Qumica y Farmacologa de Plantas Medicinales

UNAM 2016

Preparacin de
Extractos

Dr. Ricardo Reyes

Un extracto se prepara poniendo
en contacto el material vegetal
(usualmente seco y molido) con
un disolvente o mezcla de
disolventes.

Un disolvente es un lquido que disuelve un soluto slido,

lquido o gaseoso, resultando una solucin.

El disolvente ms comn de la vida diaria es agua. La mayora

de los otros disolventes de uso general son orgnicos.

Los disolventes deben tener un punto de bajo punto de

ebullicin, evaporarse fcilmente, o eliminarse por destilacin,
deben ser inertes.

La solubilidad es la cantidad mxima de compuesto que sea

soluble en cierto volumen del solvente en una temperatura
especificada
La molcula polar por excelencia es POLARIDAD
el agua (H2O). d (-)

La polaridad (en qumica) es una

propiedad que representa la desi-
gualdad de las cargas elctricas en
una molcula.
Cuanto mayor sea la diferencia en
electronegatividad de los tomos
que se enlazan, ms polar ser una d (+)
molcula. La nube electrnica tiende d (+)
a concentrarse en el tomo ms
electronegativo generando una
carga parcial () negativa. El tomo H O
menos electronegativo tendr una 3.44
carga parcial () positiva. 2.20
 POLARIDAD
Las molculas no polares (apolares) estn formadas por
elementos con diferencia de electronegatividad muy reducida.
Una molcula no polar es el hexano.

CH3CH2CH2CH2CH2CH3

Una molcula polar es el etanol.

CH3CH2OH

La electronegatividad es la tendencia o capacidad de un tomo,

en una molcula, para atraer hacia s los electrones del enlace.

H C N O
2.55 3.04 3.44
2.20
 Polaridad y Preparacin de Extractos

La polaridad es muy importante en disoluciones

ya que un disolvente polar solo disuelve otras CH3-(CH2)14-COOH
substancias polares y un disolvente apolar solo cido palmtico.
disuelve substancias apolares:

"Lo semejante disuelve lo semejante".

La polaridad influye en el estado de agregacin

de las sustancias as como en termodinmica,
c. abscisico
ya que las molculas polares ofrecen fuerzas
intermoleculares (llamadas fuerzas de atraccin
dipolo-dipolo).

Tambin existen las fuerzas de dispersin (Fuer-

zas de Vander Walls London: dipolos tempo-
ralmente inducidos en molculas no polares).
Salicina
Polaridad, solubilidad, y miscibilidad
Los solventes y los solutos se pueden clasificar en polares
(hidroflicos) y no polares (lipoflicos). La polaridad se puede
medir como la constante dielctrica o el momento de dipolo
de un compuesto.

La polaridad de un disolvente determina qu tipo de

compuestos puede disolver. Los compuestos fuertemente
polares como las sales inorgnicas se disuelven solamente
en solventes muy polares como el agua, mientras que los
compuestos no polares como los aceites o las ceras
disuelven solamente en solventes orgnicos no polares
como el hexano.

Los disolventes polares se pueden subdividir en: prticos y

aprticos. Un solvente prtico contiene un grupo O-H, N-
H.
 ndice de polaridad* Polarity
SOLVENT
Index (P)
P: Es una medida de la Pentane 0.0
polaridad relativa de un
Hexane 0.1
disolvente.
Petroleum Ether 0.1
*Kier L.B. 1981. J Pharm Sci. 70(8):930-3 Cyclohexane 0.2
Un parmetro similar es n-Butyl Chloride 1.0
la Fuerza de Elusin Ethyl Ether 2.8
(Eluent Strenght): (). Dichloromethane 3.1
Chloroform 4.1
Es una medida de la ener-
ga de adsorcin de un di- Ethyl Acetate 4.4
solvente a un adsorvente. Acetone 5.1
Por convencin el valor Methanol 5.1
del pentano es 0 en silica Pyridine 5.3
gel. Acetonitrile 5.8
Conforme aumenta P, N,N-Dimethylformamide 6.4
(), se incrementa la po- Dimethyl Sulfoxide 7.2
laridad del disolvente. Water 10.2
Solvent Polarity Eluotropic Density Boiling Point
Baker, HPLC Index Value (g/ml) (C)
o
(p) (E Silica)
Pentane 0.00 0.00 0.626 36
Cyclohexane 0.00 0.03 0.774 81
n-Heptane 0.20 0.00 0.684 98
Toluene 2.40 0.22 0.867 110
Ether, Anhydrous 2.90 0.29 0.708 35
Isobutyl Alcohol 3.00 0.54 0.802 108
Methylene Chloride 3.40 0.32 1.327 40
Ethyl Acetate 4.30 0.45 0.900 77
Chloroform 4.40 0.31 1.483 61
Pyridine 5.30 0.55 0.980 115
Acetone 5.40 0.43 0.791 56
Acetonitrile 6.20 0.50 0.786 82
Acetic Acid, Glacial 6.20 >0.73 1.049 118
Methanol 6.60 0.73 0.791 65
Water 10.20 >0.73 1.000 100

http://www.acrus.ru/goodies/Summary%20of%20Key%20Physical%20data%20HPLC%20Solvents.doc
 http://www.sweb.cz/hplc/Tabs/1_solvents.htm

Polarity Solvent Viscosity [101.325 UV

Index [mPa.s; 20 oC kPa; oC] (Al2O3) Cutoff
] (nm)
0,0 Heptane 0,42 98,3 0,01 200
0,0 Hexane 0,31 68,7 0,01 200
0,0 Cyclohexane 0,98 80,7 0,04 200
0,0 n-Pentane 0,23 36,2 0,00 190
2,3 Toluene 0,59 101,6 0,29 285
2,9 Diethylether 0,23 34,6 0,38 202
3,0 Benzene 0,65 80,1 0,32 280
3,4 Dichlormethane 0,44 39,8 0,42 233
3,4 Chloroform 0,57 61,2 0,40 245
4,2 Tetrahydrofuran 0,55 66,0 0,45 230
4,3 Ethyl acetate 0,47 77,1 0,58 256
5,2 Ethanol 1,20 78,3 0,88 210
5,3 Pyridin 0,94 115,3 0,71 330
5,4 Acetone 0,32 56,3 0,56 330
6,2 Acetonitrile 0,37 81,6 0,65 190
6,6 Methanol 0,60 64,7 0,95 205
9,0 Water 1,00 100,0 180
SOXHLET

10
 La liofilizacin es un proceso en el que
se elimina el agua por sublimacin,
pasando desde el estado slido al
gaseoso sin pasar por el estado
lquido. Requiere un alto vaco.

Rotavapor: Destilacin de disol-

Ventes a presin reducida
(con vaco)
Qumica y Farmacologa de Plantas Medicinales.
UNAM 2016

SEPARACION DE
COMPUESTOS
ORGNICOS
CROMATOGRAFIA
Dr. Ricardo Reyes
 Cromatografa

La primera persona que defini la cromatografa fue el botnico

ruso Miguel Tswett (1872-1913) en 1906 y eligi el trmino
cromatografa procedente de las palabras griegas khromatos
(color) y graphos (escrito) ya que utiliz el trmino cromatografa
para describir la separacin de pigmentos vegetales en distintas
zonas coloreadas. Aunque la mayor parte de las separaciones que
se realizan actualmente son de compuestos incoloros, el trmino
cromatografa se ha mantenido.

Definicin IUPAC: Mtodo usado principalmente para la separacin

de los componentes de una muestra, en el cual los componentes
son distribuidos entre dos fases, una de las cuales es estacionaria,
mientras que la otra es mvil. La fase estacionaria puede ser un
slido o un lquido soportado en un slido o en un gel (matriz). La
fase estacionaria puede ser empaquetada en una columna,
extendida en una capa, distribuida como una pelcula, etc...
Cromatografa de adsorcin
Existen dos tipos: cromatografa de columna
y de capa fina.
Ambas emplean adsorventes como fase estaciona-
ria, el ms conocido es el Gel de Slice (Silica Gel).
 Cromatografa
La primera persona que defini la cromatografa fue el botnico
ruso Miguel Tswett (1872-1913) en 1906 y eligi el trmino
cromatografa procedente de las palabras griegas khromatos
(color) y graphos (escrito) ya que utiliz el trmino cromatografa
para describir la separacin de pigmentos vegetales en distintas
zonas coloreadas. Aunque la mayor parte de las separaciones que
se realizan actualmente son de compuestos incoloros, el trmino
cromatografa se ha mantenido.

Definicin IUPAC: Mtodo usado principalmente para la separacin

de los componentes de una muestra, en el cual los componentes
son distribuidos entre dos fases, una de las cuales es estacionaria,
mientras que la otra es mvil. La fase estacionaria puede ser un
slido o un lquido soportado en un slido o en un gel (matriz). La
fase estacionaria puede ser empaquetada en una columna,
extendida en una capa, distribuida como una pelcula, etc..La
fase mvil es un disolvente que solubiliza los compuestos
retenidos temporalmente por la fase estacionaria.
Cromatografa de adsorcin
Existen dos tipos: cromatografa de columna
y de capa fina.
Ambas emplean adsorventes como fase estaciona-
ria, el ms conocido es el Gel de Slice (Silica Gel).
 Estructura de la Silica Gel
El Gel de Slice es una forma amorfa,
porosa del xido de silicio, SiO2. Est
compuesta por una vasta red de poros
microscpicos interconectados. Puede
tener poros con una gran variedad de
dimetros (entre 5 a 3000 ). En croma-
tografa se emplea gel de slice con
poros de 60 que permiten la separa-
cin de las molculas por su polaridad,
no por su tamao.
 Puentes de Hidrgeno y Silica Gel
Los grupos silanol (Si-OH) del gel de slice
establecen puentes de hidrgeno con molculas
polares permitiendo la elucin de molculas no
polares si se emplea como fase mvil un
disolvente no polar.

Un puente de hidrgeno es una unin

electrosttica dbil entre tomos con cargas
parciales opuestas.
O d (-) H d (+)
Experience has shown that for chromatographic separations in production,
silica gel 60 i.e. (with a mean pore size of 60 and in particle size ranges 40-
63m and 63-200m) are precisely suited to the separation of complex
mixtures.
Silica Gel 60 Silica Gel 60
(40-63m) (63-200m)
Particle Size Range (m) 40-63m 63-200m
Mean Particle Size (m) ~50 ~105
Mean Pore Size () 60 60
pH (10% aqueous suspension) 7+0.5 7+0.5

Loss on Drying (%) (3 hours/120C) <9 <7

Bulk Density (g/ml) ~0.45 ~0.45
Back Pressure (bar) (column 250-4, n-heptane, ~2 ~0.5
20ml/min)
Iron (%) (acid extraction) <0.02 <0.02
Chloride (%) (acid extraction) <0.02 <0.02
Theoretical Plates (N/m)* ~3000 (anisole) ~1000 (anisole)
Relative Retention Alpha* ~1.73 ~1.73

* 2-nitroanisole/4-nitroanisole http://www.merck.de/servlet/PB/menu/1139880/index.html
Cromatografa en Columna y Capa Fina (TLC)
Silica gel pore size 60 , pore volume 0.75
cm3/g, particle size 200-400 mesh, for column
chromatography.

Silica gel pore size 60 , pore volume 0.75

cm3/g, particle size 130-270 mesh, for column
chromatography
Silica gel pore size 60 , pore volume 0.75
cm3/g, particle size 70-230 mesh, for column
chromatography

Silica gel con yeso

(Gypsum) como adhesivo
e indicador fluorescente a
UV = 254 nm (F254).

Tamao promedio de
partcula: 5 m; dimetro
del poro: 60
http://www.wfu.edu/academics/chemistry/courses/CC/index.htm
En el proceso de separacin se produce una competicin entre
la fase mvil y la fase estacionaria por el componente, y a este
proceso se le denomina particin del componente distribuido
entre las dos fases. Es decir, se establece un equilibrio entre la
concentracin del componente presente en la fase mvil y la
concentracin presente en la fase estacionaria.

El coeficiente de distribucin de un componente A se define

como:

Donde DA es el coeficiente de distribucin del componente A,

y [Aest.] y [Amv.] son respectivamente las concentraciones
del componente A en la fase estacionaria y en la fase mvil.
http://www.science.oas.org/RLQ/tutoriales/cromatografia/Thin.htm
Polaridad (-)

(+)
 RF = dC/dFM
Valores de 0 a 1

d = distancia
C = compuesto
FM = fase mvil

Aceites esenciales revelados con Vainillina

25
 Cromatografa Adsorvente Funcin
Cromatografa
Capa fina (TLC)Fase (Grosor) Fase Mvil Compuestos a
Estacionaria separar
Analtica 0.25 mm Anlisis cualitativo y
Fase normal Silica Gel No polar-> No polares->
cuantitativo, (HPTLC,
(polar) Polaridad Media Polaridad Media
densitometra)
(Hexano/AcOEt 7.3)
Preparativa 0.5-2.0 mm Aislamiento de compuestos

Cromatografa Fase Fase Mvil Compuestos a

Estacionaria separar

Fase normal Silica Gel No polar-> No polares->

(polar) Polaridad Media Polaridad Media
(Hexano/AcOEt
7.3)
Fase reversa. Silica Gel C-18, Polar Polares
C-8, Ciano, fenil (MeOH/H2O 7:3)
(no polar)
 Silica Gel fase normal y fase reversa
El Gel de Slice es polar (FASE NORMAL) es
adecuada para aislar molculas de baja o
mediana polaridad.

Pero si el gel de slice es

modificado con grupos alquilo
(generalmente C18) pierde su
polaridad (FASE REVERSA) y es
adecuada para aislar molculas
de alta polaridad.
 Extractos Acetnicos y Metanlicos de las hojas de
Calophyllum brasiliense (Quimiotipos 1 y 2).

FASE NORMAL FASE REVERSA

Hexano-/AcOEt 1.1 CHCl3 /MeOH 9.1

Amentoflavona
(A)

c. Protocatechuico
(APC)

A1 A2 M1 M2 APC A A1 A2 M1 M2 A APC
Cromatografa de exclusin molecular
(filtracin en gel)

Sephadex LH 20 en CC de
presin media
 Cromatografa de exclusin molecular
(Filtracin en Gel, Size Exclusion Chromatography)
Fodin y Porath
descubren (1958)
que usando
como fase
estacionaria
geles se puede
separar
polmeros
sintticos de alto
peso molecular
Sephadex

Sephadex LH20
El sephadex es modificado (grupos
hidroxipropil) para darle un carcter
lipoflico e hidrofbico.
til con compuestos de pm< 4000 y
compuestos polares.
Cadenas de polidextranas se unen
al hacerlas reaccionar con epiclorohidrina,
HPLC: HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY
Cromatografa Lquida deAlta Resolucin
METODOLOGIA DEL ESTUDIO FITOQUMICO
Colecta de Zephyranthes fosteri en la REPSA, UNAM, 2010
Ejemplares de herbario.
 Extraccin

Bulbo (B) Parte area (PA) Macerado en MeOH Concentracin en

Secado y triturado en molino. Rotavapor

Cmara de vaco Extracto MeOH

 Tabla de rendimientos de Z. fosteri

planta.
Rendimiento: Cantidad de extracto (%) que se obtiene por cierto peso seco de la
 Cromatografa en columna
Fase Mvil: Hexano-Acetato de Etilo-Metanol, 249 Fracciones.

1. Observacin a UV
onda larga 365 nm

2. Observacin a UV
onda corta 254 nm

3. Revelado con Reactivo

(Dragendorf para
alcaloides)
 Cromatografa de Capa Fina (CCF)

Cromatofolios de Aplicacin de
Slica Gel de .25mm 5ml de extracto. Establecimiento de la fase
de espesor. mvil.
Mezcla de disolventes.

Dragendorff
para alcaloides
Radiacin UV
254, 365 nm.
Sulfato crico
 Cromatografa en columna
Hexano-Acetato de Etilo-Metanol, 249 Fracciones
IDENTIFICACION
DE COMPUESTOS
ORGNICOS.

MTODOS FSICOS
 IDENTIFICACION DE COMPUESTOS
ORGANICOS
1.- Mtodos Qumicos:
Determinacin de grupos funcionales por reacciones
coloridas o de solubilidad. Ej: Aldehidos: prueba de Tollens
(espejo de plata), prueba de Lucas para alcoholes 1arios,
2arios, 3arios.
Anlisis Elemental: Combustion de 1 compuesto orgnico
en presencia de CuO. El CO2 es cuantificado (KOH), as
como el H2O

2.- Mtodos Fsicos

Punto de fusin
Punto de ebullicin
Rotacin ptica []D 20

3.- Mtodos Instrumentales

 Punto de Fusin
Fisher-Johns apparatus

Cada compuesto cristalino puro

posee un punto de fusin particular,
por ejemplo Dolineona 233-235 C.
Rotacin ptica: ngulo con el cual un
compuesto desva la luz polarizada (0 a 360).
Ej: [] = +40, o bien [] = -40 para el enantiomero.

La rotacin ptica se mide con un polarmetro que consta de una

fuente de luz, un polarizador del que sale luz oscilando en un
nico plano, la cubeta que contiene el compuesto y un analizador
que permite medir la rotacin de la luz.
Rotacin ptica observada y especfica

La rotacin medida en el polarmetro se llama rotacin ptica obser-

vada y se representa por . Su valor depende de numerosas varia-
bles como temperatura, longitud de onda, concentracin, disolvente
y tipo de sustancia. Para evitar estas dependencias se define la rota-
cin ptica especfica. La ROE es particular para cada compuesto
con actividad ptica.