UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA

DE MÉXICO

APOPTOSIS
(Muerte celular programada)
 Cada célula tiene un momento para vivir y un momento
para morir.

 De no existir la muerte celular, se estima que se

acumularían dos toneladas de médula ósea y de ganglios
linfáticos y 16 km de intestino, en un humano a la edad de
80 años.

 En humanos, la velocidad del crecimiento y muerte celular

es equilibrada para mantener el peso del cuerpo.
En las células existen dos formas de morir:
 Por accidentes (daños mecánicos, exposición a
agentes tóxicos, etc.) que producen necrosis

 Por apoptosis, la célula inicia una serie de

acontecimientos ordenados (por lo que también se
denomina muerte celular programada) controlados
por un mecanismo propio de la célula .
Cuando las células sufren daños tales como quemaduras, accidentes,
radiaciones, traumas, infecciones, etc. se produce necrosis.

Esta muerte no ocurre de forma ordenada,

 el núcleo no presenta cambios aparentes
 las mitocondrias aparecen dañadas
 el contenido de los organelos fluye hacia el citoplasma
 la célula se hincha

Termina por romperse liberando el contenido celular quedando en el

medio proteasas y señales que atraen células del sistema inmunitario.

Tiene lugar una reacción inflamatoria en la zona.

 La apoptosis, por el contrario, consiste en una serie de
eventos que conducen a una muerte ordenada de la célula.

 La necesidad de que ocurra la apoptosis se debe a dos

circunstancias a las que se enfrenta habitualmente el
organismo:
 Cuando es necesario eliminar células porque son una
amenaza para el organismo:
 infectadas por virus,
 que su ADN ha sufrido daños importantes, etc ...

 A lo largo del desarrollo de cualquier organismo, necesita

deshacerse de ciertas estructuras y crear otras.
Durante un proceso de metamorfosis.
 ¿Donde podemos ver procesos apoptóticos ?

• Desarrollo embrionario
• Homeostasis Celular
• Inmunología
• Enfermedades Virales
• Enfermedades neurodegenerativas
 Apoptwsix
La palabra apoptosis deriva del griego, y
significa “hojas que caen de un árbol”.
 APOPTOSIS NECROSIS

Apoptosis: “Autodestrucción de las células, activa y

genéticamente controlada, caracterizada por una
morfología específica.”

Necrosis: Tipo de muerte celular, que ocurre como

consecuencia de un daño masivo de tejido, asociada
con una rápida incapacitación de las principales
funciones celulares como son la expresión génica,
síntesis de ATP y potencial de membrana.
 APOPTOSIS vs NECROSIS

Apoptosis Necrosis
Causas Falta factores crecimiento Anoxia
Influencia hormonal Daño físico o químico
Toxicidad suave

Morfología Cel. Encogida Cel. Inflada

Núcleo Condensación, Degradación ADN

segmentación,
fragmentación ADN

Membrana celular Protuberancias, cambios en Lisa, lisis

la distribución de
fosfatidilserina

Mitocondria Cambios moleculares (aumento de tamaño)

Inflamación

Expresión + Expresión génica, síntesis

proteica, activación -
proteasas
 DIFERENCIAS ENTRE APOPTOSIS Y NECROSIS

Apoptosis Necrosis
• Efecto de burbujas en la membrana • Perdida de la integridad de la
membrana
• Encogimiento de la célula
• La célula se hincha
• Aparición de cuerpos apoptóticos
• No hay formación de ´vesículas
• Requiere ATP
• No se requiere energía
• No ocurre a 4ºC
• Puede ocurrir a 4ºC
• Fragmentación del ADN (Ladder)
• Digestión al azar del ADN
• Puede morir una única célula
• Mueren grupos de células
• No hay inflamación
• Procesos inflamatorios presentes
 APOPTOSIS

•La señalización ocurre por medio de

múltiples vías (dos vías principales: mediada
por la mitocondria y mediada por los
receptores de muerte)

• Todas las vías convergen a un único sistema

de proteasas efectoras (CASPASAS)
 CASPASAS
Las caspasas son cisteín-proteasas que cortan
sustratos después de un Asp. Existen muchas y la
especificidad esta dada por los 4 residuos anteriores
al sitio de corte. Son sintetizadas en forma de
procaspasas inactivas, pudiendose autoactivar
cortandose ellas mismas. Cortan e inactivan las
enzimas de los sistemas reparadores del ADN.
• Caspase-1 (ICE) • Caspase-8 (FLICE, Mch5, MACH)
• Caspase-2 (ICH-1, Nedd-2) • Caspace-9 (Mch6, ICE-LAP6)
• Caspase-3 (CPP32, Apopain, Yama) • Caspase-10 (Mch4)
• Caspase-4 (ICH-2, TX, ICEreıı)
• Caspase-5 (ICErelııı, TY)
• Caspase-6 (Mch2)
• Caspase-7 (ICE-LAP3, Mch3, CMH-1)
 SUBGRUPOS DE LAS CASPASAS

A la fecha, diez principales caspasas han sido identificadas

y ampliamente caracterizadas en:

I. Caspasas señaladoras o iniciadoras (2, 8, 9, 19)

II. Caspasas efectoras o ejecutoras (3, 6. 7)
III. Caspasas inflamatorias (1, 4, 5)

Las otras caspasas que han sido identificadas incluyen: 11,

12, 13, 14.

El papel central en la cascada de eventos apoptóticos es

realizada por la caspasa 3 (CPP32).
 EXISTEN DOS VÍAS BÁSICAS PARA QUE SE
REALICE LA APOPTOSIS
SEÑALES INTERNAS (RUTA INTRINSECA)
Están implicadas las membranas de mitocondrias, del
retículo endoplasmático y de la envoltura nuclear.
Se trata de un balance entre las proteínas Bcl2 y Bax.

SEÑALES EXTERNAS (RUTA EXTRINSECA)

Fas y el receptor de TNF (factor de necrosis tumoral) son
receptores expuestos en la superficie de la célula que al ser
estimulados producen la activación de la caspasa 8 y se
inicia el proceso de muerte celular.
La característica principal de la
apoptosis es que es silenciosa
debido a que las células
apoptóticas son reconocidas
por macrófagos, de esta forma
no se produce el derrame del
contenido celular y, por tanto,
no existe inflamación ni lesión
del tejido.
 ACTUACIÓN DE LAS CASPASAS

 Inhibición de ADNasa
 Fragmentación del ADN nuclear
 Ruptura de las laminas nucleares
 Fragmentación del núcleo
 Fragmentación de proteínas del citoesqueleto
 Destrucción del citoesqueleto
 Disociación de membrana celular
 FRAGMENTACIÓN CELULAR
RELACIÓN ENTRE CICLO CELULAR Y APOPTOSIS:
 RUTA INTRINSECA

Estimulos que inician la ruta intrinseca:

(produce señales intracelulares)
 radiación (daño al AND)
 ausencia de ciertos factores de crecimiento
 hormonas y citocinas.

Todos esos estímulos causan cambios en la

permeabilidad de la membrana externa de la
mitocondria (MOMP) por sus siglas en ingles.
 RUTA INTRINSECA

Liberación de proteinas pro-apoptóticas tales como

citocromo C, Smac/DIABLO, AIF, endonucleasa G y CAD
del espacio intermembrana al citoplasma.

El citocromo C se une y activa Apaf-1 tambien

procaspasa-9 formando un “apoptosoma”

La activación de la caspasa 9, sigue ala caspasa 3 y

muerte celular.
 RUTA EXTRINSECA

Los “receptores de muerte” que son miembros de la

superfamilia de las TNF (Factores de necrosis tumoral).

Los receptores de muerte tienen un dominio

citoplasmico de cerca de 80 aminoácidos llamado el
«dominio mortal».

Este dominio de muerte juega un papel critico en la

ruta de señalización en la transmisión de las señales
de muerte de la superficie celular al interior de la
célula.
 RECEPTORES DE MUERTE CELULAR Y SUS LIGANDOS

 Los receptores y sus ligandos mejor caracterizados:

Receptors Ligands
FasR (CD95/APO1) FasL
DR3 Apo3L
DR4 (TRAIL-R1) Apo2L
DR5 (TRAIL-R2) Apo2L
TNFR1 TNF-α
TNFR2 TNF-ß
Death Ligands and Death Receptors
 Unión del ligando trimerico FasL al
receptor Fas
Trimerización y clustering de Fas
 Reclutamiento de Fas-asociado
dominio de muerte (FADD) a Fas
Reclutamiento de la caspasa-8 a
FADD
Formación del complejo señal de
inducción de muerte Comple jo (DISC)
 Activación de la caspasa-8
(autoactivación)
 Activación de la caspasa efectora.
 Apoptosis
Caspasa Nombre Substrato Función
alternativo
Caspasa-8 FLICE, MACH, Caspase-3 Apoptosis
Mch5 Caspase-4 (death receptors)
Caspase-6
Caspase-7
Caspase-9
Caspase-10
Caspase-13
PARP
Bid
Caspasa-9 Apaf-3, ICE- Caspase-3 Apoptosis
LAP6, Mch6 pro-Caspase-
9
Caspase-7
PARP
Caspasa-10 FLICE-2, Mch4 Caspase-3 Apoptosis
Caspase-4 (death receptors)
Caspase-6
Caspase-7
Caspase-8
Caspasa Nombre Substrato Función
alternativo
Caspasa-12 ICE_C ? Involved in mediating
apoptosis following ER
stress. Related to mouse
caspase-1 and caspase-
11 and human caspase-4
and caspase-5
Caspasa-13 ERICE ? Member of the ICE family
of caspases that include
caspase-1 and caspases-
4, -5 and –11. Involved in
inflammation.

http://www.sghms.ac.uk/depts/immunology/~dash/apoptosis/caspases.html
 Regulación De Las Caspasas

Slee et L. (1999) Jounal of Cell Biology 144: 281-91 http://www.sghms.ac.uk/depts/immunology/~dash/apoptosis/caspases.html

 CASPASAS
- Son cistein proteasas específicas de aspartato (caspase)
- Se expresan como proenzimas (zimógenos)
- Presentan 3 dominios:
1. Prodominio terminal
2. Subunidad larga (p20) que contiene el centro activo
3. C-terminal que es la subunidad pequeña (p10)

Asp Prodominio terminal

Subunidad larga (p20)
Asp
Subunidad pequeña (p10)
ACTIVACIÓN DE CASPASAS

Asp

Asp Caspasa
iniciadora

Caspasa
activa
MECANISMOS DE ACTIVACIÓN DE CASPASAS

1. Activación por otra caspasa

2. Activación inducida por proximidad

3. Asociación con una subunidad reguladora

- Activación de una caspasa por otra previamente activada:
cascada de caspasas
- Caspasas con prodominio corto: Caspasas efectoras
- Caspasas –3, -6, -7.
- Amplificación e integración de señales
 ACTIVACIÓN INDUCIDA POR PROXIMIDAD
- Activación de una caspasa por proximidad: Trimerización de
receptores que reclutan caspasas y se procesan mutuamente.
- Caspasas con prodominio largo: Caspasas iniciadoras.
- Caspasa -8.
- Implicada en vía extrínseca (CD95).
 ASOCIACIÓN CON UNA SUBUNIDAD REGULADORA

- Activación de una caspasa a través de un cofactor.

- No se activa por proteolisis sino por cambio conformacional.
- Caspasas con prodominio largo: Caspasas iniciadoras.
- Caspasa -9. Cofactor: Apaf-1. Citocromo c.
- Implicada en vía intrínseca o mitocondrial.

Apoptosoma
 VÍAS DE INDUCCIÓN DE APOPTOSIS
Existen dos vías de inducción de apoptosis:

3.4.1. Vía extrínseca o vía de los receptores de muerte

3.4.2. Vía intrínseca o vía de la mitocondria

 VÍA EXTRÍNSECA
- A través de receptores superficiales: receptores de muerte.
Receptores de la familia de TNFR: CD95, TNFR1, TNFR2. Tb
DR3, TRAIL...

- Requiere trimerización para la transducción de la señal.

- Al receptor activado se le asocia un complejo de proteínas:

dominio de señalización inductor de muerte (DISC, death-
induced signalling domain)
 DISC
1. El adaptador FADD se une a través de su dominio de
muerte (DD) al dominio de muerte del receptor activado

2. FADD contiene un dominio efector de muerte (DED) que

por homología atrae procaspasa-8 o FLICE que se activa.

3. Inhibición debida a proteínas con dos dominios DED:

proteína inhibidora de FLICE (FLIP, FLICE-inhibitory
protein).
 3.4.1. VÍA EXTRÍNSECA
FasL Fas
MORT/FAAD

caspasa 8 Bid Vía mitocondrial

caspasa-7 caspasa-3
caspasa-6

Deshidratación
citoplásmica
Externalización Formación Fragmentación
de cuerpos Hidrólisis Fragmentación
de PS DNA de NuMA nuclear
apoptóticos
Condensación
Cambios apoptóticos cromatina Cambios apoptóticos
extranucleares nucleares