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TEMA 8

ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN
MOLECULAR UV-VIS

(ESPECTROFOTOMETRA UV-VIS)
Segn su longitud de onda, se distinguen varios subtipos de rayos ultravioleta:

Longitud de Energa por


Nombre Abreviacin
onda fotn (eV)
(nm)
Ultravioleta
NUV 400 200 3,10 6,30
cercano
Onda larga UVA 400 320 3,10 3,87
Onda media UVB 320 280 3,87 4,43
Onda corta UVC 283 - 200 4,43 6,20
Ultravioleta
FUV, VUV 200 10 6,20 - 124
lejano
Ultravioleta
EUV, XUV 91,2 1 13,6 1240
extremo
8.1.- TRANSMITANCIA

Transmitancia: fraccin de
radiacin incidente transmitida
por la disolucin.

PT
T
PO

8.2.-ABSORBANCIA
PO
A log T log
PT
La absorbancia de una disolucin aumenta a medida que
aumenta la atenuacin del haz.
PT potencia del haz de radiacin transmitida.
Transmitancia: fraccin de radiacin que una sustancia deja pasar cuando la REM atraviesa la
muestra.

T puede valer desde 0 hasta 1.

%T puede valer desde 0 hasta 100 %

Absorbancia: es la atenuacin de la intensidad de la radiacin cuando esta incide sobre una


muestra. Es la cantidad de energa que la sustancia toma para pasar a un estado ms excitado.

A aumenta a medida que aumenta la atenuacin de la radiacin.

Cuando no hay absorcin de radiacin Po= PT y entonces A=0, mientras que si se absorbe el
99% de la radiacin, solo se transmite el 1%, la A=2
8.3.- RELACIN ENTRE ABSORBANCIA Y CONCENTRACIN: LEY DE BEER

Ley de Lambert-Beer: muestra cmo la absorbancia es


directamente proporcional a la longitud b de la trayectoria a travs de
la solucin y a la concentracin c del analito o especie absorbente.

A abc A bc
a: cte de proporcionalidad llamada absortividad. (unidades Lcm-1g-1, si c=g/L)
b: longitud del camino que recorre la radiacin a travs del medio absorbente.
c: concentracin expresada en g/L (mg/L, ...) Cuando en la ecuacin la
concentracin viene expresada en mol/L, la cte de proporcionalidad se denomina
absortividad molar y se representa por (unidades Lcm-1mol-1. )
-Disoluciones que contienen ms de una clase de especies
absorbentes:
A = A1 + A2 + .... + An
Como A = b c

A = 1 b c1 + 2 b c2 + . +n b cn
8.4.- LIMITACIONES DE APLICABILIDAD DE LA LEY DE BEER

La atenuacin de una radiacin es cuantitativamente


proporcional a ala concentracin de la especie absorbente

La proporcionalidad directa entre absorbancia y


concentracin cuando b es cte presenta desviaciones:
A) Limitaciones reales de la ley
B) Limitaciones Qumicas
C) Limitaciones Instrumentales
8.4.- LIMITACIONES DE APLICABILIDAD DE LA LEY DE BEER

A) Limitaciones reales de la ley

-Disoluciones de concentracin elevada (c > 0.01 M) dan malos


resultados.
-La absortividad a y la absortividad molar dependen del ndice de
refraccin de la muestra.
B) Limitaciones Qumicas
Se produce cuando el analito se disocia, asocia o reacciona con el
disolvente para dar productos que presentan propiedades de
absorcin diferentes de las del analito.

HIn H+ + In-
Color 1 Color 2
Desviacin positiva a 430 y negativa a 570 nm.
8.4.- LIMITACIONES DE APLICABILIDAD DE LA LEY DE BEER

C) Limitaciones Instrumentales

El cumplimiento estricto de la Ley de Beer slo se observa para


radiaciones monocromticas (radiacin formada por una sola
longitud de onda) y stas en la prctica no se consiguen, ya que
con los dispositivos disponibles (filtros, monocromadores) se
obtienen una banda de longitudes de onda ms o menos simtrica
entorno a la deseada.
Otra desviacin: Presencia de radiacin parsita o dispersa.
8.5.- INSTRUMENTACIN PARA ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN UV-VIS

FOTMETROS
* Instrumento sencillo utilizado para medir la absorbancia y
que emplea filtros de absorcin o interferencia para
seleccionar la longitud de onda.

* Suelen usarse prcticamente en la regin del Visible.

* Ventajas: Son sencillos, bastante econmicos, robustos y


facilidad en cuanto a mantenimiento. Pueden transportarse,
lo que lo convierte en un aparato til para realizar anlisis
espectroscpicos de campo.

* Inconvenientes: No puede utilizarse para obtener


espectros de absorcin.
8.5.- INSTRUMENTACIN PARA ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN UV-VIS

ESPECTROFOTMETROS
* Instrumento empleado para medir la absorbancia que
utiliza un selector monocromtico para seleccionar la longitud
de onda.
* Puede usarse en la regin UV, Vis e IR.

* Pueden ser de un solo haz o de doble haz.

Diseos instrumentales para fotmetros y espectrofotmetros


DESPLAZAMIENTO BATOCROMICO o corrimiento hacia el
rojo: cuando la longitud de onda de absorcin de una sustancia se
desplaza hacia longitudes de onda mas grandes o de menor
energa por efecto del solvente o por sustituyentes.

EFECTO O DESPLAZAMIENTO HIPSOCROMICO o


corrimiento hacia el azul, cuando la longitud de onda de
adsorcin d una sustancia se desplaza hacia longitudes de onda
menores o de mayor energa por efecto del solvente o por
sustituyentes.
EFECTO HIPERCROMICO,
HIPERCROMICO el incremento de la
intensidad de la absorcin,es decir un aumento en la
magnitud del coeficiente de absortividad molar para una
longitud d onda dada por efecto del solvente o de
sustituyentes.
8.6.- ESPECIES ABSORBENTES

A) Absorcin por compuestos orgnicos

Dos tipos de e- son responsables de que las molculas absorban radiacin


UV-Vis:
- e- compartidos que participan directamente en la formacin de enlaces y
que estn asociados a ms de un tomo.
- e- externos no compartidos, localizados preferentemente entorno a
tomos como O, S, N y halgenos.(e situados en orbitales no enlazantes
n)
a la que absorbe una molcula depende de la fuerza con que
retiene a sus distintos e-.

Enlaces sencillos C-C o C-H: de la regin del UV de vaco (<180 nm)


Enlaces dobles o triples: de la regin del UV
Compuestos orgnicos que contienen S, Br y I: absorben en la regin UV
8.6.- ESPECIES ABSORBENTES

A) Absorcin por compuestos orgnicos con grupos cromforos

n orbitales no enlazantes presentes en compuestos con heteroatomos de O, S y


halgenos.
n orbitales no enlazantes presentes en compuestos con heteroatomos de O, S y
halgenos.
0 .8 0
E tin ile s tr a d io l (2 6 m g /L )

A b s o r b a n c ia
0 .6 0 G e s to d e n o (5 .4 m g /L )
L e v o n o r g e s tr e l (7 .2 m g /L )
0 .4 0

0 .2 0

0 .0 0
2 2 0 .0 2 4 0 .0 2 6 0 .0 2 8 0 .0 3 0 0 .0
L o n g itu d d e o n d a (n m ) CH3
OH
CH3 C CH OH
CH2 C CH

CH3
OH
CH2 C CH
HO
O

ETINILESTRADIOL (ETE) LEVONORGESTREL (LEV)

O
GESTODENO (GTD)
NaSO3 N=N COONa

HO

SO3Na

Tartracina (E-102)
OH

NaSO3 N=N

A. Anaranjado (E-110) SO3Na


8.6.- ESPECIES ABSORBENTES
B) Absorcin por compuestos inorgnicos
-Los espectros presentan mximos de absorcin anchos y poca estructura
fina.
-Excepcin: iones de la serie de los lantnidos y actnidos. Los e- (4f
y 5f) responsables de la absorcin estn apantallados de influencias
externas por e- situados en orbitales de n cunticos elevados.
Consecuencia: bandas de absorcin estrechas y estn relativamente poco
afectadas por la naturaleza de las especies asociadas a ese in y por el
disolvente.

- Iones y complejos de las 2 primeras series de transicin: son


coloreados al menos en alguno de sus estados de oxidacin. La
absorcin de radiacin Vis se debe a transiciones de e - entre orbitales d
llenos y vacos que difieren en energa a causa de los ligandos unidos a
los iones metlicos. La diferencia de energa entre orbitales d depende
del estado de oxidacin del elemento, su posicin en la Tabla peridica y
la clase de ligando unido a ese in.
8.6.- ESPECIES ABSORBENTES

C) Absorcin de transferencia de carga

- Complejo de transferencia de carga: consta de un grupo


dador de e- unido a un aceptor de e-.

- Cuando uno de estos compuestos absorbe radiacin, se transfiere


un e- del dador a un orbital localizado preferente en el aceptor.

- El estado excitado es un producto de un proceso de oxidacin


/reduccin.

- Complejos inorgnicos y orgnicos.

-Se caracteriza por tener absortividades molares mayores de las


habituales (Max > 1000), circunstancia que conduce a una gran
sensibilidad.
8.7.- APLICACIONES

CARACTERSTICAS DE LOS MTODOS ESPECTROFOTOMTRICOS


- Amplia aplicabilidad.

- Elevada sensibilidad: los lmites deteccin 10 -4 a 10-5 M.

- Selectividad de moderada a alta.

- Buena exactitud: errores de concentracin 1-5% o incluso menores.

- Facilidad y comodidad en las medidas espectrofotomtricas.

- Se prestan a una fcil automatizacin.

CAMPO DE APLICACIN
- Especies absorbentes: compuestos orgnicos que contengan grupos
cromforos y especies inorgnicas como son los metales de transicin.
- Especies no absorbentes: los analitos reaccionan con un reactivo
para producir un compuesto absorbente.
8.7.- APLICACIONES
APLICACIONES MEDIOAMBIENTALES
8.7.- APLICACIONES

MEZCLAS DE ANALITOS
8.7.- APLICACIONES

VALORACIONES FOTOMTRICAS Y ESPECTROFOTOMTRICAS

Las medidas espectrofotomtricas son tiles para localizar


puntos de equivalencia en valoraciones siempre que uno o ms
de los reactivos o productos absorban la radiacin.
Curva fotomtrica: representacin de la absorbancia
(corregida por la variacin de volumen) en funcin del volumen
de valorante.
Valoradore fotomtricos con fibras opticas
Son hebras finas de materiales como el vidrio, silice
fundido o plstico. Su diametro oscila entre 0,05m y 0,6cm.
Son muy utilizados en medicina.
La trasmisin de la luz se produce por reflexin interna,
para que sea total se recubre la fibra con material de indice de
refraccin menor que el de la fibra.
Tambin existen los sensores de fibra ptica(optrodos).
Esto permite instrumentos para la medida in-situ.
Si queremos detectar la contaminacin de la bahia de Cdiz.
Tenemos una fuente de radiacin que se trasmite traves de la
fibra ptica, al final se encuentra un reactivo que va a reaccionar
con el analito en cuestin, esta reaccin va a provocar una
variacin de la radiacin incidente, que se va a recoger a travs
de otra fibra ptica hasta el detector.
A= a. b.
fuente C

detector
El espectrofotmetro convencional Un espectrofotmetro
convencional enfoca la luz policromtica de la fuente en un
monocromador. Este tiene como componentes principales una
ranura de entrada, un elemento que dispersa la luz en sus
longitudes de onda componentes (en general una red de
difraccin), y una ranura de salida que permite seleccionar la
longitud de onda deseada.
Esa luz monocromtica atraviesa la muestra, y llega al
detector. Las mediciones fotomtricas se hacen en base a la
relacin entre la potencia de luz que alcanza al detector cuando
est interpuesta la muestra (P) y cuando no lo est (P0) o
cuando est interpuesto un blanco.
El espectrofotmetro de dispositivo de diodos
El espectrofotmetro de dispositivo de fotodiodos (diode array,
de diodos fue introducido a mediados de los 70. Utiliza una
ptica invertida respecto del convencional: toda la luz de la
fuente atraviesa la muestra, luego es dispersada en un
monocromador que en lugar de una ranura de salida tiene en el
plano focal un dispositivo que integra en un pequeo circuito
varios cientos de detectores tipo fotodiodo de silicio. El nmero
de elementos vara actualmente entre 64 y 4096, siendo los ms
comunes de 512 y 1024 elementos.
Cada elemento del dispositivo recibe luz de un rango particular
de longitudes de onda, y un ordenador procesa los datos
recibidos. Las principales ventajas del espectrofotmetro de
dispositivo de fotodiodos son que para obtener un espectro no
hace falta mover ningn elemento, y los espectros se obtienen
en forma casi instantnea.
diodos

0.1nm de resolucin 2 nm de resolucin


Resolucin espectralPara nuestro propsito, nos concentraremos en los aspectos prcticos, y aqu
lo ms importante es saber qu resolucin necesitamos para nuestro trabajo, y esa resolucin est
expresada en general como ancho espectral del instrumento (spectral bandwidth).
Como regla general, el ancho de media banda instrumental debe ser como mximo 1/10 del ancho
de media banda espectral de la banda de absorcin a medir. Dado que la mayora de las molculas
en solucin presentan en fase lquida bandas de absorcin con anchos medios entre 20 y 40nm, un
instrumento con resolucin de 2nm es generalmente adecuado. A veces encontramos casos
particulares (Ej.: cianocobalamina vitamina B12) con bandas de anchos del orden de 10nm. En
este caso, la cuantificacin con un instrumento de 2nm dara un error por defecto del orden del 2-
3%, mientras que con un equipo de 1nm de ancho de banda el error sera despreciable.

En el caso de medicin de gases o vapores, las interacciones son menores y por lo tanto las bandas
de absorcin tambin, por lo que en general se requieren instrumentos de alta resolucin (0,1nm).
Hay dos parmetros que afectan directamente la resolucin de un monocromador: la densidad de
lneas de la red y la distancia focal. La resolucin es directamente proporcional a cada uno de
estos parmetros.Sin embargo, al aumentar la densidad de lneas de la red aumenta la dispersin
y disminuye la eficiencia reflectiva aparente, lo que se corrige aumentando el ancho de ranura (lo
que disminuye la resolucin). Aumentar la distancia focal tambin tiene su costo: el
monocromador se hace ms grande, disminuyen las tolerancias pticas y mecnicas y las
especificaciones para el alineamiento se hacen ms estrictas.
Por supuesto tambin aumenta el precio.
Las transiciones ms favorecidas son entre el orbital ocupado de energa
ms alta (HOMO) y el orbital desocupado de energa ms baja (LUMO)

El espectro se registra como


Absorbancia (A) vs. longitud
de onda (). Las bandas del
espectro UV son anchas
porque incluyen la estructura
fina de transiciones
vibracionales y rotacionales de
menor energa.

La zona de longitudes de onda que se registra en


un espectro UV- Vis es entre 200 y 800 nm
En esta zona no absorben dobles ni triples enlaces aislados
Solo van a absorber enlaces conjugados y heterotomos
con pares de electrones no compartidos (O, N)

Grupos que absorben luz = CROMFOROS


Espectro de Absorcin de una Muestra

El Espectro de Absorcin de una


sustancia se obtiene registrando el
valor de absorbancia del
ABS
compuesto a diferentes longitudes
1.0 de onda. Al graficar los valores de
cada una de las Longitudes de
Onda (abcisa) vs. el valor de su
respectiva absorbancia (ordenada),
obtendremos el espectro de
0.5 Absorcin o Transmisin.

Un ejemplo tpico de un espectro de


absorcin es el que se muestra en
la figura, pertenece a una solucin
de Permanganato de Potasio de
100 500 900 (nm)
0.75 ppm.
Espectro UV-VIS de la Acetona

1.0
H3C
ABSORBANCIA

0.5 H3C

Acetona

0
210 230 250 270 290 310 330 (nm)
Longitud de onda ()
Espectro UV-VIS de la Cafena

1.0 O
CH3
H3C N
N
ABSORBANCIA

O N N

0.5 CH3

Cafena

0
250 270 290 310 330 350 (nm)
Longitud de onda ()
Espectro UV-VIS de la Aspirina

1.0
H3C O

O O
ABSORBANCIA

CH3
0.5
Acido Acetilsalicilico

0
250 270 290 310 330 350 (nm)
Longitud de onda ()
Espectro UV-VIS del - caroteno

1.0
H3C
H3C CH3 CH3 CH3
CH4
ABSORBANCIA

CH3 CH3 H3C CH3


CH3

0.5 - caroteno

0
350 400 450 500 550 600 (nm)
Longitud de onda ()
A medida que
aumenta la
conjugacin, el
sistema absorbe a
mayores , o sea ms
hacia el visible
Otros Cromforos

Grupos carbonilo conjugados Compuestos aromticos y


heteroaromticos
A mayor conjugacin de sistemas aromticos la absorcin se
desplaza al visible

Este
compuesto es
de color
anaranjado
CONCEPTOS BSICOS UTILIZADOS EN EL ESTUDIO DE LA
ABSORCIN MOLECULAR DE COMPUESTOS ORGNICOS
CROMFORO
Es aquel compuesto que puede absorber luz, es decir aquellos que contienen un
doble enlace ().
AUXCROMO
Es un grupo funcional auxiliar que interacta con un grupo cromforo
aumentando su absorcin (color) y provocando un desplazamiento
batocrmico, ejem: -OH.
DESPLAZAMIENTO BATOCRMICO
Es aquel desplazamiento hacia mayores, O O

estas son de baja E y se acercan ms


hacia el rojo. H O HO O

Flavona 7-Hidroxiflavona
ABSORBANCIA

(nm) .

1 2 MeOH 250, 294, 307 268, 296, 333


AlCl3 250, 293, 306 290, 318, 394

250 270 290 310 330 350 (nm)


Acetato de Na 248, 297, 307 270, 297, 335
ABSORCIN CARACTERSTICA DE COMPUESTOS ORGNICOS

DESPLAZAMIENTO HIPSOCRMICO
1

ABSORBANCIA
2
Es lo contrario al desplazamiento
batocrmico, es decir, es el desplazamiento
hacia el azul a longitudes de onda corta () y
de alta Energa.
250 270 290 310 330 350 (nm)

EFECTO HIPERCRMICO

ABSORBANCIA
Es el incremento en la intensidad de la
HIPERCRMICO
banda, es decir, en la energa.
HIPSOCRMICO

EFECTO HIPSOCRMICO
Es la disminucin de la intensidad de una
banda. 250 270 290 310 330 350 (nm)
Cmo se realizan los
anlisis Cualitativos y
Cuantitativos en la
Espectrofotometra UV-VIS?
ANLISIS CUALITATIVO

La Espectrofotometra UV VIS tienen una aplicacin muy limitada


para el Anlisis Cualitativo ya que la cantidad de mx y mn de
absorcin es muy limitada por lo que la cantidad de bandas es muy
pequea y no son suficientes para una identificacin total y confiable

Efecto de los Solventes


Generalmente los solventes

ABSORBANCIA
tienden a eliminar la estructura
fina de los espectros por lo que se
prefiere obtenerlos en estado
vapor pero esto presenta muchas
dificultades experimentales.
Adems, la naturaleza de los
solventes afectan la posicin de 350 400 450 500 550 600 (nm)

los mx de absorcin
ANLISIS CUALITATIVO

Recomendaciones para el uso de Solvente Mnimo aproximado


Solventes de transparencia (nm)
1. Existe una serie de solventes Agua 190
que se usan para la Etanol 210
espectrofotometra UV-VIS
pero se debe considerar el valor n-hexano 195
mnimo de transparencia en nm Ciclohexano 210
que cada uno de ellos tiene.
Benceno 280
2. Se debe verificar que los
espectros de absorcin a Dietilter 210
comparar hayan sido obtenidos Acetona 330
utilizando el mismo solvente.
1,4-Dioxano 220

(*) Para cubetas de 1.0 cm.