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UNIVERSIDAD AUTNOMA DE NUEVO LEN

Facultad de Ciencias Qumicas

Sub-Direccin de Estudios de Posgrado


Maestra en Ciencias con Orientacin en Procesos Sustentables
Separaciones Analticas
Karla Santamara Lpez
Ing. Sandra Pioquinto Garca

Responsable: Dra. Minerva Villanueva Rodrguez

Monterrey N.L. 09 de Febrero de 2017.


CROMATOGRAFA EN
COLUMNA FASE NORMAL
ESTUDIO FITOQUMICO DE LA CORTEZA DE CROTON
GOSSYPIIFOLIUS COLECTADA EN VENEZUELA

Alrica I. Sureza*, Katiuska Chaveza, Zuleyma Blancoa, Reinaldo S.


Compagnoneb, Stephen Tilletta, Ftima Torricoa
a Facultad de Farmacia, Universidad Central de Venezuela, Caracas, Venezuela
b Escuela de Qumica, Facultad de Ciencias, Universidad Central de Venezuela.

Recibido Julio 2013.


Aceptado Octubre 2013.
Contenido
1. Fundamento de la Cromatografa en columna
1.1 Fase Normal
2. Introduccin
3. Materiales y Mtodos
4. Resultados
5. Discusin
6. Bibliografa
1. Fundamento de la Cromatografa en columna

En un principio, la cromatografa de lquidos utilizaba fases


estacionarias de elevada polaridad, como el agua o el
trietilenglicol, como fase mvil se empleaba un
solvente relativamente no polar, como el hexano o el
isopropilter.
Cromatografa Fase Normal
En la Cromatografa en Fase Inversa, la fase estacionaria es
no polar, con frecuencia un hidrocarburo, y la fase mvil es un
solvente relativamente polar, como agua, metanol, acetonitrilo
o tetrahidrofurano.
1. Fundamento de la Cromatografa en columna
1.1 Fase Normal
En la cromatografia en fase normal, el componente menos
polar se eluye primero; al aumentar la polaridad de la fase
mvil ocasiona una disminucin del tiempo de elucin.

En cambio, con la cromatografia de fase inversa, los


componentes mas polares aparecen primero y un
aumento de la polaridad de la fase mvil incrementa el tiempo
de elucin.
1. Fundamento de la Cromatografa en columna
1.1 Fase Normal
La retencin en la mayora de los tipos de cromatografa en fase
normal parece estar regida por procesos de desplazamiento de
la adsorcin.

Los rellenos de fase unida qumicamente se llaman de fase


inversa cuando el revestimiento enlazado tiene un carcter no
polar, y de fase normal cuando el revestimiento contiene grupos
funcionales polares.
2. Introduccin Croton es el gnero ms grande de la
subfamilia Crotonoideae(Euphorbiaceae).
En Venezuela, existen unas 80 especies
endmicas.
Son utilizadas en Amrica, frica y Asia
con diferentes propiedades teraputicas:
antiinflamatoria
antinociceptiva
antineoplsica
hipo-glicemiante y para el
tratamiento de problemas
gastrointestinales
Sus aceites esenciales son tambin de
uso comn para tratar trastornos de
salud.
3. Materiales y Mtodos
En este artculo se presenta el aislamiento y la
caracterizacin de los metabolitos secundarios
mayoritarios presentes en la corteza de esta planta.

Los procedimientos de aislamiento por cromatografa de columna se


evaluaron empleando cromatografa de capa fina sobre placas de
aluminio cubiertas con gel de slice (Merck, Kieselgel 60 F254). En
el proceso de revelado se utiliz una lmpara de UV y como reactivo
revelador una disolucin de p-anisaldehdo en MeOH.
3. Materiales y Mtodos
Extraccin y aislamiento de los compuestos presentes en los
extractos orgnicos

El material vegetal, secado a


temperatura ambiente, fue
sometido a maceracin utilizando
metanol por 72 h, el disolvente
fue evaporado a presin reducida y
el material resultante re- El extracto y las diferentes
disuelto en una mezcla fracciones se evaluaron por
MeOH/H2O (50:50) y sometido a cromatografa en capa fina y
particin sucesivamente con sus componentes fueron
hexano, diclorometano y separados por cromatografa
acetato de etilo; la mezcla hidro- preparativa y de columna en
metanlica fue liofilizada previa fase normal o reversa.
evaporacin del metanol.
3. Materiales y Mtodos
Se realiz una cromatografa de columna en fase normal a la fraccin de
CH2Cl2. Se utiliz gel de slice como soporte y se eluy con una mezcla
AcOEt/Hx de polaridad creciente (2:8 - 7:3). De esta columna se
colectaron 50 eluatos, los cuales al ser unidos de acuerdo a criterios de
Rf que sealaban similar composicin, permitieron obtener diez
fracciones. De los compuestos 1, 2 y 3 se obtuvo lo siguiente: 1 (35
mg), 2 (23 mg), y 3 (52 mg). Del extracto de AcOEt se obtuvo los
metabolitos 4 (125 mg), y 5 (42 mg). Todos los compuestos luego de su
aislamiento fueron posteriormente purificados por cristalizacin en
disolventes apropiados o por cromatografa de columna.

La evaporacin de la subfraccin 25 de la cromatografa realizada a la


fraccin de diclorometano, ofreci un residuo aceitoso que fue
recromatografiado en columna de gel de slice, usando como disolvente
acetato de etilo, las fracciones que se visualizaron por CCF con un solo
compuesto fueron unidas y evaporadas para ofrecer un slido blanco de
punto de fusin 176-178 oC, que result ser el compuesto 1.
3. Materiales y Mtodos

La subfraccin 32 (53 mg) de la columna previamente mencionada, se


someti a una nueva cromatografa en columna de gel de slice, usando
una mezcla eluyente cloroformo-hexano (9:1); los eluatos se
analizaron por cromatografa en capa fina y se reunieron de acuerdo a
criterios de similitud en Rf. De la reunin de las fracciones mayoritarias
se obtuvo un slido blanco que posteriormente se recristaliz en eta-nol,
para ofrecer 23 mg del compuesto 2.

El compuesto 3 se obtuvo de la subfraccin 45 (70 mg) como un


residuo de color marrn, el cual mostraba pocas impurezas al ser
visualizado por CCF, se lav varias veces con mezclas de diclorometano:
hexano (2:8), obtenindose un slido amorfo de color marrn claro, que
al ser caracterizado result ser el compuesto 3.
3. Materiales y Mtodos
El extracto de acetato de etilo fue sometido a cromatografa
utilizando gel de slice y elucin con polaridad creciente de acetato de
etilo hasta acetato:metanol (9:1); de las primeras 6 subfracciones
eludas con acetato se obtuvo, luego de su evaporacin, el
compuesto 4, como un aceite viscoso de color amarillo.

En las ltimas fracciones eludas con acetato:metanol, de la


cromatografa previamente mencionada, cristaliz espontneamente
un slido amarillo que fue recristalizado en metanol:agua, ofreciendo
25 mg del compuesto 5.
3. Materiales y Mtodos

La caracterizacin estructural de los


compuestos puros fue obtenida
utilizando tcnicas espectroscpicas
como resonancia magntica
nuclear, infrarrojo y
espectrometra de masas. Los
datos obtenidos se compararon con
los informados previamente en la
literatura. El extracto de hexano fue
analizado por cromatografa de
gases-masas y mostr
principalmente la presencia de cidos
grasos, donde el palmtico mostr ser
el mayoritario.
4. Discusin

Luego de sucesivas cromatografas realizadas a las fracciones


obtenidas del extracto de CH2Cl2, se obtuvieron:
cido kaurenoico (1)
cido grandiflornico (2)
cido ent-15-Ecinamoil-16-kauren-19-oico (3)
7-desoxogeayina (4)
flavonoide quercitrina (5).
En base a las pruebas de caracterizacin y a lo reportado en la
literatura se pudo confirmar la identidad de los compuestos.
5. Conclusin

La cromatografa en fase normal, permite extraer diversos analtos


de naturaleza orgnica como en el presente trabajo.

La extraccin de analtos puede corroborarse con alguna tcnica


espectroscpica.
6. Bibliografa
1. Skoog, D. A., Holler, J. H., Nieman, T. A. Principios de Anlisis
Instrumental, 5a Edicin. McGraw Hill. Madrid, Espaa. 2001.
2. Surez, A. I., Chavez, K., Blanco, Z., Compagnone, R. S., Tillett, S., & Torrico, F. (2013).
Revista latinoamericana de quimica : RLQ. Revista latinoamericana de qumica (Vol. 41).
Laboratorios Mixim S.A. Retrieved from
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59432013000300003&script=sci_arttext