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TINCIONES

MESA 5
IMPORTANCIA DE LAS TINCIONES
Aunque los microorganismos vivos se pueden observar
directamente en fresco al microscopio ptico, la mayora de las
veces es necesario teirlos para que por medio del uso de
colorantes, sea mucho ms fcil su identificacin; adems, la
presencia de ciertas estructuras, as como su reaccin a
determinadas tcnicas, nos permite clasificar a las bacterias. As
pues, los colorantes tienen las siguientes funciones:
1. Permiten hacer visibles a los objetos microscpicos y
transparentes.
2. Revelan su forma y tamao.
3. Muestran la presencia de estructuras internas y externas.
4. Producen reacciones qumicas especficas.
TINCION DE
GRAM
CARACTERSTICAS PRINCIPALES
Algunas especies bacterianas debido a la
naturaleza qumica de sus paredes celulares,
poseen la capacidad de retener el cristal violeta,
aun luego del tratamiento con un decolorante
orgnico. Estas bacterias se denominan Gram
positivas. Las bacterias Gram negativas ,
presumiblemente debido a un mayor contenido
lipdico en la pared celular, pierden la coloracin
primaria del cristal violeta cuando son tratados con
el decolorante y toman un color rojo
EN QUE SE BASA ESTA TINCIN
Los principios de la tincin de Gram estn basados en las
caractersticas de la pared celular de las bacterias, la cual le
confiere propiedades determinantes a cada microorganismo.
La pared celular de las bacterias Gram negativas est
constituida por una capa fina de peptidoglicano y una
membrana celular externa
mientras que las bacterias Gram positivas poseen una pared
celular gruesa constituida por peptidoglicano, pero no cuentan
con membrana celular externa
as pues, la composicin qumica y el contenido de
peptidoglicano en la pared celular de las bacterias Gram
negativas y Gram positivas explica y determina las
caractersticas tintoriales
TCNICA
La tincin de Gram se basa en colocar como colorante primario cristal violeta, el
cual tiene afinidad con el peptidoglicano de la pared bacteriana. Posteriormente,
se coloca lugol, el cual sirve como mordiente e impide la salida del cristal violeta
por la formacin de un complejo cristal violeta-yodo que satura los espacios del
peptidoglicano de la pared bacteriana. En seguida, se coloca una mezcla de
alcohol-acetona, la cual deshidrata la pared bacteriana y cierra los poros de la
misma, tambin destruye la membrana externa de las bacterias Gram negativas
debido a que sta es soluble a la accin de solventes orgnicos, como la mezcla de
alcohol-acetona. Las bacterias Gram positivas, al contener una gran cantidad de
peptidoglicano, retienen con mayor fuerza este complejo, mientras que las Gram
negativas no lo pueden retener por tener menos cantidad de peptidoglicano. Por
ltimo, se coloca safranina, la cual funciona como un colorante secundario o de
contratincin y sirve para teir las bacterias que no pudieron retener el complejo
cristal violeta-yodo.
TINCIN DE
WRIGHT
FUNDAMENTO
La tincin de Wright es una tcnica que se
emplea generalmente para la diferenciacin
de elementos celulares de la sangre y es
clasificada como una tincin policromtica,
dado que puede teir compuestos cidos o
bsicos presentes en una clula
CARACTERSTICAS TINTORIALES
La eosina es un colorante cido que tiene afinidad por componentes alcalinos. Existen
dos compuestos conocidos como eosina y que estn intrnsecamente relacionados:
eosina Y, conocida tambin como tetrabromofluorescena o, comnmente, eosina
amarilla,
la eosina B, conocida como dibromodinitrofluorescena o eritrosina B azulada.
Ambos compuestos son intercambiables, sin que sean notables las diferencias entre
ellos en el resultado de la tincin, por lo que la preferencia de una sobre otra no sigue
un criterio objetivo. A pesar de ello, la eosina Y es la ms utilizada en procedimientos
rutinarios. Es un compuesto cido cuya propiedad est basada en su polaridad
negativa, lo que le permite enlazarse con constituyentes celulares de carga positiva;
por esta razn, colorea componentes citoplasmticos y se les conoce como acidfilos.
La tonalidad resultante de la tincin con eosina es rosada-anaranjada para citoplasmas,
y rojo intenso en el caso de los eritrocitos. El tpico color de los ncleos celulares,
mayoritariamente morado, se basa en la interaccin molecular entre eosina y un
complejo azul de metileno-DNA. La intensidad de la coloracin depende del contenido
de azur B y de la relacin con la eosina amarilla.
TINCIN DE
ZIEHL-
NEELSEN
FUNDAMENTO
La tincin de Ziehl-Neelsen es la tcnica
comnmente usada en el diagnstico rutinario de
tuberculosis. Esta tincin permite diferenciar a las
bacterias en dos grupos: aquellos que son capaces
de resistir la decoloracin con alcohol-cido y
aquellos que no lo son, La sensibilidad de esta
tincin para identificar bacilos cido-alcohol
resistentes es del 74% y la especificidad del 98%,26
teniendo un lmite de deteccin de 5,000-10,000
bacilos/mL de muestra.
TECNICA
La tincin se basa en colocar carbol-fucsina y calentar la preparacin ligeramente para
solubilizar las ceras, lpidos y otros cidos grasos de la pared celular para que permita el paso
libre del colorante, el cual tiene una enorme afinidad por los cidos miclicos presentes en la
pared. Al enfriar con agua, los componentes de la pared vuelven a solidificar, resistiendo la
accin abrasiva del alcohol-cido, y el azul de metileno se utiliza como contratincin, Una
tincin positiva es aqulla en la que se observan bacilos cido-alcohol resistentes, los cuales
son de color rojo fucsia.
TINCIN
NEGATIVA
FUNDAMENTO
La tincin negativa fue desarrollada originalmente para microscopia de luz
con el fin de rodear y delinear las bacterias no teidas u otros materiales
biolgicos, El principio es simple, ya que slo se requiere depositar una
gota de la muestra clnica sobre un portaobjetos, posteriormente se coloca
el colorante y se observa al microscopio sin necesidad de fijacin, algunas
estructuras difundirn el colorante y otras no, lo que permitir un
contraste de las estructuras observadas. Se han utilizado diferentes
colorantes: uno de ellos es la mencionada tinta china, la cual tie el fondo
de la muestra de un color oscuro y la cpsula del C. neoformans
(Cryptococcus neoformanshongo) permanece sin teir. La principal
dificultad con la tincin negativa es que los microorganismos tienden a
contraerse durante el periodo de secado; para evitarlo, se ha optado por
usar la tincin negativa hmeda, en la cual los organismos se suspenden en
una pelcula de tinta china o mancha oscura y el contorno de la cpsula
puede ser observado sin el peligro de contraccin.
TINCIN DE
A ZUL ALGODN
DE L ACTOFENOL
FUNDAMENTO
La tincin de azul algodn de lactofenol
no es considerada una tincin diferencial,
sin embargo, posee caractersticas
tintoriales que permiten observar cada
uno de los componentes fngicos y
apreciar fcilmente las estructuras para
una adecuada identificacin.
CARACTERSTICAS TINTORIALES
El fenol inactiva las enzimas lticas de la clula e impide que
sta se rompa; de igual forma, destruye la flora acompaante
e inactiva a la clula, quitndole el grado de patogenicidad;
adems, acta como mordiente cuando se usa en
combinacin con colorantes. El cido lctico preserva las
estructuras fngicas al provocar un cambio de gradiente
osmtico(Influencia recproca entre dos individuos o
elementos que estn en contacto.) con relacin al interior
fngico, lo que genera una pelcula protectora. El azul de
algodn es un colorante cido, que tie el citoplasma y la
quitina presente en las clulas fngicas, mientras que el
glicerol mantiene hmeda la preparacin
TECNICA
1. Colocar el material necesario en la campana de seguridad tipo 2A.
2. Seleccionar las colonias para realizar las improntas.
3. Cortar segmentos de cinta adhesiva transparente
aproximadamente de 1 cm2 .
4. Pegar los segmentos de cinta en un asa micolgica.
5. Poner una gota de azul de algodn en el portaobjetos.
6. Con el lado adhesivo de la cinta, tocar la parte superior de hongo.
7. Colocar la cinta sobre la gota de azul de algodn y poner otra gota
de azul de algodn.
8. Poner un cubreobjetos sobre la preparacin.
9. Observar en 40x.
CONCLUSIN
Las tinciones utilizadas en el laboratorio de
microbiologa permiten el diagnstico oportuno y
sugerente de los agentes infecciosos, por lo que juegan
un papel importante en la decisin del tratamiento
inicial de las enfermedades infecciosas. Se debe
practicar la tincin adecuada de acuerdo con el agente
infeccioso en sospecha y el tipo de muestra clnica. Las
tinciones son herramientas elementales, vigentes y de
uso universal que coadyuvan al diagnstico
microbiolgico.
GRACIAS

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