concentracin y purificacin de

protenas
 Protenas
Son biomolculas formadas por cadenas
lineales de aminocidos.
 clasificacin
Funcin Estructura
Estructurales Primaria
Transporte Secundaria
Protectoras Terciaria
Hormonales Cuaternaria
Enzimticas
 Purificacin
Proceso que cuenta con varias etapas cuyo
objetivo es lograr la concentracin diferencial
de la protena o molcula de inters
 Condiciones generales a evaluar
Calidad (% de pureza del producto de acuerdo
a mis objetivos
Cantidad tcnicas de alta capacidad y de baja
capacidad preparativas analticas
Costos
 Pasos a seguir en una purificacin
1. Definir un ensayo especfico que identifique
a la protena
2. Elegir la fuente
3. Extraer la protena de la fuente
4. Estabilizacin de la molcula
5. Aislamiento y concentracin
6. Determinar la pureza y calidad del producto
final
 Mtodos cromatogrficos
se basan en las diferencias de carga, tamao o
afinidad de las diferentes protenas.
La columna est rellena con un material slido
con las caractersticas qumicas adecuadas
(fase estacionaria), y una solucin tamponada
se hace pasar a travs de la columna (fase
mvil).
 TIPOS
La filtracin o exclusin molecular
El cromatografa de intercambio inico
La cromatografa hidrofbica
La cromatografa de afinidad
 Filtracin en gel o cromatografa de
exclusin molecular.
La fase estacionaria esta constituida por
partculas de polmeros de diferente
porosidad.
La separacin se basa en el tamao de las
partculas.
El tamao de los poros internos depende de la
naturaleza del polmero en cuestin, y permite
la entrada a protenas por debajo de un
determinado peso molecular
 Cromatografa de intercambio inico.
la columna est rellena con un soporte al que
van unidos grupos cargados positivamente
(intercambio aninico) o negativamente
(intercambio catinico).
Las protenas cargadas pueden por lo tanto
unirse a intercambiadores catinicos o
aninicos dependiendo de su carga neta
 Cromatografa hidrofbica
Se trata de un mtodo similar al anterior con
la nica diferencia de que la fase estacionaria
es apolar (hidrofbica)
En este caso a elusin se realiza aumentando
la apolaridad de fase mvil
 Cromatografa de afinidad
En esta tcnica la molcula que se une
especficamente a la protena se conoce con el
nombre de ligando y se une covalentemente a
una matriz inerte
En este caso tambin se utiliza el incremento
de fuerza inica para eluir las protenas.