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UNIVERSIDAD CATOLICA DE SANTA MARIA

ESCUELA DE POSTGRADO

MAESTRIA EN QUIMICA DEL MEDIO AMBIENTE


ASIGNATURA:
ANALISIS INSTRUMENTAL II

TEMA:
Cromatografa de pares inicos
Cromatografa de interaccin
hidrfoba
DOCENTE:
JOSE A. VILLANUEVA SALAS PhD.

ELABORADO POR:
HARRY R. YUCRA CONDORI
Cromatografa de
pares inicos
Compuestos altamente Difcil
Determinarlos directamente
polares.
Fuertes retenciones.
Se busca En su forma asociada y
disociada se detectan como
Reducir el carcter polar
distintas.

Modificacin del Favorece la formas no


Rango 2-8
pH inicas

Compuestos con .
carcter acido + 2 + 3 + < pH

Compuestos con .
2 + 2 3+ + > pH
carcter basico

Formacin de un par inico


Cromatografa de pares inicos
Separar compuestos muy polares
Formacin de un par inico Uso que no se adhieren a una F.E. apolar,
ej.: aminocidos, ac. organicos,
Se aade a la F.M.
Carga opuesta a
Reactivo de apareamiento
Cadena carbonada
Grupo la del analito
inico funcional

Si el soluto inico
- Par inico neutro.
Alquilsulfonato
es una base Menos polar y estable.
Lipfila.
Si el soluto inico + Retenido en la F.E.
Alquilamonio Fcilmente eluida.
es un acido
Si el soluto inico es una base - Alquilsulfonato
+ .
3 + 8 15 . 3 3 . 3 . 8 15

Si el soluto inico es un acido - Alquilamonio

+ .
+ 4 7 4 . (4 7 )
+
+

Donde X (analito), C (contrain), [XC] (complejo).


Variables de la cromatografa de apareamiento
inico.
VARIABLE EFECTOS
Dimensin del contrain A mayor dimensin (lipofilicidad) ,
mayor retencin.
Tipo de modificador orgnico A mayor fuerza , menor retencin (THF >
AcN > MeOH).
Concentracin del modificador A mayor concentracin , menor
retencin.
Concentracin del contrain A mayor concentracin, mayor
retencin.
Fase estacionaria A mayor lipofilicidad o a mayor
cobertura, mayor retencin
Temperatura A mayor temperatura, menor retencin
pH Depende del soluto
MECANISMOS DE ACTUACION

Apareamiento en le
seno de la F.M.

Intercambio inico en la
superficie
Cromatografa de
interaccin hidrfoba
HIC
Mejora la separacin

Compuestos orgnicos
(protenas hidrosolubles)
Se usa

Fase est.:Columna apolar Fase mvil: solucin salina


con Basado en el principio
C2 C10 u otros grupos Protena [ sales], solubilidad de los
hidrfobos lipfila compuestos orgnicos en agua.
la

Elucin [sal] (decreciente) o


disolventes orgnicos Eluidas en orden
decreciente a su
carcter hidrfilo
Serie de Hofmeister
La influencia de los iones en interaccin hidrofbica sigue la conocida
serie de Hofmeister.

Los iones fosfato promueven la interaccin hidrfobica ms


fuertemente que los iones tiocianato que interrumpen las interacciones
hidrofbicas.
Mtodos de elucin:
Disminucin de la concentracin de sal (en relacin con las
condiciones de unin).
Adicin de solvente orgnico (cambia la polaridad del
disolvente, lo cual interrumpe la interaccin hidrfoba).
Aumento de la concentracin de sal (utilizando una sal
caotrpica).
Adicin de detergente,los detergentes se utilizan como
desplazadores de protenas, y se han utilizado principalmente
para la purificacin de protenas de membrana cuando se utiliza
HIC.
Regeneracin del adsorbente y limpieza
En general, los procedimientos de limpieza dependen de la estabilidad
de la matriz de base y el ligando hidrfobo. Para las protenas
fuertemente unidas, a menudo se recomienda hidrocloruro de
guanidina 6 M .
Si los detergentes se han utilizado durante el proceso, el etanol o el
metanol pueden ser utilizados como parte del procedimiento de
regeneracin .
Para la limpieza , una solucin custica (NaOH 1,0 M) se puede utilizar
para la mayora de los adsorbentes (con la excepcin de slice).
GRACIAS POR SU
ATENCION

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