CCaarraacctteerriizzaacclióónn ffeennoot.

íppíiccaa, , moolleeccuullaarr
yy ppaattoolóéggilccaa
ddee CCoollleettoottrriicchhuumm aaccuuttaattuum m aassoociaa
AAdndnada ccoonn llaa
aanttrraaccnnoossisisd ddeell cchhoocchoo yy ttoom maattee
ddee áárrbbooll eenn llooss
IV Congreso Mundial de la
ees
s eeccuuaattoorri aannooss
Quinua
I Simposio Mundial de Granos A
ndinos

7 de julio de
CCééssaarr EE.. FFaallccoonnii..2013
,, Rsssseerr.., AA..W
W.. vvaann H
R..GG..FF. .VVii Heeuussddeenn

- WAG EN IN GEN 1ij9i

Far qua//ty af lifr!
~=============1~\ •iiiií"
~UUA ,~écNOCA~< UiOC~
CAMINO A LA
EXCELENCIA
El chocho (Lupinus muta Ventajas
bilis)
Leguminosa na,va Andina que ha sido cul,vada
localmente por agricultores desde an,guas civilizacio
nes

Cul,vo estratégico que contribuye a reducir cambio

climá,co

Fija su propio nitrógeno, como otras legumi

nosas

Previene la erosion del suelo debido a su sistema

radicular

Importante en varios sistemas de produ

cción
en la zona andina ecuatoriana
 Ventajas
El chocho (L. muta
bilis)

Actualmente, importante fuente

en
la nutrición humana y animal

Semillas con,nen alto contenido

de
proteina (40 a 50%)
grasas no saturadas (15 a 23
%),
hierro y vitaminas
 Desventajas del choc
ho

Producción promedio a nivel nacional es solo 220kg/h

a.
La baja producción se debe principalmente a que el c
hocho es
suscep,ble a enfermedades

Enfermedad más devastadora …. antracnosis

 Antracnosis del choc
ho

Típica Lesiones Afecta Lesiones en

torcedura severamente
del tall severas en a la semi vainas
o lla
principal los tallo (producción)
s
Diversidad de cul,vos en Ecua
dor
Debido a su diversidad cultural y cl
imá,ca, Ecuador ha sido bendecido
con una amplio rango de frutas y
vegetables

Ecuador es uno de los 17 países

mas “megadiversos” en el mundo.
En Ecuador existen alrededor de
25,000 species de plantas vascular
es (10 % del total mundial) (Wor
ld Wildlife Fund 2012)
El tomate de árbol (Solanum bet
aceum)

Arbusto leñoso de 2--

‐3m de altura

Crece entre 16--

‐24oC,
entre 1000--
‐3000 m.s.n.m.
Cualidades nutricionales, fibr
a,
vitaminas, reduce el coleste
rol

Producto de exportació
n

Antracnosis enfermedad

devastadora
 Antracnosis del tomate de á
rbol

Pudrición Marchas y Pudrición “ojo de

brotes lesiones en de frutos pollo”

hojas
 La antracnosis en varios cu
l,vos

• Raíz,
• Ramas
EL PATÓGENO
• Hojas

• Flores

• Frutos
• Pudrición de la cor
ona
SINTOMAS • Defoliación,
• Tizón de capullos
• Podredumbre de la
fruta
• Más de una
especie de
ENFERMEDAD Colletotrichum

está asociad
o
con un úni
co
hospedero
 Iden,ficación tradicional de la espec
ie de
Colletotrichum basada en rango de hosp
ederos

Fru,lla

Mango

Maracuyá Tomate de riñó

n

Papaya
Pimiento
Iden,ficación tradicional de especies de Colletot
richum

MORFOLOGIA DE
LA
COLONIA
GRIS-‐ CARMIN-
ROSA ‐
ROJO

A2 A4 A3 A5
Iden,ficación tradicional de especies de Colletot
richum
Forma de la conidia

Nirenberg et al., 2
002
A la causa de la antracnosis del chocho y tomate
de árbol en la
zona andina se la reporta tradicionalment
e como

Colletotrichum gloeosp
orioides

A la causa de la antracnosis del chocho en Europa

y Australia se
la conoce co
mo
Colletotrichum
lupini
Los marcadores moleculares iden,fican con precisión
el agente
causal y clarifican relaciones taxonómicas entre
especies
MARCADORES
MOLECULARES

rDNA-- Tub2 AP--

‐ITS ‐PCR

Espaciadores de
Proteína globular (mi Regiones en tandem
transcripción interna cro en
túbulos de células el ADN
eucariotas)

Sistemá,ca molecular Mediante PCR Iden,fica

Compara entre
a polimorfismos (individuos
nivel de especies(raz organismos diferent gené,camente relacionados
a es )
geográfica) y miembros de u
na
especie
Estudios de rango de hospederos permiten cla
rificar la
especificidad del patógeno con el h
ospedero
 Obje,vos

(i) Determinar el agente causal de la antracnosis del cho

cho y tomate
de árbol en Ecuador,

(ii) Analizar aislamientos de Colletotrichum de chocho y

tomate de
árbol en base a sus secuencias ITS,

(iii) Evaluar la variabilidad patogénica y potencial rango de

hospederos
 Métodos

Color de la
colonia
Caracterís,cas
morfológicas
Forma y tama
ño
de la espora

Sensibilidad a
benomil

Estudios
Crecimiento
fisiológicos
miceliar a
diferentes r
angos de
temperatura
 Métodos

Primers
específicos
Estudios
CaInt2; CgInt2
moleculares

Secuenciación
ITS1-‐5.8S--
‐ITS2

Chocho EC
U--
‐2658 ECU-
Rango de ‐7112--
hospederos ‐1 ECU--
‐722-‐4
Tomate de árb
ol Gigante Co
mún
Común
 Resultados
Caracterís,cas morfológicas de la antracnosis del chocho (y tomat
e de árbol)

Color de la colo
nia varía de pál A B C

ido a gris--
‐oliva

A B C
Forma de las esporas
varía de cilíndrica con
bordes redondeados a
un lado ausado y el
otro redondeado D E F

D E F

Caracteres morfológicos solo deben usarse en iden,ficaciones pre

 RReessuullttaad
dooss
CCrreecciim
mieienntoto rraaddiiaall ddee CC.. aaccuuttaattuum
m ddee cchhoocchhoo yy tt
oom
maattee ddee áárrbbooll aa 1155-‐-2255CC,, mmeerrss eessppeeccí
sseennssiibbiilliiddaadd aall bbeennoommiill yyífificrcreoeoasac
s ccciióónn aa pprri
Table 2. Cumulative mycelial radial growth of Colletotrichum isolates from LI1pi11us mutobilis and Solanum betaceum incubated ar -5ºC for 5 days
potato dexirose agar (PDA) in Lhe dark, relative sensitivuy in PDA
on with benornyl, and polymerase chain reaction ampli fication products using
amended
prirners Calnt2/intemal transcribed spacer ITS4) and Cglnt/lTS4
Radial growth for 5 days (mm)• Primer reactíon"
Isolate" t 5° 20º 25º 30° Benomyl sensitivity" alnl2 glnt
Lupl 40.1 41.7 48.6 28.3 + +
Lup4 45.4 45.4 44.0 23.5 + +
Lup14 41.2 36.3 54.4 24.7 + +
Lupl6 39.4 37.0 59.3 30.0 + +
Lup18 44.0 44.0 60.6 36.2 + +
Lup28 44.8 44.3 49.9 19.2 + +
Tam6 47.7 35.6 64.8 20.8 + +
Tam7 51.7 48.5 64.6 23.9 + +
Tam20 45.4 43.5 60.0 20.8 + +
IMI 356878 24.5 40.2 64.5 28.2 +
LSD 1.02 0.46 0.13 0.34
CV 2.07 0.97 0.20 1.18
~ growih of isolates on PDA al selected temperatures in the dark was measured using colonies initiated from 15-µJ droplet of I x 106 conidia
Radial
Each isolate had three replications, four rneasurernents per replicate, and final máximum growth up lo 5 days.m1-1.
b Taxon-speci fic primers Calnt2 (Colletotrichum acutatumt. and Cglnt (C. gloeosporioidess were coupled with primer ITS4 for species identification:

a positive (+) or negative (-) reaction with fungal DNA of each isolate is designated.
e Reference isolate LMI 356878 (AJ536229.I) (C. gloeosporioidesy from olive (Olea europaea subsp. europoeas was included. LSD = least
significant
difference and CV = coefficient of variation.
d Benomyl sensilivity of the isolates was assessed by comparing colony radius on PDA and PDA amendcd with benomyl (Bcnlate 50WP. DuPont) at
2 mg liter'": growlh (+) or non-growth (-) myce'lial reaction is indicated.
 Resultados
Sensibilidad a benomyl y caracterización mol
ecular

Isolate Benomyl Primer reacXon Species

sensitivity CaInt2 CgInt
test
Lup 1 + + - acu
C. acutatum
Lup 4 + + - C. acutatum
Tam 6 + + - C. acutatum
Tam 7 + + - C. acutatum
Lup 14 + + - C. acutatum
Lup 16 + + - C. acutatum
Lup 18 + + - C. acutatum
Tam 20 + + - C. acutatum
Lup 28 + + - C. acutatum
IMI 356878 - - + C. gloeosporioid
C. gloeosporioid es

C. acutatum es el agente causal de la antracnosis del chocho (y

tomate de árbol)
y no C. gloeosporioides, u,lilizando primers específicos y sensibilidad
a benomil
Esta información es nueva y válida para un a
decuado
manejo de la antracnosis en Ecuador
RReellaacciióónn fifil ooggeennéét,iccaa eennttrree llaa aannttrraaccnnoossisis ddeell cchhoocchhoo
yy ddeell ttoom maattee ddee áárrbbool
Table 4. lntemal lranscribcd spacer I and 2 sequcnces of Colletotrichumisolaíes used in
this study
lsolate code El\IBL accessíon Detennination by the authors as Host
BBA 70343 PO AJ3019 Colletotrichum Primula Lupinas sp. The
93/1373 15 acutatum" Lupinaspolyphyll11S ctherlands The
BBA 70344 PO 93/I- AJ3019 C. lupini var, hybrid etherlands
B6 16 setosunr C. lupini L mutabilis Gcnnany
BBA 700:>73 AJ3019 var, setosum• C. Bolivia
La/bus
BBA 63879 27 lupini var, lupini'- L angustifolius Ukmine
BBA 70884 AJ30193 C. lupini var, L mutabilis Portuga
AJ3113
0.I C.
lupin;a La/bus l
91
AJ3019 acutatum"
Colletotrichum sp. La/bus Portuga
48 C.
b Colletotrichum
Olea europaea subsp. l
AB00-59 acutat1111'
sp," europaea Canada
AJ30056 > O. europoea subsp.
europaea Portuga
3 C. l
Lupl O. europaea subsp.
acutatum: Portuga
Tam AJ3005- europaea
C. O. europaea subsp. lEcuado
T
6 am7 JN543070
8
C. S.
Lupl2 ac111at111 europaea Portuga
í ac111at111 betaceum r
Lup1 AJ74967 rf L mutabilis l
11
C/omerella
4 4 Solanum betaceum Portuga
Lup1 AJ74967 acutattr l
9 C. acutata' L mutabilis
6 C. ac111a111111 Portuga
Lupl8 AM9911 L mutabilis
31 C. acutatum l
Tam2 L mutabilis Ecuado
0 AM9911 L mutabilis
37 C. acutatum r
Lup21 JN54305< C.
S. betaceum Ecuado
Lup24 J1 543Q68 L mutabilis r
Lup2 f
AF52120 ac111a1111
J:- L mutabilis
8 AF5212I
5.154306< n S. Colombia
C. acutatum
L mutabilis Ecuador
Lup3
34503 O betaceum
L mutabilis Australia
1 C. Ecuador
40 AJ53620 L mutabilis haly
Ecuador
Lup31
35687 7JN543060 ac111at111 United
n S. Ecuador
34776
8 AJ53623
AJ53622 C. Banglades
States
betaceum
34504
5 í1
9JN543061 C.
falcat1mrh hEcuador
Australia
7
20127 GUl8332 ac111a1111
C. Ecuador
Australia
AJ53622 Fragariax ananassa Ecuador
28761 30r C.
n
Jioriniaei Fragaria x ananassa Australia
24191 JN543062
GUl8333 simmondsié
C. Jiori Ecuador
Australia
Fragariax ananassa Ecuador
28420 3r ac111a1111
niaei Fragariax ananassa Australia
52657 JN543063
GUl8332 n Ecuador
r2 C. Perseo americana Colombi
C. acutatum Mangifera indica
GUl8332
JN543071 simmondsié
C. acutatum a
7r Actinia chinensis
Colletotrichum
C.
 RReellaacciióónn fifil ooggeennéét,iccaa eennttrree llaa aannttrraaccnnoossisis ddeell cchhoocchhoo
yy ddeell ttoom maattee ddee áárrbbool

En base a secuencias I
TS la
población de patógeno
del
chocho de Ecuador
es
diferente de otra
spoblaciones alrededor d
el
mundo

Group IV

e ,::-.,ar=.->.:30l;1sP:-i:=!~?-.11- ...-14'".~, JG,oupV

5 Colt~t~tri:l".~ :s:;, •.>...:300553 L
:r..:.ra.bili!..P..:)!'r..:.p..l

,------------C
,- Z.1:.,¡n=A.:53t!31 Fng.uii.Xi::"....¡:"..i.i.N..3a.:::gli.?-~.
Similitud cercana de
aislamientos de
C. acutatum de chocho
~-------------------------------------Xt--:l.1osponcra.1-Y~13;-D:S
con
H
0.005 los de tomate de árbol
RReellaacciióónn fifillooggeennééti,ccaa eennttrree llaa aannttrraaccnnoossisis ddeel cchhonrchhoo yy
ddeell ttoom maattee ddee áárrbbooll ..,( ...... ,,u1n1, .. ._

... -,• ..... &..IIOJliM I-t ¡¡¡¡,

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b,i=iu,ed dm oi Calrmh:hm ~te, f.,.. Lup.nm m• 14'1'1 -d ctiie,• "IC:~ el'IIU",d lhe
\¡s;lt3 ~IJ Def'tOI": :g ~eoy:.a-gl!iema:nr...,.12'!!-ory-od -'leo -.el~;,,b- F'=.- ;r-oll"?ce.~~~ .:,Id
n.t.r.h:u~!l!z,dé.!udu!~:lblgelh:r
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mbedabsef.Dab:a!ee=cn
:u-_:efi, Pl!!'rdec Fa, ft,"eflc;e !elf~ol- • ~1.
Infección cruzada de hospederos de la antracnosis del chocho y to
mate de árbol

23 Isolates collected
Isolates collected from
from lupin
lupin Isolates
Isolates collected
collected from
from tamarillo
tamarillo

20
Mean lesion length (mm)

17

14

11
Lupin Tamarillo
Inoculated host

Aislamientos de chocho fueron patogénicos en pla

ntas de
tomate de árbol y los de tomate de árbol en
chocho
Infección cruzada de hospederos de la antracnosis del chocho y to
mate de árbol
 Conclusiones

El diámetro de la colonia, forma de la espora e insensibilidad al

benomil ubican a
los aislamientos de los dos hospederos en el grupo de C. acutat
um

Diagnós,co molecular usando primers específicos dio posi,vo para

C. acutatum

Aislamientos de C. acutatum de chocho de la zona andina fueron

dis,ntos de otros
aislamientos de C. acutatum colectados de chocho alrededor del mu
ndo
 Conclusiones

Un análisis detallado de secuencias ITS ubicó a los aislamientos del

chocho y
tomate de árbol de la zona andina de Ecuador en dos grupos co
n alta probabilidad

En los estudios de infección cruzada, algunos aislamientos produje

ron lesiones
grandes en el hospedero del cual fueron aislados, pero otros m
ostraron similar
agresividad en su hospedero alternante.

La colección de C. acutatum de chocho y tomate de árbol

proporciona un
interesante material para el estudio de adaptación cuan,ta,va al
hospedero
 AAgrraaddeecci mmiieennttooss

J:11 L AN T -a·R. E E O I N
·-·WA.G EN
C3
INGEN

l!Jm

Instituto Simón
Rodríguez -
Latacunga
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J telfun

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~UUA ,~écNOCA~< UiOC~
CAMINO A LA
EXCELENCIA

==============1~\
 IInnffoorrmmaaccióiónn aaddiicciióonnalI

Falconí, C. E., Visser, R. G. F., and van Heusden, A. W. 2013. Phe

notypic, molecular,
and pathological characteriza,on of Colletotrichum acutatum associated
with
Andean lupine and tamarillo in the Ecuadorian Andes. Plant Disease
97:819-‐827.
Falconí, C. E. 2013. Lupinus mutabilis in Ecuador with special emp
hasis on
anthracnose resiatence. PhD. Thesis. Wageningen University., The Ne
therlands.,
150 p.

DDrr.. Cé'saarr
FFaallccoonníí Saaáá
ceeffaallccoonnii(@l;
espe..edduu. ece

·==================================1~\ ~UUA ,~écNOCA~< UiOC~

•iiiií" CAMINO A LA
EXCELENCIA