COLORACIONES

Garcia Vega, Jorge

Pardo Fernandez, Joyce
Rodriguez Muñoz, Sintia
COLORANTE: DEFINICIÓN

• Son compuestos orgánicos que tienen alguna

afinidad específica por algún componente.

• Los colorantes son compuestos químicos utilizados

para aumentar el contraste
 COLORANTES: Tipos
a) Sales colorantes: más comúnmente usados
 básicos: Consisten en un catión coloreado unido a un anión
incoloro. Tiñen la célula uniformemente (ácidos nucleicos y
los polisacáridos ácidos )
 (cromatina nuclear de pro y eucariotas)
 (más usados en citología bacteriana).
• Ej: clorhidrato (-) de azul de metileno (+). la safranina, la fucsina
básica, el cristal violeta
 ácidos: Tienen el catión incoloro unido a un anión
coloreado. No tiñen la célula bacteriana, pueden usarse como
color de contraste (coloración negativa). Tiñen estructuras
citoplasmáticas de las células eucariotas(Rx básicas)
 Ej: eosinato (-) de sodio (+),la fucsina ácida y el rojo Congo.
COLORANTES: Tipos
b) Colorantes liposolubles
• Se combinan con los componentes lipídicos de la célula,
usados para revelar la localización de los depósitos de
grasa. Ej. Negro Sudán.
COLORACIONES: tipos
• Vitales
• Son aquellas que se practican sobre células que están
vivas, mediante la introducción de un colorante en la
circulación de un organismo vivo.
• Ejem: el verde Jano y el azul de metileno.
• Supravitales
• son aquellas que se realizan sobre células o tejidos
vivos, pero que están aislados del organismo del que
proceden.
• No vitales
• se realizan sobre células muertas.
COLORACIONES
• Coloraciones simples
• Coloraciones diferenciales
• Coloraciones especiales
Simple : Positiva o negativa
Diferencial o compuesta
se utilizan para distinguir entre tipos de microorganismos

Etapas :
1. tinción primaria
2. Tinción de contraste o secundaria
- Ejemplo.: COLORACION GRAM, COLORACION DE
ZIEHL- NEELSEN, ESPORAS
Especiales
Se utilizan para distinguir
 Tinción de Gomori-Grocott
(Metenamina de plata)
Fundamento:

La reacción tintorial esta basada en que

presencia de acido crómico, los grupos hidroxilo
de lo polisacáridos de la pared celular de los
hongos son oxidados a aldehídos; estos a su vez,
reducen el complejo nitrato- plata metenamina
produciendo la coloración café a negra, debido de
la plata reducida en los lugares de localización
de los aldehídos
Imagen histológica, tinción con Gomori-Grocott (tinción con plata)
mostrando esférulas en diferentes estados de maduración.
 Tinción de Gomori-Grocott
Con esta técnica los hongos se tiñen de color negro al igual que
una bacteria; la mucina adquiere un color gris oscuro; las partes
internas del micelio, rosa oro; el fondo aparece de color verde claro
Reactivos
Ácido crómico : Oxidación de grupos hidroxilo de los
polisacáridos de pared celular
Bisulfito de sodio : Buffer
Metamina-nitrato de plata: Producción de color café a negro en la
pared
Cloruro de oro :Colorante de contraste en la pared
Verde brillante : Colorante de fondo en la preparación
 Hematoxilina-Eosina
• Es una tinción versátil, útil para el diagnóstico
histopatológico de las enfermedades micóticas. Con esta
tinción se visualiza la respuesta tisular y se caracterizan
los mohos como hialinos o dematiáceos. Algunos hongos
como aspergillus spp., los zigomicetos, las blastoconidias
y las seudohifas de candida se tiñen bien, otros no lo
hacen o se tiñen pobremente, pero aun en estos casos se
aprecia el contorno de los elementos micóticos no teñidos
y de esta manera se puede establecer la etiología de la
infección como de origen micotico.

• EL PROCEDIMIENTO ES EL MISMO QUE LA H-E PARA

PATOLOGIA
RESULTADOS
• Núcleo celular: Azul los núcleos mediante una
hematoxilina, previamente oxidada y transformada en
hemateina a la que se le añade una sustancia mordiente
para formar un a laca (para tal fin se usan sales metálicas
de aluminio, plomo o fierro). Los núcleos se colorean de
azul, azul morado, violeta, pardo oscuro o negro,
dependiendo de los agentes oxidantes y mordientes que
se utilizaron.
• Citoplasma: el citoplasma y material extracelular
utilizando la eosina que les confiere diversos grados de
color rosado
AZUL DE CRESILO
• Colorea total o parcialmente la membrana de ciertas
esporas.
• También permite distinguir las esporas maduras que no
se colorean de las inmaduras que se colorean.
ACETO CARMIN
• Su función es teñir las proteínas globulares, porque es un
colorante afín a las nucleoproteínas de los ácidos
nucleicos.
PREPARACION
• Carmín----------------------0.5 g
• Ácido acético (45%)------100 ml
• Hervir hasta que tenga un color oscurecido.
• Enfriar a temperatura ambiente.
• Filtrar en papel de filtro Watman#1
• Añadir gota a gota, hasta 1/2 de volumen de colorante.
• hierro clorhídrico 1M en ácido acético al 45% hasta que la
solución se torne de un color azulado. Alternativamente, añadir
gota a toga acetato férrico (saturado en ácido acético al 45 %)
hasta el punto justo antes que se formen precipitados en la
solución de carmín.
• Añadir el resto del colorante.
• Filtrar otra vez para eliminar los precipitados férricos inducidos.
 Tinción de Giemsa y Wright

• Utilizada para levaduras intracelulares, que

generalmente se encuentran dentro de los macrófagos o
monocitos.
• Forma un halo alrededor de la pared celular
• Citoplasma se tiñe de azul celeste
• Un polo se tiñe de azul oscuro (media luna)
Hystoplasma capsulatum

Pneumocystis jiroveci
 Azul de algodón

• El azul de lactofenol tiene tres funciones importantes a la

hora de observar hongos del tipo mohos obtenidos por
aislamiento o de medios inoculados.
• El fenol destruye la flora acompañante.
• El acido láctico conserva las estructuras fungicas al provocar
un cambio de gradiente osmotico con relación al interior del
hongo generando una película por asi llamarlo protectora
• Es útil para realizar el examen directo de cultivos, ya que
es una técnica rápida que permite visualizar
perfectamente las estructuras fúngicas.
• El colorante es fuertemente ácido y se usa para la tinción
Directa de micelio micòlico, el cual toma un delicado color
azul claro
Composición:

• Alcohol metílico
• Azul de algodón
acetico
• Agua destilada
250 mL
• Alcohol al 96% Microsporiumcanis

• Xilol
Azul algodón-lactofenol (colonias de Hongos)

Poner en un portaobjetos limpio sobre una superficie iluminada y

transparente o en su defecto sobre una hoja blanca

• Poner una gota pequeña de azul de algodón lactofenol en el

centro del portaobjetos
• Tomar un fragmento de la colonia mediante una asa
• Montar la preparación depositando suavemente un
cubreobjetos sobre el portaobjetos
• Sellar con esmalte incoloro
 Tinción con azul algodón acético
Fijar con alcohol metílico, cubriendo el portaobjetos y se
deja evaporar

• Cubrir la preparación con azul de algodón acético por 20

min, calentando hasta la emisión de vapores.
• Lavar rápidamente con agua
• Pasar por alcohol al 96 % y secar
• Pasar por Xilol hasta que transparente la preparación
• Montar en bálsamo de Canadá
 Paracoccidioides
brasiliensis
Hongo dimórfico; Se
visualiza macroconidia en
forma de “timón de barco”

Rhizopus sp
Rhizopusstolonifer

Scedosporiumapiospermum
HIDROXIDO DE POTASIO (KOH)
• Puede utilizarse para examinar muestras clínicas con
abundantes células y restos celulares.
• El Hidróxido de potasio al 10% (solución de KOH) permite
ver elementos de hongos ya que el KOH digiere
parcialmente los componentes proteicos, por ejemplo de
la célula huésped, pero no actúa sobre los polisacáridos
de las paredes celulares de los hongos.
• Solución de KOH al 10%
GRACIAS……