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INSTRUMENTACIN AL LABORATORIO
TRABAJO GRUPAL
INTEGRANTES:
BOWEN VERA SILVIA
SANTANA ALAVA GABRIELA
DOCENTE:
DR. ALBERTO CAMPOS GARCA
PARALELO:
SEGUNDO A
LA CROMATOGRAFA DE EXCLUSIN
Se utiliza el trmino de
Es un tipo de cromatografa Cromatografa de exclusin por
lquida en la cual la fase tamao.
estacionaria es slida y la fase
mvil es lquida
La muestra no interacciona
qumicamente con la fase
estacionaria, ni con la fase mvil.
SEPARACIN DE UN SOLUTO
ANALTICO
(PROTEINA)
ALTA SELECTIVIDAD EN EL
MECANISMO DE RETENCIN
LA CROMATOGRAFA DE
AFINIDAD
Se basa en la interaccin,
(llamada
especfica y reversible, que
genricamente
se presenta entre una
afinante)
partcula de inters.
Mtodo de inyeccin
Velocidad de flujo
Temperatura
RENDIMIENTO
SISTEMA DE CONTROL
TIPOS DE CROMATOGRAFA DE
GAS
MEDIDOR DE FLUJO
ROTAMETRO
CROMATOGRAFA LIQUDA DE ALTA
RESOLUCIN
Es un mtodo de separacin analtica, que se lleva a cabo gracias a la infinidad que tiene un compuesto (analito), por una
fase fija o estacionaria, o por una fase mvil.
2.- Fase Mvil (FM). Su naturaleza debe ser polar o mas polar que la FE, los disolventes pueden ser H2O, Metanol,
Etanol, etc.
3.- Analito. Debe ser no polar o no tan polar como la FM para poder ser retenido por la FE.
INSTRUMENTACIN
1. Reservorio. Contiene la Fase Mvil.
Tipos de Bombas
Binarias: impulsan un solo disolvente hacia el sistema.
Secundarias: impulsan dos disolventes hacia el sistema.
Terciarias: impulsan tres disolventes hacia el sistema.
Secundarias: impulsan cuatro disolventes hacia el sistema.
3.- Inyector
Permite introducir la muestra al sistema de HPLC para su anlisis sin
despresurizar el sistema y sin interrumpir el caudal.
La muestra se introduce en el Loop, el cual se encarga de introducir la
muestra al sistema.
Tiene una posicin de carga y otra de inyeccin.
La electroforesis es un mtodo
analtico semipreparativo, en el
que se separan biomolculas, en
dependencia entre otros factores de
su carga y bajo la accin de un
campo elctrico.
Las biomolculas se separan en funcin de:
Carga elctrica.
Tamao y forma.
Influencia de campo
cargado elctricamente Movimiento al ctodo (-) o
al nodo (+).
- +
nodo Ctodo
+ - + -
Los mtodos electroforticos son de alta sensibilidad, eficacia, poder de
resolucin y versatilidad.
Mtodo de separacin de:
Protenas
cidos nucleicos
Otras biomolculas
Permite detectar:
Peso molecular de una protena
Punto isoelctrico
Distinguir molculas para su carga neta o su forma.
ELECTROFORESIS DE La disolucin a tratar se aplica como una mancha, o como una banda, y las
partculas migran a travs de un disolvente, utilizando adems un medio de
soporte inerte y homogneo, tal como el papel o ciertos tipos de geles.
Membranas
de acetato de Agarosa
celulosa
Los iones positivos del amortiguador forman nubes de carga alrededor de las cargas negativas
inmviles de los soportes. Cuando se aplica la corriente elctrica, mientras las cargas
negativas permanecen fijas, las positivas, muy hidratadas, se mueven hacia el polo opuesto, lo
que produce el movimiento del solvente.
Como las macromolculas que se mueven en direccin contraria tienen que hacer frente a este flujo de
iones positivos hidratados, cuando la carga neta de las mismas es pequea pueden quedar inmviles e
incluso ir hacia el polo opuesto.
ACETATO DE CELULOSA
ELECTROFORESIS EN
Su aplicacin principal es separar las protenas del suero,
llamado PROTEINOGRAMA.
Sencillez de la tcnica.
Respecto al papel , las membranas de acetato de celulosa tienen las ventajas de ser qumicamente
mas homogneas y poder transparentarse, por lo que, una vez teidas o reveladas las sustancias que
se separan, podrn cuantificarse por densitometra y transparencia.
Este tipo de membranas se utilizan mucho en los laboratorios clnicos por su fcil manipulacin y la
rapidez de sus separaciones electroforticas.
Las tiras de acetato de celulosa se colocan en la cmara entre
dos compartimientos que contienen los electrodos , que estn
sumergidos en el mismo amortiguador. El amortiguador mas
utilizado es el veronal de pH 8,6. Como estas condiciones las
protenas tienen una carga neta negativa , el espcimen ha de
aplicarse en el extremo de la tira cercano al polo negativo, ya
que aquellas migraran al polo positivo. .
Los geles de agarosa, almidn y poliacrilamida no son solo soportes que evitan
la difusin , pues, modificando la concentracin de los componentes que
forman el gel, pueden conseguirse diferentes porosidades y la separacin,
adems de por diferencias de carga, se produce tambin por diferencias de
tamao.
GEL DE AGAROSA
La electroforesis en gel de Agarosa produce buenas
resoluciones en periodos de tiempo cortos. Adems,
como la agarosa es transparente, se puede medir la
intensidad de las fracciones separadas por densitometra.
Ventajas:
Jos Manuel Gonzlez de Buitrago. (2010). electroforesis capilar. Espaa. elsevier masson.