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LABORATORIO Y

DIAGNÓSTICO EN
VIH

DRA. SILVIA ARREDONDO D.


MEDICO INMUNOLOGO-CLINICO
HOSPITAL REGIONAL DE TALCA
VIH

 El VIH es un virus de la familia de los lentivirus.


 Existen dos tipos de virus VIH-1 y VIH-2, que son muy
similares pero tienen diferencias genéticas.
 Se ha demostrado que son virus altamente complejos
tanto a nivel estructural como en su evolución.
 Los VIH-1 se clasifican en tres grupos distintos
(M,N,O), el más importante es el grupo M que se
subdivide en 9 subtipos de la A a la K. En América del
Norte, Central y Sudamérica predomina el grupo B.
 La variabilidad de estos virus se expresa en nuevas
formas recombinantes que pueden generar una
mayor resistencia a la TARV.
VIH
GENERALIDADES

 El diagnóstico de la infección VIH, sólo puede


establecerse mediante análisis por métodos de
laboratorio.
 Los exámenes orientados a establecer el diagnóstico
se pueden clasificar en métodos indirectos y
directos.
 Desde punto de vista del seguimiento y del
pronóstico de la infección VIH, y del SIDA, también
es necesario el apoyo del laboratorio.
 El laboratorio también es de gran utilidad en el
diagnóstico de enfermedades oportunistas que
presentan los portadores de VIH.
PRUEBAS SEROLOGICAS

 Detección de anticuerpos anti VIH-1, su


presencia reflejan estado de portación actual.
 Se realiza mediante pruebas de screening,
las que si resultan positivas luego son
confirmadas por test de mayor especificidad.
 La seropositividad se define mediante la
reactividad repetida a las pruebas de
screening (2 TEST positivos) confirmados
posteriormente con una prueba
confirmatoria.
TEST DE SCREENING Y
CONFIRMACIÓN
TEST DE SCREENING
 El método más utilizado es el
enzimoinmunoanálisis (EIA), existiendo técnicas
de primera , segunda y tercera generación
dependiendo del origen de los antígenos virales.
 Sensibilidad de las técnicas actuales alcanza un
99 %.
 Los EIA de tercera generación son los utilizados
en la actualidad por su mayor sensibilidad y
especificidad.
 Existen también pruebas de detección rápida
basadas en principios de aglutinación y las de
inmunoadherencia (dot-blot), siendo menos
especificas que las anteriores.
 En la actualidad además se dispone de kit que
permiten detectar ambos tipos de virus VIH (1 y
2).
TEST CONFIRMATORIOS
 El Western blot es el más utilizado en la confirmación de los
resultados obtenidos por screening.
 El WB, permite distinguir contra que antígenos virales se
dirigen los anticuerpos de la muestra a estudiar.
 Existen diversos criterios de positividad de acuerdo a diferentes
instituciones que los han definido, la OMS en reunión de
expertos en 1990 recomendó la presencia de al menos 2
bandas de la envoltura .El resto de los patrones se considera
indeterminado.
 Las limitaciones del WB son la complejidad de la técnica, su
alto costo, la necesidad de personal altamente especializado.
Además la variabilidad de la reactividad de las bandas
( gp160,gp120,p24, p17 y la gp41). También existe diferente
valor predictivo diagnóstico la existencia de las diferentes
bandas. Las bandas de proteínas de la envoltura son las más
especificas con bajo % de falsos (+)
CAUSAS DE WB
INDETERMINADO PARA VIH-1

 Infección por VIH-2.


 Seroconversión para el VIH-1.
 Pacientes en estadios muy avanzados
de la enfermedad.
 Niños nacidos de madres
seropositivas.
 Individuos africanos infectados.
 Reactividad inespecífica.
PRUEBAS
SUPLEMENTARIAS
 Inmunoanálisis de tipo lineal (LIA).
 RIPA.
 Antigenemia (medición de p24), que
permite el diagnóstico durante la
primoinfección, en hijos de madres VIH(+),
monitorización de respuesta a TARV en
algunos portadores, identificación de
individuos seropositivos con elevada
infectividad.
 Cultivo viral.
 PCR (detección de ácidos nucleicos ).
CAUSAS DE PCR (+) EN
INDIVIDUOS SERONEGATIVOS
PARA VIH
 Período de ventana antes de la seroconversión.
 Contaminación de laboratorio.
 Secuencias exógenos de tipo retroviral.
 Secuencias endógenas retrovirales o no.
 Hipogamaglobulinemia.
 Infección por virus defectivos o incompletos.
 Infecciones por variantes poco o no
replicativas.
 Serorreversión por disfunciones en el sistema
inmunitario.
CAUSAS DE PCR (-) EN
INDIVIDUOS
SEROPOSITIVOS PARA EL
VIH
 Transmisión pasiva ( materno-fetal,
transfusiones, etc.)
 Mutaciones críticas en la región analizada.
 Presencia errática de la secuencia estudiada.
 Baja sensibilidad de la prueba.
 Error técnico.
 Anticuerpos con reactividad cruzada en
pacientes con LES, FQ, post vacuna
antiinfluenza (sólo en estos casos no hay
infección VIH).
ALGORITMO DE DIAGNÓSTICO DE
INFECCIÓN VIH EN INDIVIDUOS SIN
RIESGO
ALGORITMO DE DIAGNÓSTICO DE
INFECCIÓN VIH EN INDIVIDUOS CON
RIESGO
EL LABORATORIO EN EL
SEGUIMIENTO Y PRÓNOSTICO DE LA
INFECCIÓN VIH

 Existen exámenes específicos para


establecer el pronóstico y clasificación de
los pacientes VIH (+), (Carga viral y
recuento de LTCD4(+)) y otros que se
solicitan en la primera consulta que serán
de utilidad en el seguimiento del paciente
y de las enfermedades oportunistas que
puedan aparecer (que se listan a
continuación)
 Los exámenes generales nos permiten
conocer la situación basal del paciente en
relación a otras infecciones latentes,
dislipidemias, alteraciones metabólicas,
cáncer, etc..
PRUEBAS COMPLEMENTARIAS QUE
DEBEN REALIZARSE A PACIENTES
VIH(+)
HEMOGRAMA Y VHS SI 3-6 MESES 2 A 3 MESES
PERFIL BIOQUIMICO SI 3 A 6 MESES 2ª 3 MESES
PERFIL LIPIDICO SI 3 A 6 MESES 2 A 3 MESES
ACIDO ÚRICO SI 3 A 6 MESE 2 A 3 MESES
AMILASA Y LIPASA SI 3 A 6 MESES 2 A 3 MESES
ORINA COMPLETA SI 3 A 6 MESES 2 A 3 MESES
RX TORAX SI SP SP
ECG SI SP SP
PPD IDEAL SI SP SP
SER. VIRUS HEPATITIS B Y C SI NO NO
SER. TOXOPLASMA GONDII SI SP SP
SER. CMV. SI SP SP
VDRL SI SP SP
PSD SI SP SP
COPROCULTIVO SI SP SP
LT CD4(+) SI 3-6 MESES 2-3 MESES
CARGA VIRAL VIH SI 3-6 MESES 2-3 MESES
LT CD4 (+)

 La cifra de LTCD4(+) de sangre periférica


corresponde aproximadamente a un 2% de los LT
CD4 (+) totales.
 Varían durante el día, y día a día, la variabilidad
usando métodos automatizados es de un 2 a 5 %.
 Se utiliza actualmente para su determinación la
citometría de flujo (FACS).
 Los errores se originan por la demora en el
procesamiento y tienden a aumentar por unión
inespecífica de los anticuerpos en las muestras
congeladas.
 Se requieren a lo menos 2 determinaciones de
LTCD4(+) si se debe tomar una decisión terapéutica
en los portadores y para su clasificación.
SITUACIONES QUE ORIGINAN
ALTERACIÓN EN LOS LTCD4(+)

 Ejercicio intenso: ↓ LTCD4(+).


 Variaciones diurnas: aumenta en 50-150 células en
el día.
 Tabaquismo: ↓ por efecto de la nicotina.
 Corticoides: ↓ linfocitos totales y CD4(+).
 Bazo: aumenta en pacientes esplenectomizados,
en los cirróticos con hipertensión portal disminuyen.
 En las mujeres embarazadas disminuyen los
LTCD4(+) en el tercer trimestre.
 En los procesos inflamatorios agudos sean o no
infecciosos disminuyen los CD4(+).
CARGA VIRAL

 Consiste en la detección por medio de la amplificación


de las secuencias de ácidos nucleicos del ARN del VIH.
 Se logra su detección gracias al avance que ha
experimentado la biología molecular.
 Su detección ha permitido demostrar la modificación
que realiza la TARV sobre la historia natural de la
infección VIH.
 Depende del método empleado y la capacidad de
detectar mínimas cantidades de ARN del virus.
 Se expresa en copias de ARNv /ml .
 Posee las principales características se un buen
marcados de laboratorio: Sensibilidad, especificidad,
valor predictivo positivo y negativo y reproducibilidad.
PROPIEDADES DE LA CARGA
VIRAL
 La CV plasmática es la resultante del equilibrio
dinámico entre los distintos compartimientos
virales.
 El descenso de la CV luego del inicio de la TARV
consta de tres fases ( LTCD4(+) infectados
productivos), (macrófagos tisulares, y otros
reservorios del virus)(incierto).
 Son reproducibles.
 No existe equivalencia directa entre los
diferentes métodos utilizados comercialmente.
INDICACIONES CLINICAS Y USO
DE CV
INDICACIÓN CLÍNICA INFORMACIÓN USO
SD. Compatible con Establece el diagnóstico Diagnóstico
infección aguda VIH cuando la prueba de
anticuerpos es negativa
o indeterminada
Valoración inicial de una CV basal Apoya decisión en
infección VIH conjunto con CD4(+) de
recientemente iniciar o no tratamiento
diagnosticada
Control de pacientes Cambios de la carga ídem
VIH(+) sin TARV viral
Luego de 4 semanas del Valoración inicial de Decisión de continuar o
inicio o cambio de TARV eficacia de TARV cambiar esquema
Control c/3-4 meses en Duración del efecto Decisión de continuar o
pacientes con TARV antiretroviral cambiar TARV
Acontecimientos clínicos Asociación con CV ídem
o disminución variable o inestable
significativa de LTCD4(+)

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