RITMOS LEUCOCITARIOS EN CANINOS

Widenhorn, N.I.; Scaglione, M.C.; Giordano, E.N.; Sartore, A.; Cerutti, R.D.
Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional del Litoral. Proyecto CAI+D 2006: Ritmos biológicos en caninos y su
sincronización con el ambiente Email: mcscagli@fcv.unl.edu.ar
Introducción: Los ritmos biológicos no constituyen un fenómeno casual ni un seguimiento pasivo de las condiciones ambientales, sino que
forman parte de una adaptación al entorno que es fundamental para la supervivencia de las especies. Actualmente se admite que la
ritmicidad es una propiedad fundamental de todos los organismos, regulada por el reloj biológico. La endogeneidad de los ritmos proporciona
a la especie una capacidad predictiva, que le permite organizar recursos y actividades antes de que sean necesarios. Se encuentran
afectados por los llamados sincronizadores, que incluyen tanto a factores ambientales externos, como a hábitos de vida. El reconocimiento
de una estructura temporal en las células sanguíneas, resulta valioso para la investigación y la exploración clínica. El objetivo del presente
trabajo fue estudiar las variaciones cronobiológicas leucocitarias en caninos, determinando su ritmicidad y su dependencia a fenómenos
ambientales o al reloj interno.

Materiales y métodos: Con el fin de analizar las variaciones cronobiológicas leucocitarias, determinar si se ajustan a ritmos diarios y si estos
son una respuesta a fenómenos ambientales cíclicos, en cuyo caso lo consideraríamos de origen exógeno, o bien, si son generados por el
organismo mismo, se considerarían de origen endógeno, se utilizaron seis caninos machos, clínicamente sanos, de peso similares
(comprendido entre 15 y 20 kg.). Los animales fueron sometidos a dos muestreos, en el primero (A) los animales estuvieron sujetos a la
variación natural del ciclo luz-oscuridad (LO 12:12), en el segundo (B) los mismos se sometieron a condiciones ambientales constantes (LO
24:00), 19 + 1 ºC , 50 + 10 humedad relativa. Durante toda la fase experimental los caninos dispusieron de alimento balanceado y agua ad
libitum. En cada muestreo, a cada animal, se le extrajo durante un período de 24 h y a intervalos de 2 horas, 12 muestras de sangre de 1,5
ml cada una. Las muestras fueron analizadas con un contador hematológico (Arcus) para cuantificar los leucocitos. Por tratarse de animales
que fueron muestreados en diferentes horarios, se utilizó el análisis de la varianza (ANOVA) para muestras repetidas, mediante la opción
REPEATED del procedimiento GLM (General Lineal Model). El modelo estadístico fue el siguiente: Yijk =  + [H]i + [A]j + ijk
Donde: Yijk = variable dependiente,  = media general, [H]i = efecto hora del día (i = 12 : 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 y 22 hs), [A]j =
efecto individual del animal (l = 6), ijk = error residual del modelo.
El modelo para el ajuste de datos a una función cosenoidal fue el siguiente: yi = A0 + A1 * Cos (w * t + Ф)
Donde: yi: = es el valor del i-ésimo punto de la serie de datos de N puntos; A0 = mesor; A1 = amplitud; w = frecuencia angular; t = tiempo
expresado en hora y Ф = acrofase.

Resultados y discusión: Los resultados del ANOVA ponen de manifiesto que tanto el modelo como los factores animal y hora del día
resultaron significativos (p< 0,05) en ambos fotoperíodos. Los niveles cuantificados para leucocitos concuerdan con los rangos fisiológicos de
6-17 cel x 109/l (Meyer y Harvey 2000), 6-12 cel x 109/l (Coppo, 2001). La aplicación de un ajuste no lineal de una función coseno a los datos
de la concentración leucocitaria registrada en caninos sujetos a diferentes fotoperíodos arroja los resultados observados en la tabla 1.
Los valores de los períodos (T) se calcularon teniendo en
cuenta las frecuencias (W) de la Tabla 1, evidenciando que las Tabla 1. Parámetros estadísticos que expresan los modelos rítmicos de
variaciones en la concentración de leucocitos se ajustan a un niveles leucocitarios de caninos sujetos a diferentes períodos de ciclo
ritmo diario, con períodos de 24:01 h (LO10:14) y 26:10 h (LO luz-oscuridad (LO 10:14 y LO 24:00).
24:00). A partir de los parámetros rítmicos descriptos en Tabla 1
Fotoperíodo
se construyó la Figura 1 donde se visualizan las medias de la Modelo: [GB] = A0 + A1*Cos (w*t + ) R
concentración leucocitaria determinadas en este trabajo en L/O
función Hora, así como también las curvas ajustadas mediante 12:12 [GB] = 8,500 + 1,021 * Cos (0,041 * time + 17:36) 0,75
el modelo cosenoidal, para los caninos sujetos a diferentes 24:00 [GB] = 9,775 + 0,982 * Cos (0,038 * time + 14:37) 0,65
períodos de ciclo luz-oscuridad A (LO 12:12) y B (LO 24:00).
A ; A = cel x 10 9/l; w=1/h; t=h; Φ=h; r: coeficiente de correlación del
En lo que respecta a los coeficientes de concordancia (R, Tabla 0 1
1), se han obtenido valores comprendidos entre 0,75 y 0,65. modelo
Estos valores en sistemas biológicos revelan un adecuado
ajuste alcanzado mediante la aplicación del modelo no lineal. Fig. 1. Ritmo de la concentración leucocitaria en caninos sometidos a ciclo luz
oscuridad 12:12 (A) 24:00 (B) y curvas ajustadas mediante el modelo cosenoidal
(línea continua). El área gris indica las horas de oscuridad.
A
B
15 15
G. Blancos (celx109/l)
G. Blancos (celx109/l)

10 10

5 5

0 0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22
Horas Horas

En la bibliografía disponible sobre caninos, existen trabajos referentes a variables hematológicas, pero no se han encontrado estudios
cronobiológicos donde se describa el comportamiento rítmico de las variables sanguíneas. El ritmo circadiano en la cuenta leucocitaria es
altamente reproducible, con gran variabilidad entre sujetos, como ha sido demostrado en diversos estudios en humanos (Hermida y col.,
1986) y en bovinos (Cerutti y col., 2006). La variación diaria del número total de glóbulos blancos, responde a la característica rítmica
individual que presenta cada subtipo, los cuales muestran diferentes comportamientos rítmicos (Suzuki y col. 1997). En Tabla 1 y Figura 1 se
pone en evidencia que la variación rítmica observada en los niveles leucocitarios de caninos en condiciones naturales presenta una
frecuencia diaria. Esto sugiere un ajuste del período de sus oscilaciones al ciclo ambiental más importante que es la alternancia día/noche. En
ausencia de señales externas de luz (condiciones controladas), la ritmicidad biológica para los glóbulos blancos siguió expresándose si bien
el período se volvió ligeramente diferente de aquel exhibido en condiciones naturales, respondiendo a la expresión de relojes biológicos
endógenos. La amplitud y la acrofase observada en ambas situaciones mostraron gran similitud.

Conclusiones: Los resultados aquí presentados muestran que las concentraciones leucocitarias presentan ritmicidad diaria que responden a
mecanismos endógenos de medición del tiempo, queda por determinar cual es la causa de esta variación, esto lleva al estudio de la
interacción entre los núcleos supraquiasmáticos, el sistema inmune y el sistema endócrino.