Biosensores: electrodos biológicos y

genes informadores
Biorremediación
8° Semestre
Alumnos:
• Juan Andrés López Murillo
• María Guadalupe Oliva Aguilar
• Eva Yasmin Palomino Saldaña
• Claudia Elizabeth Ramírez Rodríguez
• Héctor Alejandro Ramírez Servín
 GENES
INFORMADORES
Los microorganismos, debido a su bajo costo, vida útil, y el rango
de pH y temperatura adecuados, han sido ampliamente empleados
en la construcción de biosensores. En la última década, sus
aplicaciones se han centrado principalmente en tres áreas:
• Monitoreo de la capacidad de supervivencia y competencia de
las bacterias.
• Monitoreo de colonias de raíces de plantas de bacterias
degradantes de contaminantes en muestras ambientales
complejas
• Seguimiento del nivel de contaminantes ambientales específicos
Se basan en el análisis de la expresión génica, típicamente
mediante la creación de fusiones transcripcionales entre un
promotor de interés y el gen informador. Puede servir como una
medida de la disponibilidad de los contaminantes específicos en
entornos complejos.
Layton et al. informaron de una cepa biosensor
bioluminiscentes, Ralstonia eutropha ENV307 (pUTK60), posee la
capacidad de detección de la biodisponibilidad de PCBs mediante
la inserción del promotor bifenil rio arriba de los genes de
bioluminiscencia. En presencia de bifenilo, bioluminiscencia fue
generada en una manera dependiente de la concentración.
En comparación con los métodos tradicionales de detección para la vigilancia de los
contaminantes ambientales, los biosensores de células enteras proporcionan las
siguientes ventajas:
 Biosensores determinan sólo la fracción biodisponible de los compuestos, dando así
una respuesta más precisa sobre la toxicidad de una muestra. La biodisponibilidad
es también importante para la biorremediación. Si las sustancias son
biodisponibles, son potencialmente biodegradables.
 Los biosensores proporcionan una manera barata y sencilla de determinar
contaminantes.
 A medida que son organismos vivos, que proporcionan información sobre la
toxicología de los diferentes compuestos.
 Algunos biosensores el estrés inducido informan efectos mutagénicos de las
muestras con gran sensibilidad.
 Los biosensores son sin iguales en el estudio de la expresión génica y la fisiología de
las bacterias en entornos complejos.
• El gen debe tener una expresión o actividad que se
puede medir usando un ensayo simple y debe reflejar
el nivel de cambio químico o físico.
• Varios genes informadores cumplen con los requisitos
necesarios y se utilizan con frecuencia
incluyendo GFP , lacZ , lucFF , luxAB y luxCDABE con
gfp y luxCDABE.
Biosensores encapsulantes de células enteras en polímeros
naturales o sintéticos se ha demostrado ser útiles para la detección
de contaminantes del medio ambiente. Matrices poliméricas pueden
proporcionar un entorno hidratado que contiene los nutrientes y
cofactores necesarios para la actividad celular y el
crecimiento. Además, las células encapsuladas están protegidos de
sustancias tóxicas en su entorno y mantener el aumento de la
estabilidad del plásmido.
Los siguientes parámetros de encapsulación muestran la utilidad
potencial para el desarrollo de una aplicación in situ de los
biosensores de células enteras:

• Agar / agarosa
• Carragenina
• Alginato
• Sulfonato de poliuretano-polycarbomyl (PCS)
• Poliacrilamida
• Alcohol de polivinilo
• Sol-gel
• Oxisilano o polidimetilsiloxano
 La mayoría de los sistemas de biosensores de
promotor-indicador se utiliza actualmente son el
resultado de la clonación de un promotor rio arriba de
un casete de gen informador y la posterior
transferencia del plásmido construido en cepas
específicas. Sin embargo, la pérdida de estos plásmidos
debido a la inanición y la reducción en la expresión del
gen informador debido a múltiples copias de la región
de unión a promotor en el plásmido plantea problemas
cuando estos biosensores se aplican a in
vivo situaciones. Hay pocos informes de biosensores
basados en la inserción cromosómica del gen de
promotor-indicador que producen sistemas más
estables.
 Los biosensores
electroquímicos:
Herramientas de la
analítica y del
diagnóstico clínico.
Sensores y biosensores electroquímicos
De manera general se podría definir a un sensor
químico como cualquier dispositivo miniaturizado
que fuera capaz de responder de manera
inequívoca a un analito concreto en el seno de una
muestra compleja. Consta esencialmente de dos
partes: el elemento de reconocimiento que
interactúa con el analito y concede selectividad al
sensor y el transductor que permite convertir esa
interacción en una señal analítica. Cuando el
transductor es un electrodo, el sensor será un
sensor electroquímico y cuando en el elemento de
reconocimiento intervienen especies biológicas
estaremos en presencia de un biosensor.
 Cuando el transductor es un electrodo, el sensor será un
sensor electroquímico y cuando en el elemento de
reconocimiento intervienen especies biológicas
estaremos en presencia de un biosensor.

Figura 1. Se representa el esquema de los diferentes partes de un

biosensor y su funcionamiento básico.
 La importancia del transductor, electrodos
serigrafiados:

1. La flexibilidad del diseño.

2. La automatización del proceso de producción.
3. La gran variedad de tintas de serigrafiado.
4. El proceso de producción de electrodos
serigrafiados.
Figura 2. Podemos observar las distintas partes de una tarjeta serigrafiada con un
diseño clásico de tres electrodos.
 Nanoestructuración de electrodos
serigrafiados

La nanoestructuración del electrodo de trabajo va a hacer posible el

nacimiento de transductores de nueva generación que al modificar la
superficie serigrafiada con nanopartículas de distinta naturaleza le
van a conferir propiedades inherentes a las mismas que en general
van a ampliar su campo de aplicación sin encarecer demasiado su
coste. Dos son los tipos de nanoestructuración a los que vamos a
hacer referencia en este capítulo: superficies nanoestructuradas con
nanotubos de carbono y superficies nano estructuradas con
nanopartículas de oro.
Una metodología de nanoestructuración con nanotubos de
carbono que no encarecería demasiado el precio del
electrodo serigrafiado sería la siguiente:
1. Utilizar nanotubos de carbono carboxilados (MWCNT-
COOH) con los que se prepararía una suspensión estable en
una mezcla dimetilformamida/agua (1:1) por reiterados
procesos de sonicación en un baño de ultrasonidos.
2. Recubrir la superficie del electrodo de trabajo de la
tarjeta de serigrafiado con una gota de esta suspensión y
dejarla secar a temperatura ambiente.
Electrodos serigrafiados modificados con nanopartículas de
oro

Las nanopartículas de oro han tenido siempre un gran

atractivo tanto desde el punto de vista biológico, por la
excelente biocompatibilidad entre las proteínas y el
oro, como por sus aplicaciones electroanalíticas,
debido tanto a la elevada conductividad de las mismas
como a la elevada relación superficie/volumen que
presentan.
 APLICACIONES
Biosensores enzimáticos: sensor de glucosa

En términos generales se puede definir a un sensor enzimático

como aquél en el que el elemento de reconocimiento es una
enzima y dentro de éstos, los biosensores amperométricos son,
sin duda, los más utilizados. En los biosensores
amperométricos, la señal analítica que interesa es una
corriente faradaica generada al mantener el electrodo de
trabajo a un potencial fijo y que estará directamente
relacionada con el analito.
Superficies nanoestructuradas con nanotubos de carbono:
Sensor de ácido úrico

El ácido úrico es el producto final del metabolismo de las purinas y de los

ácidos nucleicos que habitualmente se elimina a través de la orina pasando a
constituir el compuesto nitrogenado mayoritario de la misma. Un
metabolismo deficiente trae consigo una concentración elevada en sangre o
hiperuricemia que puede provocar desórdenes clínicos importantes, dando
lugar a manifestaciones patológicas como la gota articular aguda, la
calculosis renal, la artritis y el reumatismo.
Cualquier desviación positiva o negativa de los valores normales en suero
que oscilan entre 214 a 458 μM en varones y 149 a 405 μM en mujeres
provoca serios problemas en nuestro organismo por lo que facilitar su
control en sangre de una forma fácil y barata puede traer ventajas desde el
punto de vista de pacientes cuya calidad de vida pueda depender del control
de este parámetro en sangre total.