ESTRUCTURA Y MORFOLOGA MICROBIANA

Tamao, forma y arreglos de las bacterias

Cpsula y Capa S
Pared celular de Bacterias GRAM+ y GRAM-

Dr. Enrique Mamani Zapana

Palabras clave

Procariontes
Cocos
Bacilos
Peptidoglucano
Murena
Acido N-acetilmurmico
N-acetilglucosamina
Capa S
Capa de limo
Estructura de una
clula procaritica
Las clulas procariticas no poseen organelas
(estructuras encerradas en bicapas).

Todas poseen citoplasma, ribosomas,

membrana plasmtica y nucleoide.

Casi todas poseen pared celular.

Caractersticas distintivas de una
clula procaritica

DNA sin envoltura y estructurado como cromosoma

circular
DNA no se asocia a histonas
Paredes celulares casi siempre con peptidoglucano
Fisin binaria
TAMAO, FORMA Y ARREGLOS
 Caractersticas
Dimetro = 0.2 2.0 m
Longitud = 2 8 m
Promedio: Escherichia coli
(1.1 1.5 m x 2-6 m)
Tres formas bsicas:
Cocoide (esfrica)
Bacilar (abastonada,
cilndrica)
Espiralada
 Cocos

Plano de
divisin

Diplococos

Estreptococos

Divisin celular en un solo plano, formando pares o cadenas.

 Azotobacter macrocytogenes

Cocos
Ttradas

Sarcina spp.
Divisin de
clulas en
dos, tres y en
mltiples
Sarcinas
planos y que
permanecen
unidas. Staphylococcus spp.

Estafilococos
 Bacilo simple
Bacilos

Diplobacillus variablis
Los bacilos
solo se dividen
por el plano
ms corto. Estreptobacilo
Streptococcus spp.
Pueden
aparecer
ovales a pesar
de ser bacilos.
Cocobacilo
E.coli
Formas
espiraladas Vibrin
Cuando tienen forma
Helicoidales y de bastn curvado,
toman el nombre de
flexibles, y se
vibriones.
mueven por
filamentos
axiales contenidos
en una capa
flexible externa:
Espiroqueta
espiroquetas

Helicoidales, pero
no flexibles, se
Espirilo mueven por
flagelos.
SEM = scanning electron microscopy (microscopa electrnica de barrido)
Formas inusuales

Bacteria de forma estrellada

Stella sp.

Haloarcula sp.
Bacteria rectangular o cbica
CUBIERTAS EXTERNAS A LA PARED CELULAR
 Capas S, capas superficiales o
estructuras paracristalinas

Protenas o glicoprotenas
Casi todas las bacterias y todas las arqueas (aqu
es pared celular)
Puede tener apariencia cristalina con simetra
hexagonal, tetragonal o trimrica
Se pueden asociar a:
LPS
Peptidoglucano
Membrana
Capas S
Poros de idntico
tamao
Filtran
macromolculas de
acuerdo a su tamao
y carga.
Contribuyen a la
virulencia si se
presenta como
componente
Aspecto de la capa S de Aquaspirillum
estructural de (Spirillum ) serpens (una arquea) con simetra
patgenos hexagonal, vista al microscopio electrnico de
transmisin
 Capa S

Microsocopia electrnica de transmisin de Methanococcus voltae,

una arquea que solo posee una capa S por fuera de la membrana
plasmtica, de forma que cumple el rol de pared celular.
Capas S
Glucoclix o glucocliz
Cubierta de azcar.
Cualquier sustancia que rodea
a la clula.
Polisacrido, polipptido o
ambos.
Se sintetiza dentro de la clula y
se secreta.
Si est bien organizada y
firmemente pegada a la pared
celular: cpsula Microscopa de contraste de
Si no es bien organizada y se fases por tincin negativa de
fija levemente a la pared celular: las cpsulas de Acinetobacter.
capa de limo
Cpsula
Contribuye a la virulencia
bacteriana
Protege a la bacteria de la
fagocitosis

Bacillus anthracis produce

una cpsula de cido D-
glutmico: forma patgena del
ntrax
Streptococcus pneumoniae Micrografa electrnica
solo produce neumona si la de un corte de
Rhizobium trifolii en que
forma bacteriana est rodeada se visualiza la cpsula.
de una cpsula polisacrida.
 Constituyentes de la
cpsula
Polisacridos:
Heteropolisacridos
aninicos
Polioles (con cpsula
radicales)
Aminoazcares
Homopolisacridos
neutros:
Levanos
Dextranos
Celulosa Microscopa electrnica de un corte
de Lepthotrix discophora,
Alginatos mostrando su densa cpsula.
Polipptidos (solo Bacillus): Beveridge TJ y Graham LL. Surface
layers of bacteria. Microbiol Rev
Glutamilpolipptidos 55(4):684-705.
Capa de limo, limo externo o slime layer

Tambin son homo o

heteropolmeros
Biopelculas
Excedentes de la
produccin de
cpsulas
Falla en el anclaje de
las cpsulas a las
superficies; son
expulsados y flotan Seccin de una biopelcula de una mezcla de cianobacterias
hasta que se asocian y hetertrofos. En la flecha grande se sealan clulas lisadas
y en la pequea, fragmentos de envoltura con excedentes
a otras superficies. de homo y heteropolmeros. Beveridge TJ y Graham LL.
Surface layers of bacteria. Microbiol Rev 55(4):684-
705.
 PARED CELULAR

Bacillus anthracis Escherichia coli

(gram+) (gram-)
Generalidades de la pared celular

Estructura semirrgida
Responsable de la forma de la clula.
Previene el rompimiento de la clula
cuando la presin del agua dentro de la clula
sea mayor que afuera.
Punto de anclaje para el flagelo.
Sitio de accin de algunos antibiticos.
Su composicin qumica ayuda a clasificar
a los principales grupos bacterianos.
 Composicin qumica

Red macromolecular
llamada peptidoglucano
(= murena).
Peptidoglucano: red de
unidades repetidas de un
disacrido enlazado por
polipptidos y que rodea a
toda la clula.
Disacrido formado por:
N-acetilglucosamina
(NAG)
La zona en amarillo resalta
cido N-acetilmurmico la diferencia entre ambas
(NAM) molculas. El enlace que
las une es de tipo -1,4.
 Pared celular de bacterias grampositivas
Muchas capas de peptidoglucano formando una estructura gruesa y
rgida.
Las gramnegativas solo tienen una capa delgada de
peptidoglucano.
En grampositivas hay cidos teicoicos que consisten en:
Un alcohol (glicerol o ribitol)
Fosfato
Dos clases de cidos teicoicos:
cido lipoteicoico (abarca capa de peptidoglucano y est ligado a
la membrana plasmtica)
cido teicoico de pared (ligado a la capa de peptidoglucano)
Los cidos teicoicos tienen carga negativa y se unen y regulan el
movimiento de cationes dentro y fuera de la clula
Participan en el crecimiento, evitan el rompimiento de pared y la lisis
celular.
Los cidos teicoicos proveen la especificidad antignica de la pared.
 porcin azucarada
del peptidoglucano
(aa)

porcin peptdica
del peptidoglucano
(siempre 4 aa
unidos al NAM)

fila de 10 a 65
azcares cido teicoico de pared

cido
lipoteicoico
Pared celular de bacterias grampositivas
Pared celular de bacterias gramnegativas

Una o muy pocas capas de peptidoglucano

Una capa externa
El peptidoglucano est enlazado a lipoprotenas en la
membrana externa y est en el periplasma
Periplasma: fluido del tipo gel entre la membrana
externa y la membrana plasmtica
El periplasma contiene gran cantidad de enzimas
degradadoras y protenas de transporte
No hay cidos teicoicos
Son paredes ms susceptibles a rompimiento
mecnico
 Membrana externa
Es parte de la pared celular de
bacterias gramnegativas
Composicin: lipopolisacrido
(LPS).
Es casi una bicapa fosfolipdica
con polisacridos y protenas.
Lpidos y polisacridos forman
estructuras lipopolisacridas,
llamndose capa lipopolisacrida o
LPS.
Membrana externa (outer
membrane)
 Composicin qumica del LPS

Tres porciones:
Lpido A
Ncleo del polisacrido (core)
Polisacrido O
Polisacrido O consta de
azcares de 6 carbonos:
Galactosa, glucosa, manosa y
ramnosa.
Lpido A: sin glicerol, los cidos
grasos se unen por enlaces
amino ster a un disacrido de
N-acetilglucosamina-fosfato.
 Estructura del LPS de las bacterias
gramnegativas
POLISACRIDO O ESPECFICO NCLEO DEL POLISACRIDO LPIDO A

KDO P enlace amino ster

P
Glu
Gal Hep P KDO GlcN
Nac

Glu Gal Glu Hep Hep KDO

GlcN

P
n P

Siempre hay una secuencia lpido A cetodesoxioctonato core - polisacrido O

especfico.
cidos grasos del lpido A: c. caproico, lurico, mirstico, palmtico y esterico.
El disacrido N-acetil glucosamine fosfato se une al ncleo del polisacrido a travs
del cetodesoxioctonato.
KDO = cetodesoxioctonato; Hep=heptosa; Glu=glucosa; Gal=galactosa;
GluNAc=N-acetilglucosamina; GlcN=glucosamina; P=fosfato. En algunos casos la
porcin del lpido A es txica para animales y toma el nombre de endotoxina.
Composicin qumica (cont.)

En la membrana externa, el LPS se asocia con protenas

formando la porcin exterior de la membrana externa.
En la cara interior de la membrana externa, muchas bacterias
presentan lipoprotena, que sirve de anclaje entre la membrana
externa y el peptidoglucano.
En la parte exterior de la membrana externa, el LPS se halla en
vez de los fosfolpidos, que se encuentran principalmente en la
porcin interna.
Corte de Pseudomonas aeruginosa PAO1 mostrando largas
cadenas O del LPS con longitud aproximada de 40 nm.
Porinas

La membrana externa de bacterias gramnegativas es

ms permeable que la membrana citoplasmtica.
Porinas: protenas que actan como canales para el
pasaje de sustancias hidroflicas de bajo peso
molecular.
Tres unidades idnticas
Transmembranales
Agujeros de 1 nm de dimetro
No es permeable a enzimas ni a molculas grandes
Retiene enzimas que se encuentran en el periplasma.
Estructura general de membrana y pared celular
en Escherichia coli

LPS= lipopolisacrido OM= membrana externa

PL= fosfolpido IM= membrana interna
 Cilindro beta

Esqueleto polipeptdico de
Lamb en Escherichia coli

Estructura de la protena de membrana en

cilindro beta
Trmero visto desde arriba en direccin
El monmero visto de lado.
perpendicular al plano de la membrana. El
lazo azul juega un rol en la interaccin del
monmero con su unidad vecina. El lazo Porina OmpF de E. coli
naranja adelgaza el canal.
Espacio periplasmtico

Tiene un espesor de 12 a 15 nm
Gelatinoso por la presencia de protenas
Varias protenas:
Enzimas hidrolticas
Protenas de unin
Quimiorreceptores
Corte de Escherichia coli K12 mostrando el espacio periplsmico
relleno de periplasma (P). La membrana externa (OM) se ha
teido bastante. No se ha teido la capa de peptidoglucano.
PM= membrana plasmtica. Barra = 25 nm.
 Formas comunes de bacterias generadas va
defectos en un modelo de pared celular cilndrica.
PNAS . 2008.
105(49):19282-19287

A= remocin de enlaces peptdicos, tipo caulobacter crescentus

B= Reduccin de longitudes de pptidos y glicanos en forma helicoidal genera la forma
helicoidal de Helicobacter pylori.
C= Remocin de dos parches de defectos peptdicos en caras opuestas del cilindro genera
formas similares a las de E. coli tratada con vancomicina.
D= Sustitucin aumentada de segmentos glicano-pptido-glicano en el lugar de los glicanos
cerca al centro del cilindro genera formas similares a las de cualquier gramnegativa tratada con
inhibidores
Mecanismo de la coloracin Gram

Hans Christian Gram (1885) desarrolla un mtodo de

tincin, basndose en los estudios de Ehrlich.
Usa lugol y observa que algunas bacterias retienen
colorante utilizado. Hans Christian
Joachim Gram,
Dio lugar a la separacin entre bacterias 1852-1938.

grampositivas y en gramnegativas
Usa en secuencia:
1. Cristal violeta (colorante principal)
2. Lugol (mordiente)
3. Alcohol-acetona (desecador)
4. Safranina o fucsina bsica (colorante de contraste)
Paredes celulares atpicas
Mycoplasma no posee
pared celular
Bacterias ms
pequeas
En sus membranas
tienen esteroles
Paredes celulares atpicas - cidorresistentes
Se refiere a la resistencia a
decoloracin por cidos
que presenta la pared
celular de algunas
bacterias
Mycobacterium
tuberculosis, Nocardia spp.
No se tien bien al gram
(dan gram+)
Se usan tintes
concentrados y
combinados con calor
Ya teidos resisten la decoloracin con cidos o con etanol
Esto se debe a la presencia de cido miclico en la pared celular
Se usa la tcnica de Ziehl-Neelsen
Paredes celulares atpicas - acidorresistentes

Estructura de la pared celular de Mycobacterium tuberculosis

Mtodo de tincin de Ziehl-Neelsen

1.Cubrir con colorante Fucsina.

2.Calentar por 5 minutos
3.Cubrir con alcohol-cido hasta que
corra incoloro.
4.Lavar con agua corriente.
5.Recolorear con azul de metileno,
durante 1 minuto.
6.Lavar con agua corriente.
7.Secar a la llama del mechero
Resultado
Dao a la pared celular de grampositivas

Las sustancias que atacan la pared celular a menudo no daan

a la clula eucaritica por su diferente composicin.
Por tal razn la sntesis de pared celular es blanco de
antimicrobianos.
Lisozima: hidroliza los enlaces entre los azcares del esqueleto
de pepidoglucano.
Si no hay lisis, la clula sin pared toma el nombre de
protoplasto, esfrico y capaz de seguir metabolizando.
Algunas bacterias, como Proteus, pierden su pared y se
transforman en clulas irregulares llamadas formas L,
espontneamente o en respuesta a la penicilina (que inhibe la
sntesis de pared celular) o lisozima (que remueve la pared
celular)..
Dao a la pared celular de gramnegativas
La lisozima no causa un dao tan extenso a las gramnegativas.
El contenido celular, la membrana plasmtica y lo que queda de la
membrana externa se llaman esferoplasto.
Si se desea causar un efecto degradador en bacterias gramnegativas,
previamente deben ser tratadas con cido etilendiaminotetraactico
(EDTA), que debilita los enlaces inicos de la membrana externa y la
daa permitiendo el acceso al peptidoglucano.
Debido a que los antibiticos como la penicilina inhiben la formacin de
los puentes cruzados peptdicos del peptidoglucano, la mayora de
bacterias gramnegativas no son tan susceptibles a la Penicilina
como las grampositivas, porque la membrana externa de las
gramnegativas forma una barrera que inhibe la entrada de esta y otras
sustancias (y tiene pocos puentes cruzados peptdicos)
Sin embargo, son muy susceptibles a antibiticos beta-lactmicos
que penetran esta regin mucho mejor.
Pared celular en arqueas
No hay peptidoglucano
Hay polisacridos diversos
Pueden no poseer pared
Poseen pseudomurena o
pseudopeptidoglucano
La pseudomurena contiene
cido N-
AcetilTalosaminurnico en
vez de NAM
Carece de D-aminocidos
No se pueden colorear con
Gram pero se ven
gramnegativas (por no tener Pseudomurena
peptidoglucano)
Pared celular en hongos
El principal componente es la
quitina [polmeros de N-
acetilglucosamina]
Componente estructurales:
Microfibrillas de quitina
Quitosano en zigomicetos,
polmero de glucosamina con
enlaces (1-4)
Glucanos con enlaces
Componentes tipo Gel: Quitosano
Manoprotenas (formando una
matriz a travs de la pared
celular)
Glucanos y mananos en levaduras
Pared celular en hongos
Melaninaspigmentos oscuros (le dan resistencia a
lisis enzimtica, fuerza mecnica y proteccin ante la
luz UV, radiacin solar y desecacin).
Pared celular en hongos
Tabla comparativa
Tabla comparativa