatina
1,400 nm
e. Cromosoma metafsico
79
Animacin
81
Transformacin de Organismos en
la actualidad
Resultan los llamados Organismos
genticamente modificados (OGM)
Herramienta importante en la biotecnologa actual
productos comerciales que son cada vez ms usados
Protena fluorescente verde (GFP) usada como un
marcador
Un gen de medusa codifica para GFP
El gen es aislado y transferido a una bacteria o al embrin de
una planta, cerdo o ratn.
Cuando este gen es transferido a otro organismo, este brilla
en la oscuridad
82
Animacin (omtala, no la estudie)
(Bacteria): Martin Shields/Photo Researchers, Inc.; (Jellyfish): R. Jackman/OSF/Animals Animals/Earth Scenes; (Pigs): Courtesy Norrie Russell, The Roslin Institute;
(Mouse): Eye of Science/Photo Researchers, Inc.; (Plant): Dr. Neal Stewart
84
Animacin