Trabalho de concluso de curso

DETECO DE BANDAS DE RNA

CARACTERSTICAS PARA ROTAVRUS EM FEZES
DE CES COM DIARRIA, POR MEIO DE
ELETROFORESE EM GEL DE POLIACRILAMIDA
(PAGE).

Aluna: Ana Paula Wakiuchi

Arapongas, 04 de junho de 2010.

 Parte II

DETECO DE BANDAS DE RNA

CARACTERSTICAS PARA ROTAVRUS EM
FEZES DE CES COM DIARRIA, POR MEIO
DE ELETROFORESE EM GEL DE
POLIACRILAMIDA (PAGE).
 Introduo
Morfologia: Rotavrus

Vrus no envelopado

55 a 75 m
Fonte: Silva (2006)

Capsdeo formado por trs camadas proticas

Aspecto semelhante a roda radiada (SILVA, 2006)

 Introduo
Genoma composto
por 11 segmentos de
RNA de fita dupla que
variam de peso
molecular.
Segmentos e
protenas codificadas
Sorogrupos (A-G)
protena VP6
 Eletroferotipos

Fonte: Tamehiro, et al (2003)

 Introduo
Sorotipos
Capsdeo externo: VP7 e VP4
Quadro referente a funo das protenas VP7 e VP4

Protena Sorotipos Funo

caracterizados
VP7 (Glicoprotena) G1-G15 Soroneutralizao
viral
VP4 (Protease) P1-P21 Infectividade,
virulncia,
hemaglutinao
e induo de
imunidade
mediada por
anticorpos.
 Introduo
Tcnicas de diagnstico para Rotavrus;

Tcnica de eletroforese em gel de

poliacrilamida (PAGE) segundo Herring et
al (1982) com algumas modificaes;

Presena do vrus em ces. (MARTELLA,

et al,2001; KANG, et al,2007; DE GRAZIA,
et al, 2007).
 Objetivo

Detectar a presena de bandas de RNA

caractersticas para Rotavrus em fezes
de ces diarricos, por meio de
eletroforese em gel de poliacrilamida
(PAGE).
 Materiais e mtodos
Foram testadas 57 amostras de fezes de ces diarricos
provenientes do Hospital Veterinrio da Unopar.
 Materiais e mtodos
Amostras congeladas a 18C
Adicionado Tris clcio, agitadas e
centrifugadas.
 Materiais e mtodos
Encubao
Adio de
fenol/clorofrmio
Sobrenadante
retirado
Adio de NaCl 10%
e etanol
Encubao 18 h.
 Materiais e mtodos
Centrifugao e ressuspendimento da
amostra.
 Materiais e mtodos
Preparo do gel de poliacrilamida
Materiais e mtodos
Materiais e mtodos
Materiais e mtodos
Materiais e mtodos
 Materiais e mtodos
Colorao com nitrato de prata
Materiais e mtodos
 Resultados
Uma amostra se mostrou positiva e trs
suspeitas.
 Resultados
Tabela 01 Resultado de deteco de parvovrus, coronavrus e
rotavrus por meio das tcnicas de hemoaglutinao
e PAGE em fezes de ces com suspeita de
gastroenterite viral. Arapongas 2010.

Amostra Parvovrus Coronavrus Rotavrus

135/06 + - Suspeito

960/07 + - Suspeito

938/07 No realizado No realizado Suspeito

207/07 + + +
 Discusso
Padro NCDV (Nebraska Calf Diarrhoea Vrus) encontrado por
Buzinaro & Jerez, 1998.

A tcnica utilizada por Martella, et al (2001) foi a mesma utilizada no

presente trabalho. Duas amostras, mesmo padro.

Para comprovao da presena do vrus nas amostras se faz

necessrio o isolamento em clulas MA 104 como citado por Martella,
et al (2007) e Kang, et al (2007)

A caracterizao molecular no se justifica pela no utilizao do

isolamento em clulas MA-104 como mtodo de confirmao inicial.

Nascimento, et al (2007) observou co-infeco de Parvovrus e

Coronavrus em 80 % das amostras provenientes de ces com diarria
no Hospital Veterinrio da Unopar.
 Concluso
De 57 amostras testadas, 1 se mostrou
positiva, mostrando o padro NCDV
(Nebraska Calf Diarrhoea Vrus), e 3 se
mostraram sugestivas para a presena do
Rotavrus.
Obrigada pela ateno!