UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN ANTONIO ABAD DEL

CUSCO
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

LABORATORIO DE
MICROBIOLOGA MDICA

DOCENTE: Dra. Yanet Mendoza Muoz

ALUMNA: Ingrid Eliana Holguino Rivas
CDIGO: 150555
SEMESTRE ACADMICO: 2017-I

CUSCO PER
 OBJETIVOS

Definir la importancia clnica en el diagnostico de

Micobacterium Tuberculosis.

Preparar una lamina perfectamente coloreada por mtodo de

Gram y Zielh Neelsen poniendo en practica la bioseguridad
para microorganismo de riesgo 3.

Reconocer y diferenciar las BAAR POSITIVAS en el microscopio

con lente de inmersin en forma individual con un acierto del
100%
MATERIALES Y REACTIVOS

Portaobjetos
Palitos estriles
Papel craft
Mechero
Pinzas
Armazn de sostn
Lega
Tintes para coloracin Gram (Violeta de genciana, Lugol, Alcohol
acetona, Safranina)
Batera Zielh Neelsen (Fucsina fenicada)
Aceite de inmersin
Microscopio ptico
 PROCEDIMIENTO

PROCEDIMIENTO DE LA TOMA Y TRANSPORTE DE MUESTRAS

La mejor muestra es la que viene de los pulmones; siga los siguientes pasos
para obtener una buena muestra:
1. Lave su boca con agua limpia para eliminar alimentos y otras partculas
2. Inhale profundamente 2 o 3 veces y exhale fuertemente cada vez
3. Tosa profundamente para producir el esputo
4. Coloque el recipiente de la muestra cerca de su boca para recolectar la
muestra, en lo posible evitar la contaminacin fuera del recipiente
5. Posterior a la muestra lave sus manos
6. Siga los pasos del procedimiento de transporte de muestras
 PROCEDIMIENTO DE LA TOMA Y TRANSPORTE DE MUESTRAS
1. Primero revise la calidad y cantidad de la muestra
2. Etiquete con nombre del paciente, numero de identificacin y
fecha de toma de muestra
3. Prepare el material para realizar el empaque (material
absorbente, contenedor secundario rgido, contenedor terciario,
material amortiguador)
4. Usar el mtodo de triple embalaje para el transporte de muestra

Abra el material secundario e integre Envuelva el contenedor primario

dentro el material absorbente con material amortiguador

FUENTE: OMS, OPS. Recomendaciones para el embalaje y envo apropiado de muestras potencialmente infecciosas con agentes
altamente patgenos. Disponible en: http://www.who.int/csr/resources/publications/envio-muestras-es.pdf
Ponga el contenedor primario dentro del Poner el contenedor secundario
contenedor secundario, Cierre este dentro del contenedor terciario
ltimo (amortiguando entre ambos con
papel)

Anote en el exterior del

contenedor terciario datos para
su identificacin (del paciente
y del tipo de riesgo)

FUENTE: OMS, OPS. Recomendaciones para el embalaje y envo apropiado de muestras potencialmente infecciosas con agentes
altamente patgenos. Disponible en: http://www.who.int/csr/resources/publications/envio-muestras-es.pdf
 PROCEDIMIENTO PARA LA COLORACION GRAM
1. Antes de realizar la coloracin recuerde empezar por la tcnica
de frotis y fijacin, para esto prepare una cama (lega y papel
craft) con mechero. Usando bioseguridad abra el frasco de la
muestra de esputo y con un palito estril coja un poco, lleve esta
a la lamina portaobjetos y empiece por el frotis. Para la fijacin
use el mechero (calor). Posterior a esto prepare los materiales y
reactivos necesarios para la coloracin

FUENTE: Gua de laboratorio de microbiologa y Explicacin en clases

 1. .
2. Use el mtodo de tincin VALAS (Violeta, Agua, Lugol, Alcohol
acetona, Safranina)
Luego de poner el portaobjetos ya fijado sobre el armazon de
sostn empiece poniendo el Colorante Violeta de Genciana
sobre la lamina. Espere 1 minuto
Sujetando un extremo de portaobjetos llevar a chorro de agua
moderada

FUENTE: Gua de laboratorio de microbiologa y Explicacin en clases

 Estando el portaobjetos nuevamente sobre armazn colocar
gotas de Lugol. Esperar 1 minuto, luego coger un extremo con
pinzas y llevar a chorro de agua moderada
Luego de poner de nuevo sobre armazn colocar gotas de
alcohol acetona. Esperar 1 minuto, luego llevar nuevamente a
chorro de agua moderada
Finalmente colocar gotas de safranina sobre lamina
portaobjetos, en este caso esperar solo 30 segundos,
seguidamente llevar a chorro de agua moderada

FUENTE: Gua de laboratorio de microbiologa y Explicacin en clases

 2. .
3. Posterior a proceso dejar secar la lamina portaobjetos al aire
libre
4. Limpiar el lugar de trabajo y poner en su lugar los materiales
usados
5. Observar al microscopio enfocando de 40 aumentos a 100X (1000
aumentos) con aceite de inmersin

FUENTE: Gua de laboratorio de microbiologa y Explicacin en clases

 PROCEDIMIENTO PARA LA COLORACION ZIELH NEELSEN
1. Luego de realizar la tcnica de frotis y fijacin prepare los
materiales necesarios para la coloracin
2. Coloque el portaobjetos sobre el armazn de tincin, luego cubrir
con fucsina fenicada y dejar reposar de 30 a 60 segundos
3. Calentar la preparacin, haciendo pasar el mechero por la
lamina, obteniendo 5 vapores (sin hervir). Luego dejar enfriar y
llevar a chorro de agua moderada.

FUENTE: Gua de laboratorio de microbiologa y Explicacin en clases

 3. .
4. Decolorar con alcohol acido por 2 minutos y llevar nuevamente a
chorro de agua moderada
5. Cubrir con azul de metileno por 1 minuto y lavar nuevamente.
Dejar secar
6. Observar al microscopio enfocando de 40 aumentos a 100X (1000
aumentos) con aceite de inmersin

FUENTE: Gua de laboratorio de microbiologa y Explicacin en clases

RESULTADOS - INTERPRETACIN

PROCESO DE TOMA Y TRANSPORTE DE MUESTRAS

PROCESOS EXITOSOS
Teniendo en cuenta el riesgo del microorganismo
(RIESGO 3)
COLORACIN GRAM
COLORACIN ZIELH NEELSEN
 CONCLUSIONES

Concluimos con que el diagnostico de certeza de Tuberculosis es

microbiolgico, es decir identificacin de la bacteria Micobacterium
Tuberculosis, al realizar un buen diagnostico facilitaremos el control de la
enfermedad por lo que este proceso es indispensable

Al entender que esta bacteria esta clasificada junta a los microorganismos

de riesgo 3 es claro decir que puede provocar enfermedad grave, por lo
que la lectura de la OMS y demas nos ayudo a prevenir el riesgo de
contraer cualquier enfermedad