CRECIMIENTO MICROBIANO

El crecimiento se define como un incremento

en el nmero de clulas
En procariotas contina hasta q se divide en
dos nuevas clulas en un proceso llamado fisin
binaria
Cada clula hija recibe un cromosoma
completo y copias suficientes de
macromolculas, monmeros e iones
inorgnicos para vivir en forma independiente
Bajo condiciones nutricionales estables la
bacteria E. coli puede completar su ciclo en 20
minutos
El tiempo es variable y depende de factores
nutricionales y genticos
 CRECIMIENTO POBLACIONAL

La velocidad de crecimiento es el cambio en

el nmero de clulas por unidad de tiempo
El tiempo de generacin es el requerido
para duplicar una poblacin de clulas
Este modelo en el que el nmero se duplica
por unidad de tiempo se denomina
crecimiento exponencial
Una caracterstica es que al comienzo es
bajo y luego incrementa en una explosin del
numero de clulas
Se utiliza para ensayar el efecto positivo o
negativo de algn tratamiento sobre el cultivo
bacteriano
 TIEMPO DE GENERACION
En un cultivo creciendo exponencialmente hay una relacin directa entre el
nmero de clulas presentes en el momento inicial (N 0) y en un momento
determinado del crecimiento

N = N0 * 2 n

donde N= nmero final de clulas y n= nmero de generaciones

El tiempo de generacin g de la poblacin celular se calcula

como: g = t/n

donde t= horas o minutos

Los tiempos de generacin son usados para ensayar efectos positivos o efectos
negativos
 CICLO PROCARIOTICO
Antiguamente se pensaba que los ciclos
bacterianos carecan de eventos clave dado que no
hay mitosis y la sntesis de ADN pareca continua
durante todo el ciclo
En la actualidad se conocen fenmenos clave :
fase C o de sntesis del ADN (equivalente a la S
eucaritica); replicacin del ADN; fase D que
termina con el final de la divisin celular (equivale
a la M eucaritica) ; fase de intervalo (similar a la
G1 eucaritica)
 CICLO PROCARIOTICO
Las fases C y D son relativamente
constantes y cuando disminuye el tiempo de
generacin (g) lo hace a expensas de la fase
G1 . En el caso de E. coli la fase C= 40 minutos
y la fase D= 20 minutos

Cuanto ms rico es un medio , el

tiempo de generacin es menor y mayor
es el tamao medio de las clulas
 CICLO PROCARIOTICo
Si se inocula una clula cultivada en un
medio pobre (g=60 min, C+D= g) a un medio
ms rico (g=35 min) se observa: la primera
divisin ocurre a los 60min idntico al medio
anterior , pero el inicio de una nueva ronda
de replicacin ocurre antes (C+D se
superponen) y se obtiene un tamao mayor
que en el medio pobre y una masa de inicio
mayor
CULTIVOS EN SISTEMAS CERRADOS

Una poblacin bacteriana presenta un

patrn de crecimiento cuando se inocula
en un medio de cultivo fresco cerrado
(lquido o slido)
En estos sistemas la fase exponencial
de crecimiento dura slo unas cuantas
generaciones debido al agotamiento de
nutrientes y/o acumulacin de desechos
CULTIVOS EN SISTEMAS CERRADOS
En estos sistemas hay una fase de latencia (fase lag) de
retraso mientras las clulas se ajustan a las nuevas
condiciones, es un perodo de ajuste metablico que
depende del tamao del inculo, bondad del inculo
(estado metablico previo)
Fase exponencial o fase logartmica de crecimiento
continuo donde se da un crecimiento balanceado no
restringido durante unas pocas generaciones (menos de
10), el valor de (g) depender de la composicin del
medio, temperatura, pH, osmolaridad
CULTIVOS EN SISTEMAS CERRADOS
Fase estacionaria se caracteriza porque el coeficiente de crecimiento se
hace nulo pero aun existe crecimiento que se equilibra con las muertes
celulares, se agotan nutrientes especiales y se acumulan sustancias de
desecho, incluso el pH se hace inadecuado, aun hay reacciones metablicas
pero el metabolismo es diferente (clulas son ms chicas) al de la fase
logartmica , el citoplasma se condensa, la membrana se hace menos fluida y
suele ser ms resistente a los agentes fsicos y qumicos
Fase de muerte si la incubacin continua en la fase estacionaria, las clulas
empiezan a morir y hay incluso lisis celular , es tambin una funcin
exponencial pero ms lenta que la exponencial
MEDICION DEL CRECIMIENTO CAMARA DE PETROFF HAUSSER

Se puede medir siguiendo los cambios en el

nmero de clulas o el peso de la biomasa
celular
El nmero de clulas se puede medir al
microscopio y se llama recuento directo
Se puede realizar en muestras secas o lquidas
para las que se usan cmaras especiales de
recuento donde el valor de clulas es
convertido a clulas por mililitro de suspensin
Cmara de Petroff Hausser: portaobjeto
especial con graduacin en superficie y
medidas concretas:
0.02 mm de profundidad
rea de 1 mm 2 dividida en un retculo de 25
cuadrados grandes
cada cuadrado grande est subdividido a su
vez en
4 x 4= 16 cuadrados pequeos
la muestra se distribuye en 16 x 25= 400
celdillas
 MEDICION DEL CRECIMIENTO
La muestra dispensada entre porta y cubre se deja
reposar unos minutos y se cuenta el nmero de clulas
en varias celdillas (en general 16 equivalente a un
cuadrado grande), se anota el nmero n y se establece:

n x 25 x 50 x 1000 = concentracin en clulas / ml

Limitaciones:
las clulas vivas no se distinguen de las muertas
las clulas pequeas son difciles de apreciar
se requiere habilidad para obtener precisin
se necesita contraste de fases cuando la muestra no
est teida
no es bueno para suspensiones poco densas, slo sirve
para suspensiones concentradas ( mayores a 10 x 10 6
cel./ml)
RECUENTO
DE
VIABLES

El recuento en placa determina el nmero de clulas capaz de generar colonias

sobre la superficie de un medio slido
Hay dos formas, por siembra en superficie: se siembra 0.1 ml de muestra y se
extiende por la superficie con una barra de vidrio o metal
O bien, por siembra en profundidad: se siembra de 0.1 a 1.0 ml en la placa de
Petri y se agrega el medio slido fundido (40 C) y se incuba
Por este mtodo se pueden usar volmenes ms grandes
Hay que tener en cuenta que el organismo a ser contado resista temperaturas de
40 a 45 C
El nmero de colonias que puede ser contado oscila entre 30-300 colonias
 DILUCIONES
Cuando el cultivo es denso se usa
el mtodo de diluciones
Se usan diluciones seriadas en
base 10: 1.0ml de muestra en 9.0ml
de diluyente o bien, 0.5ml muestra
en 4.5ml de diluyente
El nmero de colonias depende
del inculo , medio de cultivo y las
condiciones de incubacin (medio
de cultivo, temperatura y tiempo de
incubacin)
La expresin del resultado ser
como unidades formadoras de
colonias por mililitro (ufc/ml) ya que
la ufc puede contener ms de una
clula
 MASA CELULAR Y TURBIDEZ
Medida de la masa bacteriana: Mtodos directos

Se puede determinar el peso seco donde la masa seca

(estufa a 105 C toda la noche) es aproximadamente
entre el 10 al 20% de la masa hmeda
Inconvenientes: mtodo tedioso que requiere tiempo y
errores en pesadas ( 1 mg de peso seco equivale a una
masa bacteriana de 5 x 10 9 bacterias)
o bien, el peso hmedo donde se centrifuga y se
elimina el sobrenadante y se determina el peso del
sedimento
 MASA CELULAR Y TURBIDEZ
Determinacin de componentes caractersticos:
peptidoglicano, ARN, ADN, protenas, se usan en
bacterias que forman grumos no dispersables o
crecen en filamentos en general, se emplean en
determinaciones en ambientes naturales
Mtodos indirectos :
Turbidimtricos (pticos): la base comn
consiste en la medicin de la cantidad de luz
dispersada o trasmitida a travs del cultivo
bacteriana. La dispersin de la luz dentro de
ciertos limites es proporcional a la masa del cultivo
 MASA CELULAR Y
TURBIDEZ
Escala de Mc Farland: es una serie
de patrones de turbidez (precipitado
de SO4 Ba) previamente calibrados y
se establece la equivalencia entre la
turbidez de cada tubo y la masa o
concentracin de bacterias
(clulas/ml) que genera una turbidez
similar
Un mtodo ms til es la medida
de turbidez con fotmetro o
espectrofotmetro que hacen pasar
luz a travs de las suspensin celular
y detectan la cantidad de luz no
dispersada
Los resultados se expresan en
unidades fotomtricas o unidades de
densidad ptica proporcionales al
nmero de clulas y a la masa celular
 MASA CELULAR Y TURBIDEZ
Hay que realizar una curva estndar de
calibracin que relacione medidas
directas (recuento en placa o
microscopa) con las indirectas de
turbidez
En el mtodo de turbidimetra es
necesario determinar el contenido de
ufc/ml de la muestra original (de la cual
se hicieron las diluciones para la
calibracin) con el mtodo de recuento
en placa.
Con esta informacin y las
absorbancias de las diluciones, se hace
una curva de calibracin. Teniendo esta
curva, se podr determinar las ufc/ml de
otras muestras luego de leer la
absorbancia de las mismas.
 Contadores electrnicos de partculas : se
pasa una suspensin bacteriana por un tubo
capilar entre los dos polos de una corriente
elctrica
Cada vez que pasa una bacteria se
interrumpe la corriente y es recogida por un
dispositivo electrnico que detecta el
numero y tamao de las partculas que van
pasando (el tamao es funcin de la
intensidad del pulso de voltaje al paso de la
partcula)

Citometra de flujo activada por

fluorescencia (FACS): las partculas se
marcan antes con anticuerpos monoclonales
hacia alguna molcula de superficie y se
unen a un fluorocromo (molcula que se
excita al absorber la radiacin lser y emite
fluorescencia a diferente longitud de onda)
 EL QUIMIOSTATO
Es un reactor que mantiene el
crecimiento bacteriano en la fase
exponencial
Es un cultivo continuo el volumen se
mantiene constante (recambio entre medio
fresco y usado) y se alcanza un estado de
equilibrio entre el nmero de clulas y su
estado metablico
Es un cultivo balanceado mantenido por
tiempo indefinido por un sistema de flujo
que se compone: una cmara de cultivo de
volumen constante a la que llegan
nutrientes y de la que se eliminan los
productos txicos de desecho
Caractersticas: estado constante o
estable; concentracin bacteriana y
concentracin del sustrato: constante; tasa
de dilucin y rendimiento celular:
constante
Se usan dos elementos de control: la velocidad de dilucin y la concentracin del
nutriente limitante (C o N)
La velocidad de dilucin controla la velocidad de crecimiento en rangos muy
amplios y la densidad celular (clulas/ml) esta controlada por el nivel del nutriente
limitante
Los parmetros a tener en cuenta son: f (ml/h); volumen cmara de cultivo (ml);
densidad celular (x); factor de dilucin D=f/v (h -1)
Si logramos que el coeficiente de crecimiento (m) se haga igual al factor de
dilucin (D), entonces dx/dt=0 y por tanto la cc de las clulas se hace constante (x=x)
y el cultivo se encuentra en estado dinmico de equilibrio

EL QUIMIOSTATO
 Los MO pueden cultivarse en una amplia gama de tasas de crecimiento
exponencial y permite crecimientos balanceados y restringidos ya que el nutriente o
sustrato est presente en una concentracin baja como para limitar la densidad de
poblacin
Sin embargo, a tasas altas de dilucin la concentracin microbiana cambia
rpidamente y el cultivo puede ser lavado totalmente (dilucin crtica)
A muy bajas diluciones el quimiostato no funciona si el nutriente limitante es la
fuente de energa ya que slo se usa para reacciones de mantenimiento celular y no
para crecimiento (energa de mantenimiento) como ser potencial de membrana,
trasporte activo o sntesis de protenas

EL QUIMIOSTATO
 Aplicaciones:
Procesos industriales de fermentacin (produccin de bebidas alcohlicas, de antibiticos, de
aminocidos, etc)
Permite estudiar: aspectos fisiolgicos (catabolismo de sustrato limitante), seleccin de
mutantes ; estudios ecolgicos
Su aplicacin ms conocida es para la depuracin de aguas ya sea
mediante procesos aerbicos o anaerbicos . El medio de cultivo fresco es el agua residual que
entra en la planta y alimenta a los fangos activados por MO que luego se retiran por decantacin

EL QUIMIOSTATO
 FACTORES AMBIENTALES
El abanico es amplio y va desde puntos por debajo de la congelacin del agua
hasta 110 C, el rango habitual es 30 C
Se distinguen cuatro grupos:
Psicrfilos con temperaturas bajas 0-20 C,
Mesfilas con medianas 20-45 C,
Termfilas ms altas 60- 90 C
Hipertermfilas con muy altas 90-110 C
Congelacin: existe un lmite por el cual es imposible la reproduccin, hay
crioprotectores (glicerol y dimetilsulfxido) que permiten su conservacin a
temperaturas (-70 C)
Termofilia: termfilos poseen membranas ricas en cidos grasos saturados que
les dan estabilidad a altas temperaturas. Las eucariotas estn ausentes por encima
de
60 C debido a la porosidad de sus membranas
La temperatura favorece reacciones del metabolismo bacteriano:
-Acelera su capacidad de sntesis
-Velocidad de multiplicacin ms rpida
Regla de Vant Hoff: "la velocidad de las reacciones qumicas se duplica por cada
incremento de 10 C de la temperatura
 FACTORES
AMBIENTALES
 Cloruro de
Sodio

Cloruro de sodio: el agua de mar tiene una concentracin del 3% , los organismos
que se aslan del mar tienen requerimientos especficos para el sodio y se llaman
halfilos pudiendo ser:
Moderadamente halfilo (6-15%),
Discretamente halfilo (1-6%),
Halfilos extremos (15-30%)
 pH y ACTIVIDAD DEL AGUA
Acidez y alcalinidad - pH: slo unas pocas especies
pueden crecer a pH extremos, la mayora de los ambientes
naturales tiene 5-9. Segn su tolerancia al pH:
Los que crecen a pH cidos (1-5.5) son acidfilos
Los que crecen a pH bsicos (8.5-11.5) alcalfilos
Los que crecen a pH neutro (5.5-7.0) neutrfilos
La mayora de las bacterias tienen su pH ptimo
(exterior) entre 5-9 y
cambian el pH de su hbitat acidificando o alcalinizando y
con ello facilitan o impiden la supervivencia de otras
especies bacterianas.
 pH y ACTIVIDAD DEL AGUA
Acidgenas: acidifican su entorno al liberar productos
cidos
Acidricas: crecen en un medio cido y son capaces de
hacerlo ms cido
Actividad el agua: la disponibilidad el agua se expresa en
trminos fsicos como actividad del agua (a w) y sus valores
oscilan entre 0 y 1
Osmosis: es el proceso por el que el agua difunde desde
una regin de alta cc (baja en soluto) a una regin de baja
cc (alta en soluto)
Plasmlisis: se produce cuando la clula est en
ambiente con baja actividad del agua y existe una tendencia
de salida del agua intracelular
 NECESIDADES DE OXIGENO
Bacterias aerbicas estrictas: utiliza concentraciones del 20% ms de Oxgeno
Metabolismo : Alimento + O2 Material celular + CO2 + H2O
Microaerfilos: necesita concentraciones muy bajas de Oxgeno. 2-10%. Tienen
superxido dismutasa (SOD) y pueden o no tener catalasa
Bacterias anaerbicas estrictas: No tolera nada de Oxgeno. Les resulta txico y
mueren, solo crecen si hay 0.5%. No tiene ni SOD ni catalasa
El oxigeno es un txico, su metabolismo es:

Bacterias anaerbicas facultativas: utiliza oxgeno solo si lo hay. No tiene problema

para sobrevivir pero si hay oxgeno crece ms rpido, 2-8%, tienen SOD y catalasa
Anaerobio aerotolerante: no necesita oxgeno para crecer y multiplicarse. Tolera el
oxgeno pero no lo utiliza. Tienen SOD pero no catalasa
 NECESIDADES DE OXIGENO
El Oxgeno es txico para algunos porque no tienen las enzimas SOD y
catalasa, que degradan a los radicales libres del Oxgeno que son txicos. Con
estas enzimas (SOD y Catalasa), las bacterias pueden vivir con oxgeno
El consumo de oxgeno es necesario para la respiracin celular (para obtener
ATP)

Toxicidad del Oxgeno: elementos txicos:

H2O2: Perxido de Hidrgeno
O2- : radical superxido
OH- : radical hidroxilo

Enzimas que intervienen:

Superxido dismutasa: 2 O2 + 2 H+------H2O +O2

Catalasa o peroxidasa: H2O2--------------H2O + O2

Metabolismo Bacteriano
Conceptos
 NUTRICIN BACTERIANA

METABOLISMO

BIOSNTESIS
NUTRIENTES ENERGA
Nutrientes
Agua
CO2
Como fuente de carbono para reducirlo (f.a) u oxidarlo
(q.a.l.)
Como aceptor de electrones (metanognicas)
Reacciones de carboxilacin
Macronutrientes
C, H, O, N, P, S, K, Mg (reacciones enzimticas)
Micronutrientes o elementos traza
Co, Cu, Zn, Mo
Requerimientos nutritivos

Macronutrientes:
Carbono, Nitrgeno, Fsforo, Azufre,
Potasio, Magnesio, Hierro, Agua

Micronutrientes:
Cobalto, Zinc, Cobre, Manganeso

Factores de crecimiento:
Aminocidos, Vitaminas y Bases
nitrogenadas
Metabolismo bacteriano
Metabolismo: conjunto de reacciones qumicas
que tiene lugar en la clula.

Tres funciones especficas:

- obtener energa qumica del entorno,
almacenarla, para utilizar luego en diferentes
funciones celulares,
- convertir los nutrientes exgenos en unidades
precursoras de los componentes
macromoleculares de la clula bacteriana,
- formar y degradar molculas necesarias para
funciones celulares especficas, como por
ejemplo, movilidad y captacin de nutrientes.
Metabolismo bacteriano
Secuencias de reacciones catalizadas
enzimticamente, y se divide en anabolismo y
catabolismo.
Anabolismo: proceso por el cual la clula
bacteriana sintetiza sus propios componentes,
tambin se denomina biosntesis.

Catabolismo: conjunto de reacciones

degradativas de los nutrientes para obtener
energa o para convertirlos en unidades
precursoras de biosntesis.
GRUPOS NUTRICIONALES
Grupo Fuente de Fuente de
nutricional carbono energa

Fotoauttrofos CO2 Luz

Compuesto
Fotohetertrofos Luz
orgnico

Sales
Quimioauttrofos CO2
inorgnicas

Compuesto Compuesto
Quimiohetertrofos
orgnico orgnico
 Metabolismo bacteriano
La energa es obtenida de reacciones de
oxido-reduccin

Transferencia de electrones o de
tomos enteros de hidrgeno, por lo
que se conocen tambin con el nombre
de reacciones de deshidrogenacin.
TIPOS DE REACCIONES METABLICAS

Reacciones energticas

Reacciones de biosntesis

Reacciones de polimerizacin

Reacciones de ensamblaje
REACCIONES ENERGTICAS:
FASES
Digestin extracelular

Paso a travs de la envuelta:

Difusin simple
Difusin facilitada
Transporte activo

Degradacin y obtencin de
energa
Transporte de Nutrientes.

Difusin simple o pasiva

Difusin facilitada
Traslocacin en grupo
Transporte activo
Difusin Difusin
simple facilitada

Transporte pasivo Transporte activo

REACCIONES ENERGTICAS:

Va glucoltica de Embder
Meyerhof
Va pentosa fosfato
Ciclo de Krebs

Va de Entner Doudoroff
REACCIONES ENERGTICAS

Fermentacin:
Aceptor final de e- compuesto orgnico
1 glucosa/2 ATP

Respiracin:
Aceptor final de e- compuesto inorgnico
1 glucosa/38 ATP
 Crecimiento Produccin
Tipo de Va
Catalasa
bacteria Aerobio Anaerobio metablica
SOD
Aerobia
+ - + Respiracin
estricta
Anaerobia
- + - Fermentacin
estricta
Respiracin/
Facultativo + + +
Fermentacin
Indiferente/
+ + + Fermentacin
Aerotolerante
Microaerfilo (+) + (+) Fermentacin
 En algunas bacterias, al final de la cadena de transporte
electrnico, puede existir un aceptor diferente del oxgeno
(respiracin anaerobia). Los aceptores y sus respectivos
productos reducidos (A AH2) son:

NO3-- N2
SO42- SH2
fumarato succinato
CO2 CH4
Fe3+ Fe2+
Con estos aceptores se obtiene menos
energa que con el oxgeno, porque la
pareja O2/H2O es ms oxidante que las
otras.
REACCIONES DE BIOSNTESIS

Formacin de elementos estructurales:

cidos grasos
Azcares
Aminocidos
Nucletidos
REACCIONES DE POLIMERIZACIN Y
ENSAMBLAJE

Formacin de macromolculas:
ADN, ARN, protenas,
peptidoglicano, fosfolpidos,
LPS...

Formacin de las distintas

estructuras celulares
REGULACIN DEL METABOLISMO

Regulacin de la actividad
enzimtica

Regulacin de la sntesis
enzimtica:
Represin
Induccin
Aerobiosis vs anaerobiosis
Aerobios obligados
Deben vivir en ambientes donde el oxgeno est
presente
Anaerobios obligados
Deben vivir donde no hay oxgeno.
Obtienen su energa por procesos de fermentacin.
Anaerobios facultativos
Pueden vivir con o sin oxgeno
 Nutricin Bacteriana
Fotoauttrofos:
utilizan la energa solar y producen azcares.

Quimoauttrofos:
necesitan slo dixido de carbono para obtener energa de
elementos inorgnicos.

Fotohetertrofos:
son nicos y necesitan la luz solar para producir energa,
a partir de compuestos orgnicos.

Quimohetertrofos:
utilizan molculas orgnicas para producir su energa
necesaria.
 Nutricin Bacteriana
Desde el punto de vista biosinttico:
Litotrofas: que slo requieren sustancias inorgnicas
sencillas (SH2 S0, NH3, NO2-, Fe, etc.)

Organotrofas: requieren compuestos orgnicos (hidratos

de carbono, hidrocarburos, lpidos, protenas, alcoholes...).

Autotrofas: crecen sintetizando sus materiales a partir de

sustancias inorgnicas sencillas. El concepto de autotrofa
se limita a la capacidad de utilizar una fuente inorgnica de
carbono (CO2).

Heterotrofas: su fuente de carbono es orgnica (si bien

otros elementos distintos del C pueden ser captados en
forma inorgnica).
 Tipos de quimiolitotrofos

La capacidad de obtener energa por

fosforilacin oxidativa a partir de donadores
inorgnicos de electrones slo se presenta en
ciertos grupos de procariotas.
Cada grupo fisiolgico de quimiolitotrofos
usa un tipo de donador inorgnico:

bacterias de hidrgeno (H2)

bacterias del hierro (Fe2+)
bacterias del azufre (S2-, S0).
bacterias nitrificantes, con dos subtipos
diferentes:
las oxidadoras de amoniaco (llamadas nitrosas)
y las oxidadoras del nitrito (llamadas ntricas).
 El uso desasimilativo de nitrato se llama
desnitrificacin, y ocurre por medio de
una serie de fases donde el N va
cambiando su estado de oxidacin:

NO3-- NO2- (nitrito) NO (xido ntrico)

N2O (x. nitroso) N2 (dinitrgeno)
 Slo las bacterias
sulfatorredutoras
usan el sulfato como
aceptor de La mayora son
electrones quimiorganotrofas,
Por una ruta especial pero algunas
en la que el sulfato quimiolitotrofas
primero tiene que pueden usar H2
activarse con ATP donador de
formando la electrones.
adenosina-fosfo-
sulfato ( APS).
 Las arqueobacterias metanognicas son los
nicos seres vivos capaces de obtener energa
acoplando la oxidacin del hidrgeno molecular
con el uso de CO2 como aceptor de electrones

Actan en estas condiciones como

quimiolitotrofos:

4H2 + CO2 CH4 + 2H2O

A partir la gliclisis pueden darse la respiracin
aerobia o la anaerobia.
Ciclo de Calvin o del C3

Ribulosa 1
Ribulosa 1,5 fosfato
CO2 difosfato

H2O
Compuesto
inestable
Fructosa
6-fosfato
Acido
3-difosfoglicrico
H2O 3-fosfo
gliceraldehdo

ATP

NADPH2
Acido GLUCOSA
ADP +NADP 1,3-difosfoglicrico Pi
La gluclisis, ruta
metablica comn a
todos los
organismos
A partir la gliclisis pueden darse la
respiracin aerobia o la anaerobia.
Ciclo de
Krebs

Ciclo del
cido
tricarboxlico
(ATC)
 El conjunto de reacciones del ciclo ATC se puede
resumir en la siguiente forma:

Acetil-CoA + 3H2O + 3NAD+ + FAD+ + ADP + Pi

2CO2 + CoA + 3NADH2 + FADH2 + ATP

Una molcula de glucosa da lugar a dos de acetil-

CoA, que pueden entrar en este ciclo
El total ser el doble del indicado en esta reaccin
 Rendimiento
total en ATP
por molcula
de glucosa
Catabolismo de los lpidos

cido graso

Glicerina
Glicerina cido graso
3 cidos grasos

cido graso

Lpido
 Glicerina Glicerina NADH2
Glicerina quinasa ADP NAD fosfato
deshidro
genasa
+ ------- + + ------------- +
-
ATP Mg+2 Glicerina- Glicerina Fosfato de
3 fosfato -3 fosfato dihidro
acetona

TodosTodos
losloscompuestos
compuestos de esta reaccin entran a la va glucoltica.
de esta reaccin entran
a la va glucoltica.
Oxidacin de los cidos grasos
 CATABOLISMO DE PROTENAS
Las protenas son demasiado grandes para
atravesar las membranas
Los microorganismos excretan proteasas que
hidrolizan las protenas exgenas a pptidos.
Proteasas Peptidasas
Protenas----- Pptidos------- Aminocidos

Los esqueletos carbonados de los aminocidos

entran en el ciclo ATC para sufrir una mayor oxidacin
va acetil CoA, cido cetoglutrico, cido succnico,
cido fumrico o cido oxaloactico
 Almidn Azcares
complejos
Glucosa
6C

Glicerol
3C
Gliceraldehdo 3
P
RUTAS DE 3C
cido Lctico
OTROS Aminocidos 3C
3C
COMPUESTOS cido pirvico
3C
EN LA cidos
RESPIRACIN Grasos

AERBICA
Aminocidos Alcohol
2C 2C
Acetil CoA
2C

Ciclo
Otros de los cidos
aminocidos de tricarboxlicos
ms de
3C
BIOSNTESIS
(Anabolismo)
Intermediarios Ribosa Fosfopiruvato, Acetato,
de bajo peso carbamil fosfato Cetocidos Malato Malonato
molecular

Unidades Mono - Azcares cidos grasos,

estructurales nucleticos Aminocidos sencillos Glicerina

Macromolculas cidos Poli -

(Alto peso Nuclicos Protenas sacridos Lpidos
molecular)

Asociaciones Complejos
supra - enzimticos,
moleculares Ribosomas,
Sistemas contrctiles

Ncleo, mitocondria,
Organelas cloroplasto, etc.
RELACIN ENTRE LAS
TRANSFORMACIONES
CATABLICAS Y
ANABLICAS
 Lpidos Polisacridos Protenas

FASE I
Acidos grasos Hexosas
Glicerina Pentosas Aminocidos

Gliceraldehido 3-fosfato

Fosfoenolpirvato FASE II

.Pirvico

Acetil CoA

A. Oxaloactico Acido Ctrico

Acido Isoctrico
Ciclo de los cidos
tricarboxlicos
Acido Mlico
Acido - cetoglutrico

Acido Fumrico
FASE III
Acido Succnico Succinil CoA

CO2
 Condiciones para el crecimiento microbiano

agua
Medios de cultivo
fuente de energa
Nutrientes fuentes de C, N, otros
Crecimiento elementos
micronutrientes,
factores de crecimiento
temperatura
pH
Condiciones
luz
de cultivo
aireacin
actividad de agua
potencial redox
 Factores de crecimiento

Microorganismos auto o heterotrfos pueden requerir

pequeas cantidades de ciertos compuestos orgnicos que
no pueden sintetizar y deben incorporarse en los medios

* bases pricas y pirimdicas ADN, ARN

* aminocidos esenciales sntesis proteica
* vitaminas coenzimas
 Aislamiento

Aislar: Es separar un tipo de microorganismo a partir de una

poblacin mixta. En habitats naturales, raramente encontramos
a los microorganismos en cultivo puro

Aislamiento directo:se logra directamente a partir de una

muestra cuando el o los microorganismos estn en una
proporcin adecuada., se realiza por estras (agotamiento) con o
sin dilucin previa de la muestra (suelo, alimentos), en medio
slido

Aislamiento por enriquecimiento:Cuando el microorganismo

que se desea aislar e identificar se encuentra en baja proporcin
en la muestra, se incluye una primera etapa que consiste en
sembrar la muestra en medio lquido. Luego de varios pasajes
se aisla por el mtodo de estras.
Clasificacin de los medios de cultivo

Segn su naturaleza fsica

* lquidos
* slidos - solidificante: agar-agar, silico-gel
* semi-slidos

Segn su composicin
* definidos o sintticos: composicin qumica conocida
* no definidos o complejos: composicin qumica no
definida, enriquecidos con peptonas, extracto de
carne, de levadura, de suelo, sangre
 Segn su uso en el laboratorio

* selectivos o inhibitorios: medios que contienen, adems de los

nutrientes, ciertas sustancias que inhiben el desarrollo de algunos
microorganismos permitiendo el crecimiento de otros o cuya
composicin permite el desarrollo de un grupo determinado
Ej.agar-antibiticos; agua, sales, luz, para algas, medios con NaCl
superior a la concentracin fisiolgica

* diferenciales: medios que contienen indicadores para diferenciar

los distintos tipos de microorganismos que puedan crecer en l.
Ej. azcar fermentecible: lactosa, indicador:rojo neutro
 Segn su uso en el laboratorio

* selectivos o inhibitorios: medios que contienen, adems de los

nutrientes, ciertas sustancias que inhiben el desarrollo de algunos
microorganismos permitiendo el crecimiento de otros o cuya
composicin permite el desarrollo de un grupo determinado
Ej.agar-antibiticos; agua, sales, luz, para algas, medios con NaCl
superior a la concentracin fisiolgica

* diferenciales: medios que contienen indicadores para diferenciar

los distintos tipos de microorganismos que puedan crecer en l.
Ej. azcar fermentecible: lactosa, indicador:rojo neutro
Cultivo en medio lquido
Habitualmente se realiza en tubos o en matraces. El crecimiento se puede
manifestar por enturbiamiento, por formacin de velo o pelcula, o por
sedimento.
Cultivo en medio slido
Puede ser en tubos o placas
a) Tubos con agar inclinado. Para sembrarlos, se mueve el ansa o la punta
suavemente sobre la superficie del agar con un movimiento en zigzag desde el
fondo hasta la parte superior, cuidando de no daar el agar.
b) Tubos sin inclinar. Se siembran introduciendo una punta en el centro del agar.
Tambin se llama siembra por picadura.
c) Siembra en placas. Puede ser en superficie (por estras o baado) o
incorporada (mezclando el inculo con el agar semifundido)
 Cultivo puro
Las colonias se describen por examen macroscpico en funcin del
tamao, la forma, el borde, la elevacin, la transparencia y el color. Esto
resulta a veces muy til en la identificacin

A partir de colonias aisladas en medio de cultivo se realiza un examen

microscpico que debe mostrar clulas razonablemente semejantes
respecto al Gram y a la morfologa.

Las colonias aisladas deben aislarse nuevamente en medio no selectivo

por el mtodo de estras. Esto se conoce como reaislamiento.
Divisin celular: fisin binaria

Gemacin,
ej.
levaduras
Crecimiento de un microorganismo en medio
de cultivo lquido

1- Fase de latencia
2- Fase exponencial
3- Fase estacionaria
4- Fase de muerte
Crecimiento en un volumen fijo de medio o
cultivo cerrado (batch)
Luego de la adicin de bacterias al medio lquido fresco se observa la
siguiente cintica de crecimiento
Fase lag - las clulas se adaptan al nuevo ambiente, aun no se dividen
Fase exponencial (log) - velocidad mxima de crecimiento bajo
condiciones particulares, tiempo de generacin mnimo
Fase estacionaria - sin crecimiento neto, vc=0 estadsticamente = 0
cuando: vc=vm (vel. crecimiento es igual a la de muerte)
nutrientes limitantes, pero suficientes para mantener actividad
acumulacin de desechos, inhibicin del crecimiento
Fase de muerte - velocidad de muerte celular > velocidad de divisin
celular
 Factores del ambiente

fsicos: temperatura, gases, pH, presin osmtica

qumicos: nutrientes, sustancias antimicrobianas
biolgicos: otros microorganismos, micro y
mesofauna, vegetacin, afectan las
actividades microbianas

Los distintos factores actan simultneamente y

resulta difcil el anlisis integrado de los efectos.
 Sicrfilos - rango: < 0-20C, ptimo < 15oC
organismos marinos, algas: Chlamydomonas nivalis (nieve rosada),
bacterias: Pseudomonas, Flavobacterium
membrana contiene alto % de cidos grasos insaturados
Sicrtrofos o Sicrfilos facultativos
- rango: 0-35C, ptimo 20-30oC
Pseudomonas - crecen en el refrigerador
Mesfilos - rango: 15-45 C, ptimo: 30-40C
la mayora de los microorganismos (del suelo, aguas, patgenos)
Termfilos - rango: 40-70C, ptimo de 55-65oC
membrana contiene alto % de cidos grasos saturados
enzimas estables al calor
Bacillus stearothermophilus, organismos de compostaje
Hipertermfilos - rango: 80-113C, ptimo > 90oC
Pyrococcus, Pyrodictium (aguas termales)
 Oxgeno
Clasificacin de los microorganismos segn
el efecto del oxgeno:
Aerobios
obligados: requieren oxgeno (21% o ms)
Ej. Bacillus, hongos, etc.
microaeroflicos: lo requieren pero a niveles menores que el
atmosfrico (5-10%)
Ej. Azospirillum
Anaerobios
facultativos: no requieren oxgeno, pero el desarrollo es mejor con
oxgeno.
Ej. Levaduras, E. coli
aerotolerantes: no son sensibles al oxgeno (crecen en ausencia o
presencia de oxgeno).
Ej. Enterococcus faecalis, Sreptococcus spp.
.
obligados: no toleran el oxgeno, muere en su presencia
Ej. Methanobacterium, Clostridium
 Cultivos en anaerobiosis
tubos con medio de cultivo llenos por completo.
medios con sustancias que reaccionan con el oxgeno y lo excluyen.
dispositivo especial (cmara anaerbica)
cajas o tubos incubados en recipientes con granos germinados (cebada, centeno)
 Otros gases
N2 componente principal de de la atmsfera (78%). Gas inerte: no es usado
por la mayora de los organismos, los que pueden reducir el triple enlace del
N2 con la enzima nitrogenasa se denominan diazotrofos o fijadores de N2 y
pueden desarrollarse en ambientes sin N-combinado

CO txico para la mayora de los organismos (cadena respiratoria)

puede ser oxidado a CO2 por algunos microorganismos

CH4 liberado a la atmsfera por microorganismos metanognicos, gas con

efecto invernadero, puede ser oxidado a CO2 por bacterias metanotrficas

CO2 importante gas, fuente de carbono para los autotrofos, aerobios y

anaerobios, fotosintticos o quimiosintticos. Muchos hongos lo requieren a
niveles superiores a los atmsfericos, para ciertas sntesis

H2 poco usado, txico para la mayora de los microorganismos, brinda

energa a bacterias Hydrogenomonas: H2+O2 = H20 + ATP
 pH
El pH es la acidez o alcalinidad de una
solucin, medida por el log 1/(H+)
Clasificacin de los microorganismos segn
su pH ptimo
Neutrfilo: pH ptimo 7 - Ej.: bacterias
patgenas humanas.
Acidfilo: pH ptimo 7 - Ej.: muchas de
las archeobacterias y hongos.
Basfilo: pH ptimo 7 - Suelos y aguas
ricas en carbonatos
Medios de cultivo
MEDIO SELECTIVO Y
DIFERENCIAL
Colonia Lactosa negativa

Colonia Lactosa positiva

Agar sangre
S. epidermidis en agar sangre
Agar sangre

HEMOLISIS EN AGAR SANGRE

HEMLISIS COMPLETA HEMLISIS PARCIAL

Pseudomonas aeruginosa

Siembra en medio OF

Metabolismo oxidativo
Prueba de la catalasa

+ -