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Biobalistica

Angel F. M A . Universidad Politecnica de Puebla


Que es la biobalistica ?
Biolistica Biobalistica

Metodo para conseguir que el DNA penetre en la clulas. El DNA se mezcla


con particulas metalicas, generalmente de oro o tungsteno, que se disparan
sobre una celula a muy elevada velocidad. ( biotecnologa y sociedad,
Encuentros y desencuentros, Emilio Muoz)
Biobalistica

Alternativa Plasmido Ti para


transferir DNA a plantas

Bao de particulas de oro o


tungsteno (aprox 0,4-1,2 m
dimetro) con DNA que ha
sido precipitado con: CaCl2,
espermidina o polietilen
glicol.

Velocidades (300-600 m/s)


equipo llamado pistola de
particulas (de genes)
Pistola de partculas

Versin original

Pequea cantidad de plvora para


acelerar las micro partculas.

Actualmente se usa helio alta presin

Proyectiles penetran la pared celular


y membrana ( densidad no resulta
daina)

Alcance de penetracin, variando


intensidad de estallido, distancia de
partculas, utilizar partculas de dif
tamao).
Una vez dentro, el DNA se separa de las
partculas y en algunos casos es integrado
dentro del genoma de las plantas.

Es utilizado para transferir ADN exgeno a


suspensiones de plantas, cultivos de callos,
tejidos meristematicos, embriones
inmaduros y polen, (obtenidos amplio
rango de plantas incluyen
monocotiledneas y confieras, menos
susceptibles por Agrobacterium)

Transferir DNA cloroplastos y mitocondrias.


De forma convencional, los plsmidos de DNA disueltos en tampn son
precipitados sobre la superficie de los microporoyectiles.

procedimiento aumenta la frecuencia de clulas

. Se estima que aproximadamente 10,000 clulas son transformadas con


cada bombardeo.

las clulas transformada, detectadas por la expresin de un gen marcador, a


veces solo expresan el DNA transferido de forma transitoria.
La configuracin de vectores influye
integracin como expresin de
genes.

Eficaz DNA linear en vez de circular.

Plsmidos de mas de 10 Kb pueden


ser fragmentados (menor tasa de
transformacin)

Aun as si es de mayor tamao se


utilizan cromosomas artificiales de
lev (YACs) diseados marcadores
de seleccin de planta y lev
Como un sistema de verificacin, distintas cantidades de DNA de
Cochliobolus heterostrophus son clonados en el vector de modo que YAC
ser de 80 a 550 Kb

Posteriormente el vector con DNA de hongo ser transferido a cel vegetal.

Aquellas resistentes al antibitico kinamicina sern aisladas

Se confirmar la presencia en estas clulas del segundo gen marcador, el


resistencia al antibitico higromicina, localizado en el otro brazo del vector
YAC.
Por que se utiliza esta tcnica?
Hiptesis
Tcnica de mayor importancia

Naturaleza fsica es independiente de clulas blanco

Utilizada para introducir ADN exgeno a clulas vegetales, bacterias, algas,


hongos, cel. animal
limitaciones.

Algunos tejidos oponen una resistencia, debido a paredes celulares


lignificadas o superficies vellosas.

los principales limitantes:

baja relacin total de clulas sometidas al bombardeo y el nmero de clulas


que logran incorporar de manera permanente la informacin gentica
transferida.