Enzimas

Historia
• 1700s estudios en la digestión de carne
• 1800s conversión del almidón en azúcar por la saliva y
extractos de plantas
• 1850s Louis Pasteur la fermentación, del azúcar hasta
alcohol es catalizado por fermentos
• 1897 Eduard Buchner fermentación es promovida por
moléculas. Frederick W. Kuhne llamó a estas moléculas
ENZIMAS.
• 1962 Cristalización de la ureasa James Sumner
¿Qué es una enzima?
• Es un tipo de proteína que actúa como catalizador de
reacciones químicas.
• Incrementa la velocidad de reacción sin cambiar el
punto de equilibrio.
• Como catalizador:
– Es específico para cada reacción. No necesariamente
para un solo sustrato, aunque muchas enzimas lo son.
– Tiene gran poder catalítico, transformando hasta 103 a
104 moléculas por segundo.
– Está sujeto a diversos mecanismos de regulación de
modo tal que no genere más producto que el necesario.
 ¿Qué hace un catalizador?
• Reduce la barrera de energía para una reacción
por lo que más moléculas alcanzan la energía de
transición. No tiene efecto sobre la posición de
equilibrio
¿Como lo hace?
• Forzando la molécula a
un estado intermediario
que se parece al de
transición pero de
menor energía.
• Puede reunir dos
moléculas reactivas en
la orientación adecuada,
aumentando su
reactividad
• Orienta partes de la
molécula de forma
adecuada para alcanzar
la transición.
 Modelos de actividad Enzimática

• Enzima y sustrato se unen a través de un sitio activo. Este

es una hendidura en la proteína, rodeada de cadenas
laterales de aminoácidos que se unen al sustrato y de
otras cadenas laterales que intervienen en la catálisis. El
ajuste es muy estrecho por lo que explica la especificidad.
• Modelo cerradura-llave: explica la especificidad, pero no
la catálisis. Emil Fischer
• Modelo de ajuste inducido: la enzima no acepta
simplemente el sustrato, sino que exige que este se
distorsione a algo cercano al estado de transición.
Modelos de actividad Enzimática
 Importante
•Todas las enzimas son proteínas con excepción de un pequeño
grupo de moléculas catalíticas de RNA
•Se conocen mas de 3000 enzimas.
•Las enzimas son catalizadores biológicos que aceleran la reacción.
Las enzimas son altamente especificas y reaccionan solo con un
sustrato para formar un producto y puede acelerar la reacción en
más de 1017.
 Importante
Las enzimas tienen un rango de magnitud de incrementar la reacción
de 5 a 17 ordenes de magnitud
 Tipos de enzimas por acción
• Enzimas extracelulares, exocelulares o
exoenzimas.- tienen acción catalítica fuera
de la célula. Ejemplo amilasa
• Enzimas intracelulares, endocelulares o
endoenzimas. Cuya acción catalítica se
limita al interior de la célula.
 Cofactores / coenzima
Algunas enzimas requieren un
componente quimico adicional
denominado cofactores.

Las coenzimas actúan como portadores

transitorios de grupos funcionales
específicos
 Cofactor / coenzima
Un cofactor o coenzima que es muy relacionado o se
enlaza covalentemente a una proteína enzimática es
llamada grupo prostético.

La enzima activa o completa es llamada holoenzima

La Parte proteica (sin cofactor y/o coenzima): apoenzima
o apoproteina
 Clasificación de las Enzimas
Clase de enzima Tipo de reacción catalizada
Reacciones que transfieren electrones de un sustrato
Oxidoreductasas a otro.Óxido reducción
Transfieren un grupo funcional de una molécula a otra.
Transferasas Grupos como metilos, acilos, fosfatos etc
Rompen enlaces entre carbonos u otras moléculas
Hidrolasas con la adición de una molécula de agua.
Rompen enlaces C-C, C-S, C-N sin el ingreso de una
Liasas molécula de agua.
Transforman un isómero en otro transfiriendo un grupo
Isomerasas funcional de una posición a otra.
Forman enlaces C-C, C-N, C-O y C-S uniendo dos
Ligasas moléculas con gasto de energía.
 Clase 1: OXIDORREDUCTASAS
Catalizan reacciones de transferencia de hidrógeno (H) o
electrones (e-) de un sustrato a otro
AH2 + B ⇄ A + BH2

Ared + Box ⇄ Aox + Bred

 Clase 2: TRANSFERASAS
Catalizan la transferencia de un grupo químico (distinto del
hidrógeno) de un sustrato a otro

A-B + C ⇄ A + C-B
 Clase 3: HIDROLASAS
Catalizan las reacciones de hidrólisis

A-B + H2O ⇄ AH + B-OH

 Clase 4: LIASAS
Catalizan reacciones de ruptura o unión de sustratos

A-B ⇄ A + B
 Clase 5: ISOMERASAS
Catalizan la interconversión de isómeros

A ⇄ B

Fosfoglucosa isomerasa
EC 5.
 Clase 6: LIGASAS
Catalizan la unión de dos sustratos con hidrólisis simultánea
de un nucleótido trifosfato (ATP, GTP, etc.)

A + B + XTP ⇄ A-B + XDP + Pi

Especificidad y sitio activo
• Las reacciones se inician
cuando el sustrato se une al
sitio activo de la enzima.
• El sitio activo es una porción sustrato
espacial de la enzima creada enzima
por la coincidencia de varias
cadenas laterales de amino-
ácidos específicos. Estos
pueden no estar en
secuencia, pero los dobleces
de la proteína enzimática los
aproximan.

productos
enzima
Localización enzimática
• Las enzimas ejercen su
Na/K ATPasa
función predominantemente
membrana en el interior celular. Mas
Retículo endoplasma
aún lo hacen en determinado
Glucosa 6 fosfatasa organelo de la célula.
• Las enzimas que se
encuentran en el plasma o
líquidos diversos
corresponden a aquellas que
se están eliminando y muy
pocas como la LCAT (Lecitina
colesterol acil transferasa),
LLP (Lipasa lipoproteica),
ejercen su función a nivel
Alfa manosidasa
plasmático.
Complejo Golgi Catalasa
Succinato deshidro-
Peroxisoma
genasa.Citocromo oxidasa
Mitocondria
 Factores que modifican la reacción
enzimática

• La velocidad de una reacción mediada por

enzimas está influenciada por:

– Temperatura del medio

– El pH del medio
– Concentración de la enzima
– Concentración del sustrato
Temperatura

• No existe actividad enzimática a -273°C

o cero absoluto.
• A partir de esa temperatura los incre-
mentos provocan mayor actividad enzi-
mática. La que se expresa como coefi-

actividad
ciente de temperatura o Q10. Esto es, el
incremento de actividad por cada 10°C
de aumento de temperatura.
• En términos generales Q10 = 2, es decir
que por cada 10°C de temperatura la
velocidad se dobla.
• Existe una temperatura óptima tras la
cual los aumentos provocan
desnaturalización de la proteína
0 70
enzimática y pérdida de la actividad. temperatura
• Cada enzima tiene un pH
óptimo de trabajo, el cuál es
variable. Las enzimas intra-
pH
celulares trabajan entre 5 y 9 ,
las enzimas digestivas pueden
trabajar en pH diferentes.

• Los extremos de pH afectan la

ionización de los centros
activos (-COO- (glutamico,
aspartico) NH3+ (arginina,
lisina,histidina) SH (Cisteina,
metionina)).

0 14
pH

Enzima YXHH  Enzima YX H  Enzima YX

pH ácido (inac) pH óptimo (activo) pH alcalino (inac)
Concentración de la enzima y
constante de equilibrio
• La concentración de la enzima incrementa la velocidad de la
reacción, pero no modifica la constante de equilibrio.
• Así, si la reacción se produce en ausencia de la enzima...
K1
SP
K 1
• La constante de equilibrio será: K1 ( P )
Keq  
K  1 (S )
• Y, si la reacción se produce en presencia de la enzima...
K1
Enz  S  Enz  P
K 1

• La constante de equilibrio será:

Keq  K1
K 1  ( Enz)( P )
( Enz)( S )  ( P)
(S )
 Cinética química: cinética enzimática

• Las reacciones químicas son:

– De primer orden si son dependientes de la concentración de
sustrato
– De orden cero si son independientes de la concentración de
sustrato
• La cinética enzimática estudia la velocidad de las
reacciones catalizadas por enzimas, manteniendo
condiciones óptimas en la mayoría de factores: pH
temp, tiempo, concent.de enzima, conc. De sustrato etc
Cinética enzimática.....
 Concentración del sustrato
• Si se aumenta la concentración
del sustrato, manteniendo cons-
tante las demás variables, la
Vmax
velocidad inicial de reacción (Vi)
aumenta hasta un valor máximo
(Vmax) el que se estabiliza. Vmax/2
• Se dice bajo estas condiciones
que la enzima está saturada con
el sustrato. Esto se produce de
Km.
acuerdo a la afinidad enzima S
sustrato.
Primer Orden
orden cero
Leonor Michelis y Maud Menten (1913)
 Ecuación de Michaelis Menten
• La relación entre velocidad de reacción y concentración de
sustrato se describe en la fórmula:

v Vmax[ S ]
Km [ S ]
• Bajo estas condiciones Vmax se observa cuando todos los sitios activos
están llenos de sustrato. Toda la enzima está bajo la forma de [ES] y la
Km se define como concentración de sustrato a Vmax/2
• Vmax: es un índice de la eficiencia de una enzima. Es la velocidad cuando
todos los sitios activos están saturados, y es proporcional a la
concentración de la enzima. Sus unidades son unidades de velocidad.
• Km: es una medida inversa de la afinidad de la enzima por el sustrato.
Una baja Km indica alta afinidad entre enzima y sustrato. Las unidades de
Km son unidades de concentración.
 Km: expresión de afinidad

Vmax

Vmax/2

Km. Km Glucoquinasa
(hígado) S
Hexoquinasa
(cerebro)
La aplicación de la ecuación de
Michaelis Menten se basa en...
K1 K3
E  S  ES  E  P
K2 K4

• La concentración de sustrato es tan grande con respecto a la de

enzima, que la formación de ES no altera significativamente la
concentración de sustrato.
• Al inicio de la reacción la concentración del producto es tan
insignificante que la velocidad descrita como k4 puede ser
ignorada.
• La velocidad de transformación de ES en E+P(k3) es el factor
limitante de la reacción.
• La formación de ES es rápida y reversible y es igual a la velocidad
de desaparición de ES.
 Reacciones de multisustrato
• Captación indistinta..Cada sustrato será captado en
su momento, generalmente uno es preferente:

• Hexoquinasa, glucosa? Galactosa?

 Reacciones de multisustrato
• Captación ordenada de sustratos… para unir
un sustrato debe unirse otro primero

• Reacciones de oxidorreducción co-

catalizadas por NAD
 Reacciones de multisustrato
• Mecanismo ping-pong … cuando existe una secuencia
catalítica. La enzima se modifica por persistencia de un
fragmento del primer sustrato.

• Enzimas proteolíticas
 Gráfica de Lineweaver Burk
• La gráfica de Lineweaver
Burk es usada para obtener
Vmax y Km.
• Se usa la inversa de la ecua- 1/v
ción de Michaelis Menten.
1 km 1 1
 . 
v Vmax [ S ] Vmax
• Cuando 1/v se grafica frente a 1/Vmax
1/s se obtiene una recta,
donde la pendiente es
Km/Vmax. -1/Km 1/[S]
• La intersección en el eje de y
es igual a 1/Vmax y la del eje
de x es igual a 1/Km.
 Inhibidores competitivos
• Estructuras semejantes al sustrato que compiten con él por el mismo
centro activo.
• Sus efectos pueden revertirse si se incrementa la concentración del
sustrato hasta ocupar todos los centros activos.
• La Vmax no cambia, pero si el Km porque se
necesita más sustrato.
1/V

v inhibidor

1/Vmax

[S] -1/Km 1/[S]

Inhibidores competitivos
 Inhibidores no competitivos
• Estructuras diferentes al sustrato por lo que se unen a un sitio indepen-
diente de la enzima.
• Ambos, sustrato e inhibidor pueden unirse a la enzima al mismo tiem-
po. Su efecto no puede revertirse aumentando la concentración del
sustrato.
• No tiene efecto sobre la Km pero sí sobre la Vmax.

1/V

V
inhibidor
1/Vmax

[S] -1/Km 1/[S]

Inhibición
no competitiva
 Inhibidores irreversibles
• Reaccionan covalentemente con la cadena lateral de un aminoácido
de la enzima, para formar un complejo estable permanentemente
inactivado.
• Se les llama también substratos suicidas.
• Su efecto es igual al de un inhibidor no competitivo.
Efecto clínico de los Inhibidores
Droga Uso terapéutico Enzima afectada Tipo de inhibidor
Lovastatina Hipercolesterolemia HMGCoA reductasa Competitiva
5-fluouracil Cáncer Timidilato sintetasa Irreversible
Metrotexate Cáncer Dihidrofolato reductasa Competitiva
Alopurinol Gota Xantino oxidasa Irreversible
Cumadin Anticoagulante Glutamil carboxilasa Competitiva
Aspirina Antiinflamatorio Ciclooxigenasa Irreversible
Captopril Hipertensión art. Enz.convert.angiotensina Competitiva
 Papel Clínico de las Enzimas
• Si bien es cierto las enzimas cumplen su actividad en
el interior celular, es posible encontrarlas en los
líquidos biológicos con cierta frecuencia.
• Todas las enzimas plasmáticas, las del LCR o
Pleural se encuentran en bajos niveles de
concentración –actividad- provenientes de los tejidos
ricos en ellas y generalmente de paso a un proceso de
destrucción hepática o eliminación renal.
• Únicamente algunas enzimas como las del
metabolismo de lípidos (LCAT, LLP) o los factores
de coagulación ejercen su actividad en el plasma o
suero.
 Elevación enzimática en el
plasma...
• La actividad enzimática en el plasma y otros líquidos biológicos
se produce por:
– Necrosis: destrucción celular y vaciamiento de las enzimas
como en el infarto de miocardio, hepatitis viral.
– Permeabilidad: aumento de permeabilidad de membrana
igual a necrosis.
– Sobre producción: mayor metabolismo en un tejido
-neoplasia-.
– Menor eliminación: no se elimina normalmente
-obstrucción biliar-.
– Incremento de células inflamatorias: en líquidos como
Pleural los exudados se acompañan de aumento de actividad
enzimática.
 Origen de las enzimas
en el plasma

Enzimas Ejemplos
Protrombina, plasminógeno,ceruloplasmina,
Específicas del plasma Lipasa Lipoproteica,colinoesterasa

Secretadas Amilasas, fosfatasa prostática, pepsinógeno

Láctico deshidrogenasa, aldolasa, aspartato y
Del metabolismo celular alanina transferasa.
Uso de Enzimas en el diagnóstico
Clínico
Uso de Enzimas en el diagnóstico
Clínico
Uso de Enzimas en el diagnóstico
Clínico
Uso de Enzimas en el diagnóstico
Clínico
Uso de Enzimas en el diagnóstico
Clínico
 Isoenzimas
• Enzimas que realizan la misma función pero difieren en su estructura
química y propiedades cinéticas.
• Las formas isoenzimáticas distintas pueden pertenecer a distintos
tejidos revelando sus modificaciones el tejido que le dio origen.
• Generalmente son estructuras oligoméricas con varios tipos de cadenas
proteicas -dímeros o tetrámeros- .
100%
%
90%
80% Isoenzimas LDH
70%
60% LDH1
50%
40% LDH2
30% LDH3
20% LDH4
10%
0% Bazo LDH5
Pulmones
Riñón

Eritrocitos
Hígado

Músculo
Miocardio
 Dehidrogenasa láctica
• Existen cinco isoenzimas
de la deshidrogenasa láctica Isoenzima SubunidadesTejido predominante
(LDH). Cada una es un oli- LDH1 HHHH corazón
gómero con cuatro protó- LDH2 HHHM corazón
LDH3 HHMM riñón, pulmón
meros de los tipos H y M y
LDH4 HMMM hígado
tiene un PM de 34 000. LDH5 MMMM hígado
• Los protómeros se combi-
nan de manera distinta y se
originan en distintos tejidos
con preferencia. normal
• El suero tiene un contenido
representativo de todos los
tejidos. infarto
 Creatino fosfokinasa
Isoenzima Subunidades Tejido predominante
CK1 BB Cerebro
Ck2 MB Músculo cardiaco
CK3 MM Músculo esquelético
• Existen tres isoenzimas de (+)
la creatino fosfokinasa. CK1

Cada una es un dímero CK2

formado por la combina- CK3

ción de protómeros M y B.
• Cada dímero representa a
un tejido en particular. (-)
Modelo imaginario para catalizar la ruptura de una barra de metal

Moderna noción de catálisis enzimática Michael Polanyi 1921, Haldane 1930 y

elaborado finalmente por Linus Pauling 1946: La enzima debe ser complementario
al estado de transicion