ESPECTROSCOPIA

ULTRAVIOLETA VISIBLE

Mg. Neptali Ale Borja

naleb@unmsm.edu.pe
nalebunmsm@gmail.com

Agosto 2017
 ESPECTRO ELECTROMAGNETICO

Tal y como podemos imaginar dicho efecto

depender de la energa de dicha radiacin
ESPECTRO ELECTROMAGNETICO
 COMPORTAMIENTO DE LA MATERIA AL
SOMETERSE A RADIACIN

RADIACION EFECTO

Rayos X y csmicos Ionizaciones de las molculas

UV-Visible Transiciones electrnicas entre los orbtales

atmicos y moleculares

Infrarrojo Deformacin de los enlaces qumicos

Microondas Rotaciones de los enlaces qumicos

Radiofrecuencias Transiciones de spn electrnico o nuclear en los

tomos de la molcula.
COMPORTAMIENTO DE LA MATERIA AL SOMETERSE
A RADIACIN

Cuando la radiacin incide sobre una sustancia no toda ella se ve

afectada por la misma; al tomo o conjunto de tomos que
absorben radiacin se le denomina cromforo. Cada tcnica
espectroscpica ser distinto dentro de una misma molcula.

Grupos de tomos enlazados responsables de la absorcin

electrnica o de la absorcin en el ultravioleta o visible. Algunos
autores consideran como grupo cromforo solamente sistemas con
enlaces insaturados por ejemplo, C=C, C=O , NO2 , anillo
bencnico
 COMPORTAMIENTO DE LA MATERIA AL
SOMETERSE A RADIACIN

En las molculas existen tambin tomos o grupos de tomos que

no absorben radiacin, pero hacen que se modifique alguna de
las caractersticas de la absorcin del cromforo, se denominan a
tales grupos auxocromos. Ej. grupos OH, NH2 y halgenos.

Efecto o desplazamiento batocrmico: Cuando la longitud de onda

de absorcin de una sustancia se desplaza hacia longitudes de
onda ms grandes o de menor energa por efecto del solvente o
por sustituyentes; tambin se conoce como corrimiento hacia el
rojo.
 COMPORTAMIENTO DE LA MATERIA AL
SOMETERSE A RADIACIN

Efecto o desplazamiento hipsocrmico o corrimiento hacia el azul,

cuando la longitud de onda de absorcin de una sustancia se
desplaza hacia longitudes de onda menores o de mayor energa por
efecto del solvente o por sustituyentes.

Efecto hipercrmico: El incremento en la intensidad de la absorcin

es decir un aumento en la magnitud del coeficiente de absortividad
molar para una longitud de onda dada, por efecto del solvente o de
sustituyentes.
 COMPORTAMIENTO DE LA MATERIA AL
SOMETERSE A RADIACIN

Efecto hipocrmico: Disminucin en la intensidad de la

absorcin es decir disminucin en la magnitud del coeficiente de
absortividad molar para una longitud de onda dada, por efecto del
solvente o de sustituyentes.
CARACTERSTICAS IMPORTANTES DE MTODOS
ESPECTROSCPICOS
TCNICA
INFORMACIN OBTENIDA
ESPECTROSCPICA
Estructura total de la molcula incluida la
Rayos X estereoqumica de la misma a partir de las posiciones
relativas de los tomos.
Existencia de cromforos y/o conjugacin en la
Ultravioleta-Visible
molcula a partir de las absorciones observadas.
Grupos funcionales a partir de las absorciones
Infrarrojo
observadas.
Formula molecular y subestructuras a partir de los
Espectrometra de masas (*)
iones observados.
Grupos funcionales, subestructuras, conectividades,
Resonancia magntica estereoqumica, etc a partir de datos de
nuclear desplazamiento qumico, reas de los picos y
constantes de acoplamiento observadas.
(*) No es una tcnica espectroscpica en el sentido que estamos viendo pues no existe irradiacin
electromagntica de la sustancia y no se produce absorcin de dicha radiacin
 Que tcnica utilizar ?
Depender en gran medida de los objetivos perseguidos. De una
manera general podemos indicar como objetivos sucesivos los
siguientes:

Frmula molecular.
Identidad de los grupos funcionales.
Conectividades de los carbonos.
Posicionamiento de los sustituyentes y/o los grupos funcionales
sobre el esqueleto carbonado (Obtencin de subestructuras).
Propiedades estereoqumicas incluyendo tanto los aspectos
estticos como dinmicos.
ELUCIDACIN DE LA ESTEREOQUMICA DE LA
MOLCULA

De acuerdo a la disposicin espacial de los tomos :

Composicin: tomos presentes y su proporcin en la molcula, lo

que se traduce en la obtencin de una formula molecular.

Constitucin: Uniones existentes entre los tomos, lo que se

traduce en la determinacin de los grupos funcionales y
subestructuras presentes en la misma.

Configuracin: disposicin espacial de los tomos en la molcula.

Conformacin: disposicin espacial de la molcula que surge

debido a la posibilidad de rotacin o giro de los enlaces simples en
la misma.
ESPECTRO ELECTROMAGNETICO
ESPECTRO ELECTROMAGNETICO
ESPECTRO ELECTROMAGNETICO

La energa asociada radiacin electromagntica

E = hv
E = energa (Joules)
H = constante de Planck (6.62 x10 34 Js)
V = Frecuencia ( seg)
 LONGITUD DE ONDA Y FRECUENCIA

Radiacin Electromagntica Combinacin de campos magnticos y

alternativamente elctricos que viajan a traves del espacio con un
movimiento de onda

La radiacin acta tambin como una onda, clasificndose en trminos

como otra longitud de onda o frecuencia:
v=c/
LONGITUD DE ONDA Y FRECUENCIA

v=c/

v = Frecuencia ( Seg)
C = Velocidad de la luz (3 x 10 8 ms-1)
= Longitud de onda ( m)
 ORIGEN DE LOS ESPECTROS UV/VIS

Cuando la radiacin interacta con la materia ocurren procesos

como: reflexin, disipacin, absorbancia,
fluorescencia/fosforescencia (absorcin y reemisin) y reacciones
fotoqumicas (absorbancia y ruptura de bandas).

Cuando se mide un espectro UV/VIS, se quiere que ocurra una

absorbancia.
 ORIGEN DE LOS ESPECTROS UV/VIS

Luz Forma de energa.

Absorcin de la luz por la materia causa el contenido de la energa
de las molculas. (o tomos) a incrementarse.
Total de la energa potencial de una molcula es representado por
las sumatorias :

E total : E electrnica + E vibracional + E rotacional

 ORIGEN DE LOS ESPECTROS UV/VIS

La cantidad de energa que posee una molcula en cada forma es no

continua para una seria de niveles o estados discretos.

E electrnica > E vibracional > E rotacional

 ORIGEN DE LOS ESPECTROS UV/VIS

En algunas molculas y tomos

los fotones de la luz UV/VIS
tienen suficiente energa para
causar transiciones entre los
diferentes niveles de energa
electrnicos.

La longitud de onda de luz

absorbida puede requerir un
movimiento de electrn de un
estado o nivel bajo a uno mayor
de energa.
 ORIGEN DE LOS ESPECTROS UV/VIS

La transiciones pueden
resultar en bandas de
absorbancia estrechas a
long. de onda altamente
caractersticas de las
diferencias en niveles de
energa de las especies
absorbidas.
 ORIGEN DE LOS ESPECTROS UV/VIS

Para molculas, los

niveles de energa
rotacional y vibracional
son super impuestos en
los niveles de energa
electrnica.

Muchas transiciones con

diferente energa
ocurren. Bandas se
ensanchan. ( > en
soluciones sto ste
(Interaccin)
 TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA

Cuando la luz pasa a

travs de una muestra o
es reflejada en ella, la
cantidad de luz
absorbida es la
diferencia entre
radiacin incidente Io y
la radiacin transmitida
It
 TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA
Estas relaciones se conocen como la ley de Bourguer-Lambert-Beer o
ley general de la espectrofotometra que permite hallar la
concentracin de una especie qumica a partir de la medida de la
intensidad de luz absorbida por la muestra.

Esta ley se puede expresar en trminos de potencia de luz o de

intensidad de luz, asumiendo luz monocromtica, como:

It / I0 = 10 -e bc
 TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA

It / I0 = 10 -e bc

It = Intensidad de luz transmitida por la muestra.

I0 = intensidad de luz que incide sobre la muestra y que proviene
de la fuente.
e = Coeficiente de absortividad molar (M-1cm-1)
b = Longitud de la trayectoria del haz de luz a travs de la
muestra o el espesor de la celda en centmetros o lo que se
conoce como paso ptico.
c = Concentracin de la muestra
It / I0 = Transmitancia ( T )
 TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA

% T = 100.It / I0

La luz absorbida = I0 - It despues de pasar a travs de la muestra.

Expresando en % en funcin de la transmitancia medida:

% absorcin = (Tblanco - Tmuestra. ) x 100 o absorbancia.

-log It / I0 = - log T o igual que log I0 /It = logI0 - logIt

La relacin -log It / I0 = - log T = Absorbancia (A )

 TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA

La ley de Bourguer-Lambert-Beer se puede entonces escribir de las

siguientes formas:

It / I0 = 10 -e bc , - log T = e b C , -log T = A = e b C

C = Concentracin del soluto en moles / litro solucin

e = cte coeficiente de absortividad molar cm-1 litro /mol
(funcin de la longitud de onda, del ndice de refraccin
de la solucin y es caracterstico de cada sistema soluto-
solvente)
b = Longitud del paso de luz (cm )

Absorbancia es adimensional
 TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA
Desconociendo el peso molecular de la sustancia la ley de Beer se
puede expresar como

A=abC,

a = Coeficiente de absortividad g/L o g/100mL

Registro de la variacin del coeficiente de absortividad molar e , o de

la absorbancia A, o de la transmitancia T, funcin de la longitud de
onda " espectro " o curva espectral de una sustancia qumica
indicando caractersticas de absorcin con relacin a la longitud de
onda.
DERIVATIZACION DE ESPECTROS

Espectro expresa A f () Orden Cero

dA
---- = f() Primer Orden
d

d2A
---- = f() Segundo Orden
d2
EFECTOS DE DERIVATIZACION
 EFECTOS DE DERIVATIZACION

Cambio de
absorbancia.

Comienza y termina en
cero, pasando a travs
de cero a la misma max
de la banda.

Banda y max positiva y

negativa.
 EFECTOS DE DERIVATIZACION

Cambio de absorbancia.

Comienza y termina en cero,

pasando a travs de cero a
la misma max de la banda.

Banda y max negativa y

positiva.
 EFECTOS DE DERIVATIZACION

Banda Negativa.

Dos bandas satelitales

positivas en cada lado de
la banda principal
 EFECTOS DE DERIVATIZACION

Banda Positiva.

Dos bandas satelitales

negativas en cada lado
de la banda principal
 APLICACIONES

Los espectros derivados pueden ser usados para estimar

diferencias entre espectros.

Resuelven superposiciones de bandas en anlisis cualitativos

(Confirmaciones de identidad).

Reducen efectos de interferencia, matriz u otros compuestos de

absorbancias en anlisis cuantitativos
 CONFIRMACIONES DE IDENTIDAD

Comparacin de la
medida del espectro con
uno de referencia.

Espectro es altamente
similar, se puede usar la
derivada espectral

4ta derivada centro

max que engloba max de
las bandas de los
componentes
 SEAL RUIDO

Est en funcin del proceso de derivatizacin con altos rdenes de

derivadas.

La alta resolucin de los espectros demanda una buena

reproducibilidad de long. de onda en el espectrofotmetro.

Pequeos errores de long. de onda pueden detectarse las mayores

seales en el modo de la derivada que en el modo de la
absorbancia.

Efecto negativo de la derivatizacin demanda un bajo rudo en el

espectrofotmetro.

Espectrofotmetro puede escanear y promediar espectros

mltiples, la S/R puede ser improvizada prioritariamente a derivar
SEAL RUIDO
ANALISIS CUALITATIVO
 ANALISIS CUALITATIVO

Los espectros UV/VIS muestran pocas bandas anchas de absorbancia

a comparacin de la espectroscopa IR.

La presencia de una banda de absorbancia a una dada es

indicadora de la presencia de un cromforo, debido a la presencia de
enlaces (bandas insaturadas).
ANALISIS CUALITATIVO
 ANALISIS CUALITATIVO

La posicin del mx. de abs. no es fijada, pero depende del

acercamiento molecular del el cromforo y el solvente en el cual la
muestra puede ser disuelta.

La T y el pH pueden causar cambios en el cromforo y el solvente

variando la intensidad y la de la abs. mx.

Bandas conjugadas (carotenoides, hidrocarburos).

 ANALISIS CUALITATIVO

Transiciones iones metlicos tienen niveles de energa que

absorben de 400 700 nm regin visible. Los compuestos de
coordinacin tambin son aductos cido-base y frecuentemente se
llaman complejos o si estn cargados iones complejos unidos a
grupos ligandos. Ej :

Esmeralda Color Verde Cr(III) en Be3Al2Si6O18;

Amatistas violetas Fe(II), Fe(III) y Ti(IV) en Al2O3

Rubes rojos por las trazas de Cr(III) en Al2O3,

Sangre es roja por la presencia del grupo rojo heme -un compuesto
de coordinacin con Fe(II)- en la hemoglobina.
 ANALISIS CUALITATIVO

El color de los complejos o iones complejos de los metales de

transicin o la ausencia de color depende de la estructura
electrnica del metal, su estado de oxidacin y la naturaleza del
ligando. Por ejemplo, para algunos iones complejos conocidos:
 CONFIRMACIONES DE IDENTIDAD

Comparacin de la
medida del espectro
con uno de referencia.
Espectro es altamente
similar, se puede usar
la derivada espectral
4ta derivada centro
max que engloba max
de las bandas de los
componentes
 COLOR
Importante propiedad de la sustancia.
Se relaciona con la absortividad y reflectividad.
 COLOR

El ojo humano ve el color complementario al cual es absorbido

INFORMACIONES ADICIONALES DE ANALISIS
CUALITATIVO

Protenas, cido nuclicos y temperatura de fusin : Presencia de

cidos amino aromticos que al producirse calentamiento vara su
estado que lo rodea y produce cambios espectrales en dicha
molcula.
Anlisis de multicomponentes determinan cuanto hay de cada
cidos amino aromtico que est presente en una protena intacta.

ADNA = Aadenina + Aguanina + Acytocina + Atimina

 INFORMACIONES ADICIONALES DE
ANALISIS CUALITATIVO
Actividad Enzimtica .- Es una medida de eficiencia como un
catalizador.
La concentracin de la enzima en muestras impura unidad /
ml, actividad especfica de la preparacin unidades / mg
protena
Cuando la enzima es purificada , la actividad especfica
incrementa al lmite.
Reaccin vara con factores de pH, concentracin,
temperatura (recomendable fijar 25, 30 y 37C), ionizaciones,
etc.
MODELO DE ENERGIA CINETICA
ANALISIS CUANTITATIVO
 LEY DE BEER

Si 100 fotones de luz ingresan a una celda y slo 50 emergen

provenientes de otro lado, la transmitancia es 0.5 50% .

Si esos 50 fotones luego pasan a travs de una celda idntica, slo

25 emergern y as en adelante.
TRANSMITANCIA Y CONCENTRACION LEY DE
BEER
TRANSMITANCIA Y LONG. DE PASO - LEY DE BEER
ABSORBANCIA VS CONCENTRACION LEY DE
BEER
CUANTIFICACIONES INDIRECTAS
 CUANTIFICACIONES INDIRECTAS

Derivatizaciones Qumicas.- Ej agregado de reactivo orgnico,

formando complejos con absortividades altas.

Titulaciones espectrofotomtricas .- Evalua el momento en el que

reaccionan cantidades equivalentes de un cido con una base
(valoraciones cido-base), de un oxidante con un reductor
(valoraciones redox), de un ion metlico con un ligando
(valoraciones de complejos), etc. , siendo la concentracin de
una de las sustancias exactamente conocida.
 TITULACIONES ESPECTROFOTOMTRICAS

Pto de equivalencia indicadores, no son ciertos en el cambio

de color, debido a soluciones turbias, indicadores que pueden ser
interferentes en la reaccin, analitos muy diluidos, mezclas de
varios analitos que no permiten la observacin visual del punto
final, etc
 TITULACIONES ESPECTROFOTOMTRICAS

Por medidas espectrofotomtricas, considerando la reaccin:

Si el soluto, el titulante o el producto absorbe radiacin, las

medidas de absorbancia a una longitud de onda fija, pueden
utilizarse para localizar el punto final de la titulacin
 TITULACIONES ESPECTROFOTOMTRICAS
Se construyen grficas de absorbancia corregida de la especie
absorbente, A* vs Volumen de titulante, donde:

A* = [Aexperimental o leida x ( v inicial o de alicuota + vtitulante) /

vinicial o alicuota ]

Las grficas obtenidas constan de dos segmentos de rectas, uno

anterior y otro posterior al punto estequiomtrico, que se extrapolan
y en el punto de interseccin se localiza el punto final.
 TITULACIONES ESPECTROFOTOMTRICAS

Las curvas de
titulacin presentan
formas diferentes
dependiendo de la
especie absorbente
que se escoja para
seguir la titulacin
y de si una o varias
especies son
absorbentes a la
longitud de onda
escogida.