UNIDAD II

GENERALIDADES SOBRE
MICOLOGA MEDICA
 Clasificacin clnica de las micosis

El hombre posee un grado elevado de inmunidad innata a los hongos. La piel intacta
es la primera barrera frente a los hongos que colonicen la capas superficiales,
cutneas, subcutneas de la piel.

Micosis Oportunistas: Micosis

Candidiosis, Superficiales:
Geotricosis Pitiriasis
Criptococosis, Versicolor
Fusariosis Tia Negra
Mucormicosis, Piedras
Escopulariosis Dermatomicosis

Micosis Subcutnea: Micosis Sistmica:

Esporotricosis , Histoplasmosis ,
Feohifomicosis Coccidioidomicosis
Lobomicosis, Paracoccidioidomicosis
Eumicetomas
 Epidemiologia de las
Micosis
Los hongos son extremadamente frecuentes en el medio
natural, donde existen como saprofitos vivos, por lo tanto
pueden cultivarse de manera ocasional a partir de
muestras clnicas.

Las micosis superficiales y oportunistas son de distribucin

cosmopolita.
Las micosis subcutneas y sistmicas, son de distribucin
geogrfica limitada: vegetales, detritus orgnico, guano de
murcilago.
Mecanismos de Infeccin
1. Contacto directo
2. Penetracin a travs de heridas en la
piel.
3. Inhalacin
4. Ingestin
5. Penetracin a travs de venoclisis, e
inyecciones.
 Patogenia de las Micosis
Las infecciones causadas por hongos son limitadas pero aun as un
numero pequeo de hongos son capaces de ser virulentos para ser
considerado como:

PATGENOS PRIMARIOS: son capaces de iniciar una infeccin en

husped normal aparentemente inmunocompetente. Pueden
colonizar al organismo husped y posteriormente multiplicarse en el
mismo.

PATGENOS OPORTUNISTAS: los hongos actan sobre sujetos

con deficiencias a nivel de sus defensas inmunitarias innatas y/o
adquiridas, como Candida, Cryptococcus neoformans y el gnero
Aspergillus
 Caractersticas de la patognesis
fngica
La enfermedad aparece cuando se producen interrupciones en las barreas de la piel
o de las membranas mucosas o cuando los defectos del sistema inmunitario
permiten a los hongos penetrar, colonizar y reproducirse en el husped.

FACTORES DE VIRULENCIA EN LOS HONGOS

Componentes de la pared celular del hongo

a) Alergenos: componentes de la superficie celular del hongo capaces de disparar
reacciones de hipersensibilidad
en el husped.
b) Adhesinas: molculas de superficie que promueven la interaccin de las clulas
fngicas con las clulas del husped.
c) Cpsula: la presencia de una cpsula extracelular de mucopolisacrido, como
defensa ante el ataque del husped. De los hongos que producen micosis en el
humano, solamente presente en C. neoformans.

Enzimas. Las clulas microbianas poseen enzimas hidrolticas constitutivas e

inducibles que destruyen o alteran las estructuras de las clulas del husped para
promover su invasin a los tejidos..
 Diagnostico de Laboratorio de las
Micosis

Reconocimiento clnico de las micosis

La sospecha clnica, los antecedentes detallados y exploracin fsica
exhaustiva con investigacin de posibles lesiones cutneas y
mucosas, los estudios de la imagen y la obtencin de muestras para
el diagnstico de laboratorio.

Diagnostico de las micosis

El diagnstico de una micosis se hace, fundamentalmente, por la
demostracin del parsito (Hongo) en las muestras biolgicas y su
posterior identificacin taxonmica mediante el estudio de sus
caractersticas diferenciales.
En consecuencia, el diagnstico depende, en gran parte de la toma
correcta del producto o muestra patolgica, por lo que hay que poner
especial atencin en su obtencin
Toma de Producto
Biolgico
 1.- Seleccin apropiada de la muestra.

2.- Rechazo de los productos inadecuados.

a. La saliva no debe ser considerada como esputo
b. Las escamas de piel o de pelos no debern ser colectados al
azar o casualmente
c. No son vlidas las muestras congeladas o almacenadas en
hielo seco por ms de un da.
 3.Datos clnicos orientados a las
micosis
a) Lesiones cutneas circinadas (en forma de crculo o
anillo)

b. Lesiones cutneas descamativas, pruriginosas y

eritematosas
 C) Zona seudoalopecia.
d. Aspecto y crecimiento anormal del
pelo

e. Cuadros respiratorios

f. Trastornos del sistema nerviosos

central o tumoraciones fistulizadas
 4. Cantidad de muestra: la muestra debe ser tomada en forma
abundante.
5. Tiempo. El transporte rpido de los productos clnicos hacia el
laboratorio es importante para la recuperacin de los agentes
etiolgicos de las infecciones micticas, sobre todo porque
generalmente en las muestras existe una mescla de bacterias y
de otros hongos que interfieren en la sobrevivencia del hongo
patgeno.
6. Transporte y almacenamiento:
- A partir de la toma directa del producto, debe practicarse un
frotis sobre un portaobjetos limpio y desengrasado.
Si esto no es
posible, las
muestras deben
ser transportadas
en recipientes
estriles
 En caso de exudados y secreciones en donde existan bacterias en
grandes cantidades debe agregar:

Si se sospecha que la lesin es

causada por actinomicetales, no es
conveniente el uso de antibiticos.
Si se sospecha de organismos
anaerbicos, la muestra debe ser
puesta en medios de transporte
anaerbicos como el medio
tioglicolato
penicilina (500 U/mL)
estreptomicina (500 g/mL)
cloranfenicol (500 g/mL)
 Cuando no se pueden procesar inmediatamente las muestras patolgicas se
almacenan en las siguientes condiciones

1. Los pelos, las escamas de piel y las uas pueden permanecer

almacenados a temperatura ambiente durante varias semanas sin
peligro de deterioro.
2. El esputo, el lquido broncoaspiracin, los cepillos bronquiales, la orina,
la sangre, la materia fecal y los exudados diversos permanecer a 4C
por no ms de 24 horas
3. El liquido cefalorraqudeo, la mdula sea y los fluidos torcicos y
abdominales se mantienen a temperatura ambiente o de preferencia en
incubacin a 30C por no ms de 24 horas.

7. Indicaciones para el paciente

Evitar que el paciente se aplique tpicamente algn medicamento, por
lo menos 3 das antes de la toma del producto
Se lave la boca antes de una toma transbronquial.
Tcnica de Toma de
Muestra
 Escamas
1) Material : alcohol 70%, Placa limpia y estril, bistur,
gasas.
2) Limpieza del rea a analizar
3) Raspado al borde descamativo (bistur, placa)
4) Recoleccin en la placa limpia y estril
5) Envo al laboratorio para:
Examen directo KOH (deteccin)
3
2 adecuados: identificacin

1 Cultivos en medios

4 5
 Pelos
Es necesario tomar los pelos enfermos utilizando una pinza
para depilar, debido a stos estn rotos y daados.
 Uas
1 2 3

Material: alcohol
Ua enferma debe ser Se limpia ligeramente
70%,tijeras, gasas,
raspada con alcohol al 70%
bistur, recipiente,
guantes
4 5 6

Si resulta difcil raspar la Se raspa con un bistur, Se colecta el raspado de

ua, se procede a cortarla por el lado ungueal, la ua enferma en una
para posteriormente caja petri limpia y
 Exudado de mucosas
cavidad bucal, vaginal, farngea, conjuntival y nasal

Se requiere de una exploracin de la regin afectada y la

toma de productos debe hacerse con un hisopo, frotando
rpidamente las lesiones eritematosas , ulcerosas o donde
existan placas blanquecinas.

La realizacin del frotis y la siembra inmediata son de mucha

importancia. Para el transporte de los exudados se recomienda
transporte estril con antibiticos
 Exudado otico
Con ayuda del otoscopio se inspecciona el conducto auditivo
externo para localizar las lesiones o las colonias de los hongos. A
travs del otoscopio se introduce un hisopo fino dirigido al sitio
afectado y se hace un ligero raspado para obtener la muestra.
 Orina

Cuando es posibles a travs de

puncin suprapbica hecha por el
urlogo. En caso de que esto no sea
posible se har por la tcnica del
chorro medio previa sepsia y
antisepsia de la regin genital.

Pus: es una sustancia blanquecina o amarillenta producida por el cuerpo durante

procesos infecciosos

Debe ser recolectado, previa antisepsia de la

regin afectada, puncionado el absceso para
evitar contaminaciones bacterianas. En el
caso de que drene espontneamente por
fstulas, se hace antisepsia de la regin y se
procede a tomar la secrecin con ayuda de
una pipeta Pasteur estril.
Lquido cefalorraquideo

Lo obtiene el mdico
utilizando la tcnica de
puncin lumbar, se
toman tres muestras
1: anlisis citoquimico,
2: cultivo
bacteriolgico,
3: examen micolgico

Mdula sea

Se puede tomar por puncin con una

aguja adecuada, usualmente a partir
de la cresca iliaca por el mdico.
El material de la puncin ser
depositado en gasas estriles y
puestas en recipientes bien cerrados
para evitar contaminacin y la
desecacin.
 Biopsias diversas

Las piezas de biopsia o de necropsia deben ser divididas

en dos fragmentos:
1. Se fija para estudio histopatolgico
2. El otro se coloca en gasa estriles humedecida con
para su posterior proceso en exmenes en fresco,
frotis y cultivo micolgico

Sangre y suero
Para su obtencin se requiere
La muestra debe ser tomada de 10 ml de sangre total, la
con jeringa estril y depositada cual se deposita en tubos de
en tubos que contengan ensayo sin anticoagulante. Una
anticoagulante (EDTA). vez separado el suero, se
conserva en congelacin a
0C, o -70C
Otras temperaturas
obligarn a usar el suero
en un trmino de tiempo
ms corto, ya que los
niveles de Ags o Acs
puede alterarse
 Equipo y material
1. Tubo de ensayo de 15 x 150 mm, estril y seco con
tapn de algodn
2. Tubo de ensayo de 15 x 150 mm, estril
3. Tubo de ensayo de 15 x 150 mm, estril
4. Frascos de boca ancha estriles
5. Pipetas pasteur estriles con bulbos de goma
6. Portaobjetos y cubreobjetos limpios y
desengrasados
7. Cajas de Petri estriles
8. Hisopos y cuadro de alfombra estriles
9. Jeringas de 10 y 20 ml
10. Estuche de diseccin
11. Estuche de diagnstico clnico
12. Hojas de bistur con el filo mellado
13. Espejo vaginal
14. Anticoagulante
15. Etanol a diferentes concentraciones
16. Torundas
17. Refrigerador
18. Mecheros
19. Medioos de Cultivo de agar dextrosa Sabouraud y sin
antibiticos y medios de Tioglicolato
20. Mesa de exploracin
 Envo de muestras para examen micolgico

Los productos biolgicos deben empacarse con cuidado para evitar

la ruptura de los frascos o tubos de vidrio y la diseminacin del
material patolgico, y etiquetarse con los datos siguientes:
1. Nombre del paciente
2. Tipo de producto
3. Fecha de la toma
4. Resumen epidemiolgico, clnicos y del laboratorio
5. En el remitente se anotan los datos del mdico tratante o del
laboratorio que envia las muestras

A excepcin de las muestras de pelos, escamas y uas, todos los

dems productos biolgicos debern ser recibidos por el laboratorio
de micologa y procesados en un trmino no mayor de 24 horas
Tcnicas de Observacin
Microscpica
 EXAMEN DIRECTO

El examen directo se efecta para observar estructuras del hongo en especmenes

patolgicos, o para observarlo en sus caractersticas microscpicas a partir de cultivos
desarrollados a travs de las cuales se establece la identificacin taxonmica

a) Observacin microscpica directa

de productos biolgicos.
Cuando stos son lquidos, basta
agregar una gota de KOH 10% en un
portaobjetos y una dos gotas del
producto biolgico para estudiar, se
cubre la preparacin con cubreobjetos
y se observa al microscopio, de
preferencia de contraste de fases para
diferenciar las estructuras fngicas de
los elementos tisulares.

Cuando son pelos, escamas, se

depositan sobre el portaobjetos dos
gotas de KOH 15% a 20%, o de
Lactofenol, para aclarar las
estructuras tisulares y destacar las
clulas fngicas. Deje actuar el
aclarante 5 minutos y observe al
microscopio.
 La tcnica del examen directo de escamas con cinta
adhesiva transparente (durex)
Para el diagnstico de pitiriasis versicolor, consiste en aplicar
la superficie adhesiva, presionando un poco sobre las lesiones
discrmicas, despus se pega la cinta sobre el portaobjetos y
se observa al microscopio.
 Observacin
Cultivo de levaduras
Observacin microscpica
microscpica de
de cultivos
cultivos

Si se trata de cultivos levaduriformes basta con

tomar un fragmento de la colonia y disgregarla en
una o dos gotas de agua, solucin salina algn
colorante, para observar al microscopio de
contraste de fases.

Si se trata de colonias
filamentosas, hay que
tomar con el asa
micolgica un fragmento
Cultivo de hongos filamentosos
del centro de la colonia y
dilacerarlo con la ayuda de
una aguja de diseccin, se
agrega una o dos gotas de
azul de algodn, se
deposita el cubreobjetos y
se observa al microscopio.
 FROTIS E IMPRONTA

Los frotis se realizan de los productos biolgicos en fase lquida como

orina, sangre, secrecin vaginal, bucal, nasal, liquido pleural, LCR, etc.
Se realiza cuando la observacin de los elementos fngicos no es clara siendo, por
tanto, necesario teir a los hongos para facilitar la observacin particularmente si
se trata de levaduras de Candida o de H. capsulatum

Las improntas se elaboran aplicando la superficie el

portaobjetos sobre las lesiones por estudiar, ejerciendo una
presin moderada.
Una vez que los frotis y las improntas se han secado al aire, se fijan
con calor o con alcohol metlico y se tien con las tcnicas indicadas
en cada caso
 TCNICAS DE TINCIN

Las tcnicas de tincin pueden ser simples,

compuestas o especiales para la aplicacin en
tcnicas de histopatologa

La eleccin de la tcnica depende del producto

que se va a procesar y de la finalidad que se
persiga al realizar el procedimiento.

-Las clulas generalmente son tratadas para

coagular el protoplasma antes de teirlas,
proceso llamado FIJACIN, se puede llevar a
cabo por calor o agentes qumicos.

-Si se desea simplemente incrementar el

contraste de las clulas para la microscopa, son
suficientes los procedimientos simples de
tincin
 Azul de Lactofenol

Es til para realizar el examen directo de cultivos, ya que es una tcnica

rpida que permite visualizar perfectamente las estructuras

Consiste en depositar una gota del colorante sobre un portaobjetos y sobre

ella colocar un fragmento del cultivo por estudiar

Se coloca un cubreobjetos sobre la preparacin y se procede a observar.

Esta tcnica se puede teir preparaciones para conservacin a largo plazo
 Tincin negativa con tinta China

til para visualizar la cpsula de C. neoformans en LCR, improntas

o exmenes directos de cultivo.

Coloca una gota del producto biolgico a examinar y una gota de

tinta china , sobre ella se coloca un cubreobjetos y se procede a
observacin.
 Tincin de Gram

Es un sistema de dos tinciones simples sucesivas, separadas por una

fase de decoloracin selectiva. Permite diferenciar las bacterias que
retienen el primer color (Gram-positivas) de las que no lo retienen
(Gram-negativas). Esta diferencia en comportamiento refleja diferencias
estructurales y fisiolgicas entre ambos grupos de bacterias)

Staphylococcus aureus
Neisseria meningitidis
 Tcnica de microcultivo

Cultivo en portaobjetos.

Es una tcnica de gran utilidad

para el estudio de los Hongos se
puede emplear para:

a) Identificacin taxonmica de Microc ultivo desarrollado

se separan cubre y portaobjetos

hongos se desecha agar

b) Estudio de ontogenia de los

conidios
Preparacin
del
microcultivo

c) Obtencin de material para

microfotografa micrografa
electrnica
d) Elaboracin de preparaciones
permanentes tiles en la
enseanza
e) Como apoyo a El cubreobjetos del microc ulivo se c oloca
sobre un portaobjetos limpio con una gota
Al portaobjetos del mic roc ultivo se le aplic a
una gota de LFAA y se pone un c ubreobjetos
de LFFA limpio
identificaciones diferenciales
 Medios de cultivo

La identificacin primaria de los

hongos depende del criterio
morfolgico, como color o
produccin de conidios de la
colonia fngica slo podr ser
demostrada a travs del
crecimiento en el cultivo.

Es recomendable efectuar el
primoaislamiento del hongo a
partir de un producto patolgico
con cultivo estndar, como Agar
dextrosa Sabouraud, con o sin
antibiticos. Penicilina,
estreptomicina, cloranfenicol, o
concentraciones bajas de
antifngicos como difenil,
actidiona o amonio o
modificando el pH para inhibir el
MEDIOS DE CULTIVO PARA
AISLAMIENTO
-Agar Sabouraud con antibiticos:
es un medio utilizado para la
mayoria de hongos patgenos. La
cicloheximida inhibe el desarrollo
de hongos contaminates y el
cloranfenicol inhibe a bacterias.
-Agar aceite de oliva. Es un medio
utilizado para el aislamiento de
levaduras lipoflicas como
Malassezia sp
MEDIOS EMPLEADOS PARA
AISLAMIENTO Y
CONSERVACIN.
-Agar papa dextrosa
-Agar extracto de suelo
-Agar Czapek-Dox
-MEDIOS EMPLEADOS PARA
MEDIOS PARA FAVORECER LA
CONIDIACIN
-Agar extracto de levadura
-Agar Borelli
MEDIOS PARA
DIFERENCIACIN
-Medio para prueba de
dermatofitos (DTM)
-Agar Biggy
-Agar harina de arroz
-Chromagar
-Filamentacin en suero
MEDIOS PARA OBTENCIN
DE FASES PARASITARIAS
-Agar infusin cerebro corazn
Una vez sembrado un medio de cultivo, se incuba con las siguientes
recomendaciones:

-A 30 C para la mayora de los hongos patgenos. (En algunos casos se

recomienda 25 C)

A 37 C para levaduras o cuando se quiere convertir a fase levaduriforme, a

algunos hongos patgenos.

A temperatura ambiente hongos ambientales.

En cuanto el tiempo de incubacin, segn el tipo de hongo, se puede observar

crecimiento de la siguiente manera:

-24 a 48 horas, para levaduras

-2 a 4 das para hongos filamentosos comunes
-15 das en promedio para la mayora de los hongos patgenos
-4 semanas o ms para algunos hongos patgenos.