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Crecimiento de
los Mastocitos
Humanos
Ensayo de
Ensayo de la
citocinas y
Degranulacin
quimiocinas
Anlisis de
citometra de RT- PCR
flujo
Resultados
Los mastocitos humanos degranulan en respuesta a la sustancia P y Vip,
pero no a NGF o CGRP
Neuroppticos que activan la degranulacin en clulas LAD2
Para determinar si la capacidad de respuesta a neuropptido es similar en las clulas
humanas humanas primarias (HUMC) se cultivaron clulas cebadas humanas desde sangre
periferica CD34 por 8 semanas en presencia de SCF e IL-6 y se midi la degranulacin en a
respuesta a los mismos estmulos
VIP activa un perfil similar de degranulacin a complex 48/80 por
que ambos estmulos producen afecto a los 5 min.
La activacin por neuropptidos es sensible a los inhibidores de
protenas G y 3 fosfoinositol-quinasa (PI3)
Para caracterizar adicionalmente los efectos de SP, estimulamos LAD2 con ocho
construcciones de pptidos SP falta aminocidos del C-terminal
IP-10 RANTES
(a)
30 60 MCP-1 IL-8 07
*
MCP-1 (ng/ml)
25 50 MIG ** 06
20 * * 05
* 40
pg/ml
pg/ml
15 30 04
* 03
10 20 02
5 10 01
0 0 0
0 01 1 10 0 00003 0003 003 03
Anti-IgE (g/ml) VIP (M)
-1 (ng/mL)
-1 (ng/ml)
600 10 3000 10
500 * 8 2500 * * 8
400 2000
pg/ml
pg/ml
* 6 6
300 1500 4
200 4 1000
* *
600
500
400
pg/ml
Produccin de quimioquinas y de TNF inducida por los agonistas 300
200
100
0
(b)
60
50
40
pg/ml
30
20
10
Figure 5. Neuropeptides activate LAD2 cells
0
to produce chemokines. (a) LAD2 cells were
stimulated with IgE/anti-IgE (see legend,
Fig. 4), substance P, VIP, or compound 48/80
300
for 24 hr and IP-10, MCP-1, MIG, RANTES 250
and IL-8 production was measured in cell-free 200
pg/ml
supernatants (n 3, P < 0 01). (b) HuMC 150
were stimulated as above and IP-10, MCP-1, 100
50
MIG, RANTES and IL-8 production was mea-
0
sured in cell free supernatants (n 3,
P < 0 01).