Escola Secundria de Tondela Disciplina de Biologia e Geologia

Ano letivo de 2017/2018

Aplicaes da gentica no
diagnstico e tratamento de
doenas
Fibrose Cstica

Trabalho realizado por:

Ana Margarida Carboila, n 2
Carolina Ferraz, n 4
Daniela Melo, n 7
Jorge Marques, n 18
11B
 Introduo
A gentica a especialidade da biologia que
estuda os genes, a forma como estes se
transmitem de gerao em gerao e a
hereditariedade.
Com o avano desta cincia, comeou-se a
aplic-la em vrias reas, como a medicina, e
hoje em dia h diversas aplicaes da gentica
no diagnstico e tratamentos de doenas.
 Fibrose Cstica - o que
A fibrose cstica, ou muscoviscidose, uma
doena monogentica hereditria cuja
principal caracterstica o acumular de
secrees (muco) muito espessas em rgos
como os pulmes e o pncreas.

Fig. 1 Processo que leva ao acumular de muco espesso em

diferentes rgos. Fonte:
http://fbme.utm.my/anisatiqahsakmani/2016/05/06/cystic-
fibrosis-babycenter/
 Esta doena resulta de uma mutao no brao longo
do cromossoma 7, na regio 3, banda 1 (7q31) que
transcreve uma protena transmembranar,
reguladora do transporte de ies, chamada
regulador de condutncia transmembranar de
fibrose cstica (CFTR).
Esta protena codificada entre as bases 16,907,253
e 117,095,955, e por isso mais de 300 mutaes
podem causar fibrose cstica, mas a mais comum a
F508, onde ocorre deleo de trs nucletidos que
resultam
Fig. 2 zona do cromossoma 7 na
causa a doena. Editada, fonte:
perda
onde ocorre mutao do aminocido
F508 que fenilalanina
Fig. 3 cdigo gentico. Fonte:
https://www.mun.ca/biology/scarr/MtDNA_code.html

(codes UUU e UUC).

http://www.scielo.br/scielo.php?pid=S1679-
45082015000100019&script=sci_arttext&tlng=pt
 A fibrose cstica uma doena autossmica
recessiva:
autossmica porque se manifesta em homens e
mulheres na mesma proporo, pois a mutao
ocorre num cromossoma que no responsvel pela
determinao do sexo do beb;
recessiva porque para se manifestar, o paciente tem
que herdar uma cpia do gene defeituoso de cada um
dos pais. Se a pessoa possuir apenas uma cpia do
gene defeituoso, apenas portadora.

Desta forma, mesmo que ambos os progenitores

sejam portadores do gene defeituoso, a criana
tem apenas 25% de probabilidade de contrair a
doena, mas 50% de probabilidade de ser
portadora.
Fig. 4 Probabilidade de uma criana com pais portadores contrair a doena. Fonte:
https://biosom.com.br/blog/saude/fibrose-cistica/
 Principais rgos afetados
Os principais rgos afetados so:
Fossas nasais;
Pulmes;
Pele;
Fgado;
Pncreas;
Intestinos;
Orgos reprodutores.
 Principais sinais e sintomas
Os principais sintomas da fibrose cstica so:
Dificuldade para respirar;
Infees das vias respiratrias frequentes e persistentes;
Infertilidade;
Problemas digestivos os intestinos no tm a capacidade
de absorver totalmente os nutrientes;
Menor crescimento e desnutrio;
Ductos pancreticos obstrudos;
Ductos biliares obstrudos;
Fig. 6 pncreas de um portador de fibrose cstica. Imagem editada, fonte:
Fig. 5 Pulmes saudveis e de um portador de fibrose cstica. Fonte:
https://www.news-medical.net/health/Tests-for-Cystic-Fibrosis-During-Pregnancy.aspx
http://www.momjunction.com/articles/cystic-fibrosis-in-
children_00390268/#gref
 Capacidade de reproduo
Esta doena pode afetar a capacidade de
reproduo do paciente na medida em que as
secrees espessas podem provocar a obstruo
do canal deferente no homem (azoospermia
obstrutiva), e do canal do colo do tero na
mulher.
Esta obstruo, apesar de tornar o doente menos
frtil, no o torna estril, e a reproduo pode ser
assistida, recorrendo, por exemplo, fertilizao
in vitro.
Fig. 7 Azoospermia obstrutiva, que pode ser causada pela fibrose cstica. Fonte:
https://pt.slideshare.net/beamatos1/infertilidade-humana-28284705
 Epidemiologia
Esta doena uma das doenas hereditrias mais
comuns, especialmente na populao caucasiana:
Na Amrica atinge cerca de 30 000 pessoas;
Na Europa atinge uma em cada 5000 pessoas e um
em cada 25 descendentes Europeus;
Nos Estados Unidos e Canad afeta uma em cada
4000 pessoas;
No Brasil estima-se que atinge cerca de uma em cada
10.000 pessoas sendo maior no Sul e Sudoeste do pas.

Fig. 9 Incidncia de fibrose cstica pelo mundo. Fonte:

Fig. 8 Incidncia da doena em diversos pases e
http://revista.hupe.uerj.br/detalhe_artigo.asp?id=70
percentagem da mutao F508. Fonte:
http://revista.hupe.uerj.br/detalhe_artigo.asp?id=70
 Taxa de mortalidade da doena
Entre 1979 e 2005, a idade mdia de morte aumentou de 12
para 27 anos entre homens e de 14 para 25 anos para
mulheres.
Entre as crianas do sexo masculino de 0 a 14 anos, as taxas
caram drasticamente depois de 1989, mas caram
posteriormente e maneira mais gradual entre meninas, com o
resultado da taxa de idade padronizada para meninas 2,38
vezes maior que a dos meninos durante o perodo de 1989 a
2005.
Fig. 11 Esperana mdia de vida de doentes com Fibrose Cstica por sexo, at 2005. Fonte:
https://www.mja.com.au/sites/default/files/issues/195_07_031011/rei11229_fm-1.gif
Fig. 10 Esperana mdia de vida de indivduos com Fibrose Cstica. Fonte:
https://cdn.cysticfibrosisnewstoday.com/wp-content/uploads/2016/03/CFF2010lifeExpectancy.png
 Diagnstico Gentico Pr-
Implantacional (DGPI)
Este tipo de diagnstico consiste na anlise do DNA de
clulas de embries, de modo a detetar anomalias
genticas antes da sua implantao, para que as
crianas nasam sem doenas hereditrias.
Este exame s pode ser executado no 3 dia, mximo
5 dia de desenvolvimento do embrio. A clula
recolhida analisada em laboratrio com o mtodo de
arrays ou de PCR.
Esta tcnica requer sempre um tratamento de
Fertilizao in Vitro (FIV) com Microinjeo de
espermatozoides (ICSI).
Fig. 12 momento em que se retira uma clula de um embrio no 2 dia de desenvolvimento,
para anlise com o diagnstico pr-implantacional. Fonte:
http://mundoeducacao.bol.uol.com.br/biologia/dgpi.htm
 DGPI - Teste de CGH-Array
O teste de CGH-Array ou hibridao genmica
comparativa baseada em microarranjos consiste na
comparao de amostras de DNA do paciente com
amostras controle. Primeiro marcam-se ambas as
amostras com corantes fluorescentes diferentes, e
depois estas so co-hibridadas, sendo que se houver
diferenas entre os DNA num determinado segmento,
altera-se a sua cor.
Este teste bastante valioso no diagnstico da fibrose
cstica pois permite identificar alteraes
cromossmicas por meio da anlise geral de todo o
genoma de uma s vez.
Atravs deste tcnica possvel detetar delees,
microdelees e amplificaes gnicas, como por
Fig. 13 processo para a realizao do CGH-Array. Fonte:
exemplo a https://www3.hermespardini.com.br/pagina/1169/teste-de-cgh-
deleo F508.
array-para-diagnostico-de-alteracoes-cromossomicas.aspx
 DGPI - PCR
A PCR ou reao em cadeia da polimerase, consiste na replicao
do DNA que ocorre in vitro. Esta tcnica serve para se fazer a cpia
ou ampliao de uma regio especfica do DNA, que pode ser
enviada para laboratrio para sofrer novas anlises, como anlises
do caritipo.
A PCR uma das tcnicas mais comuns utilizadas em laboratrios
de pesquisas mdicas e biolgicas para diversas tarefas, como:
o sequenciamento de genes
o diagnstico de doenas hereditrias
a identificao de "impresso digital" gentica (usado em testes de
paternidade e na medicina forense)
a deteo de diagnstico de doenas infeciosas
a criao de organismos transgnicos

Fig. 14 Processo para a realizao da reao em cadeia da

polimerase. Fonte:
http://www.sobiologia.com.br/conteudos/Biotecnologia/PCR.php
Diagnstico Pr-Natal - amniocentese
Este tipo de exame s realizado se outros
prvios confirmarem que tanto o pai quanto a
me do beb carregam o gene afetado pela
doena, por ser invasivo.
A amniocentese consiste em retirar-se uma
amostra do lquido amnitico do tero, que
depois analisado em laboratrio com uma
tcnica chamada exame do caritipo fetal. Este
exame geralmente realizado entre a 15 e a 18
semana de gestao.
Fig. 15 amniocentese. Fonte:
http://www.stanfordchildrens.org/en/topic/default?id=amniocentesis-90-P02429
 Amniocentese - exame do caritipo
fetal
Aps a amniocentese, cultivam-se clulas do
beb presentes no lquido amnitico. Depois,
obtm-se cromossomas em clulas em estgio
de metafase e so corados para bandas que
permitem a identificao de cada par.
Os cromossomas so ento contados e
analisados, de modo a procurar mutaes.

Fig. 16 imagem obtida aps um exame do caritipo fetal. Fonte:

http://www.genomaes.com.br/exame-cariotipo.html
 Teste do Suor
Consiste na recolha de uma amostra de suor, que
depois analisada em laboratrio, onde se avalia a
concentrao de cloreto de sdio no organismo.
Quanto maior for a concentrao deste sal no
sangue, maior a probabilidade de o paciente ter a
doena, e muitas vezes realizam-se outros
diagnsticos para confirmar essa suspeita.

Fig. 18 Percentagem de doentes diagnosticados com Fibrose Cstica atravs do teste do suor, por idade,
Fig. 17 Procedimento para realizar o teste do suor. Fonte: https://www.webmd.com/lung/sweat-test
dados de 2013. Fonte: https://www.cff.org/What-is-CF/Testing/Sweat-Test/
Teste do Pezinho ou Triagem Neonatal
Este tipo de teste feito ao dar-se uma ou duas
picadas no calcanhar do beb de onde se retiram
algumas gostas de sangue que so colhidas para um
papel de filtro que, depois de seco, enviado para o
laboratrio para anlise.
A realizao deste exame deve ser feita do 3 dia at
ao 6 dia de vida, isto porque, se for feito antes, os
resultados podem apresentar valores incorretos j
que o beb ainda no tem no seu organismo uma
quantidade mnima de alimento.
Fig. 19 Procedimento para realizar o teste do pezinho. Fonte: http://smsdc-cms-
samoramachel.blogspot.pt/2017/06/dia-nacional-do-teste-do-pezinho.html
 Tratamento da Fibrose Cstica
Ainda no existe cura para esta doena, mas h
intervenes que podem ser realizadas de modo a prolongar a
vida dos doentes:
Anti-inflamatrios, fluidificantes (soluo salina hipertnica) e
espirometria (anlises do muco) para controlar a quantidade de
muco e possveis infees
Transplante do pulmo
Terapia gentica
Com o avano dos medicamentos e tratamentos para esta
doena, a esperana mdia de vida destes doentes situa-se
entre os 30 e 40 anos, e deve aumentar gradualmente.

Fig. 20 Percentagem de transplantes bilaterais do pulmo por doena, entre 1992 e 2011.
Fonte: https://www.alfredicu.org.au/special-interest-groups/heart-and-lung-
transplantation/lung-transplantation/
 Tratamentos terapia gentica
Vantagens:
A terapia gentica uma forma de tratamento atravs da
Permite
insero o tratamento
de genes denodoenas
funcionais genomaque, de outrodemodo,
do paciente, modo
no teriam tratamento
a substiturem possvel. que possui mutaes.
o gene correspondente
Ose
Para tratamento pode
realizar esta ser administrado
terapia, neutraliza-seem todasdeasum
o DNA pessoas
vrus
de modo a perder as suas capacidades patognicas e insere-se
oDesvantagens:
DNA do paciente com o defeito gentico corrigido. Assim, o
So
vrus vainecessrias vrias
infetar outras sesses
clulas para nelas
e inserir a curaodo paciente
DNA sem
No eficaz para doenas resultantes de alteraes em
defeitos.
vrios genes
Se os genes forem modificados dentro do corpo a abordagem
Se o DNA for introduzido no gene errado pode originar um
in-vivo e, se as clulas forem modificadas fora do corpo e,
tumor
depois, implantadas, a abordagem ex-vivo.
Fig. 23
Fig.- N deDiferenas
21 Fig. ensaios clnicos
22 procedimentode terapia
entre abordagem gentica
in-vivo epor
para concretizar doena
ex-vivo.
a terapia at AbrilFonte:
Fonte:
gentica. de 2017. Fonte
http://www.wiley.com//legacy/wileychi/genmed/clinical/
http://www.fundacionmencia.org/es/enfermedades-geneticas/terapia-genica/
http://www.sobiologia.com.br/conteudos/Biotecnologia/terapia_genica.php
 Tratamento inovador CRISPR/Cas9
Vantagens:
O CRISPR foi originalmente detetado em bactrias, e um

mecanismo de Mtodo
defesamaisquebarato e mais eficaz
estas possuem emvrus
contra comparao, por
bacterifagos.
exemplo, com a terapia gentica;
O CRISPR consiste em repeties de DNA das bactrias intercaladas
Relativamente simples de ser aplicado.
por sequncias no codificantes entre elas, sendo estas sequncias
correspondentes ao DNA de vrus. A sua transcrio permite a formao de
RNA capaz de guiar a enzima Cas9, que vai clivar o DNA indesejado,
Desvantagens:
impedindo que se replique e infete a bactria.
A Cas9 uma protena muito grande, o que dificulta a
Assim,
sua os cientistas
insero em,procuraram
por exemplo, aplicar o CRISPR/Cas9 medicina, e
embries;
hoje em dia
est
Existea aser testado no tratamento
possibilidade de a clivagemde ocorrer
doenasnum
genticas,
outro como
cataratas resultantes
segmentodedemutaes, distrofia
DNA que no muscular de Duchenne e cancro;
o desejado.
e de doenas infecciosas como a SIDA.

Fig. 24 Modo de ao do complexo CRISPR/Cas9. Fonte:

https://siinfekl.wordpress.com/2015/07/15/crisprcas9-a-science-thing-you-
should-probably-know-about-explained-simply/
 Bibliografia
Biosom, E. Saiba tudo sobre a Fibrose Cstica. Obtido em 17 de 11 de 2017, de Biosom:
https://biosom.com.br/blog/saude/fibrose-cistica/
CRISPR. (23 de 08 de 2017). Obtido em 12 de 11 de 2017, de Wikipedia:
https://pt.wikipedia.org/wiki/CRISPR#Corre.C3.A7.C3.B5es_de_desordens_gen.C3.A9ticas
Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator. (2017 de 11 de 23). Obtido em 17 de 11 de 2017, de Wikipedia:
https://en.wikipedia.org/wiki/Cystic_fibrosis_transmembrane_conductance_regulator
DGPI. Obtido em 20 de 11 de 2017, de IVI: https://ivi.pt/tratamentos-reproducao-assistida/dgp/
Diagnstico da Fibrose Cstica. Obtido em 20 de 11 de 2017, de Grupo brasileiro de estudos de fibrose cstica:
http://portalgbefc.org.br/diagnostico-da-fibrose-cistica/
Diagnstico da Fibrose Cstica. Obtido em 20 de 11 de 2017, de Fibrose Cstica: http://fibrosecistica.com/fibrose-cistica-
diagnostico.html
Fibrose cstica: sintomas, tratamentos e causas. Obtido em 17 de 11 de 2017, de Minha Vida:
http://www.minhavida.com.br/saude/temas/fibrose-cistica
O que a fibrose cstica? Obtido em 17 de 11 de 2017, de Associao brasileira de assistncia a Muscoviscidose:
http://www.abram.org.br/o-que-e-fibrose-cistica
O que a fibrose qustica. Obtido em 17 de 11 de 2017, de Associao Nacional de Fibrose Qustica: http://www.anfq.pt/o-
que-e-a-fibrose-quistica/
Shaffer, C. (2 de 8 de 2017). Prognstico da Fibrose Cstica. Obtido em 17 de 11 de 2017, de News Medical Life Sciences:
https://www.news-medical.net/health/Cystic-Fibrosis-Prognosis-(Portuguese).aspx
Vida, I. U. (12 de 12 de 2016). Nove formas que a Fibrose Cstica pode afetar o organismo. Obtido em 17 de 11 de 2017, de
Unidos pela vida: http://unidospelavida.org.br/nove-formas-que-a-fibrose-cistica-pode-afetar-o-organismo/
Conhea o nosso exame cgh-Array para anlise de anomalias cromossmicas. (21 de 1 de 2016). Obtido em 1 de 12 de 2017,
de Genomika: https://www.genomika.com.br/blog/conhe%C3%A7a-o-nosso-exame-cgh-array-ou-microarranjos-por-cgh/
Reao em cadeia da polimerase (PCR). Obtido em 1 de 12 de 2017, de KhanAcademy:
https://pt.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-sequencing-pcr-electrophoresis/a/polymerase-
chain-reaction-pcr