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CRECIMIENTO
MICROBIANO
CRECIMIENTO MICROBIANO
INTRODUCCION
• Incremento ordenado de todos los constituyentes
celulares.
• Aumento de masa y finalmente a un aumento en el
número de células
• En bacterias (fisión binaria)
Gemación,
ej.
levaduras
REQUERIMIENTOS, FACTORES PARA EL CRECIMIENTO
MICROBIANO
REQUERIMIENTOS FISICOS
Temperatura
pH
Actividad de Agua
Presión Osmótica
EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA VELOCIDAD DEL CRECIMIENTO Y LAS
CONSECUENCIAS MOLECULARES PARA LA CÉLULA
MICROORGANISMOS ANAEROBIOS
ANAEROBIOS ESTRICTOS Y ANAEROBIOS AEROTOLERANTES
Carbono
Nitrógeno
Azufre
Fosforo
Oligoelementos
Oxígeno
Carbóno (C) todos los organismos requieren C para sintetizar los componentes celulares.
Nitrógeno, azufre.y fósforo. Estos elementos se requieren para la síntesis de DNA, RNA,
proteínas y ATP. Las bacterias pueden obtener nitrógeno (N) ya sea fijándolo directamente de la
atmósfera, como por ejemplo el género bacteriano Rhizobium. También pueden obtener este elemento
de compuestos inorgánicos que contengan N como nitritos, nitratos, sales de amonio o amino ácidos.
Las bacterias pueden obtener azufre de iones de sulfato, sulfito de hidrógeno y amino ácidos con azufre.
El fósforo es esencial para la síntesis de ácidos nucleicos y membranas celulares. Una fuente para
obtener fósforo son los iones de fosfato y el ATP.
Elementos trazas. Otros elementos como hierro, cobre, molibdeno y zinc son requeridos por los
microorganismos en pequeñas cantidades. Usualmente tienen función de cofactores.
Oxígeno No todos los microorganismos necesitan 02, sin embargo, muchas formas de vida requieren
oxígeno para llevar a cabo respiración aeróbica. Los microorganismos que utilizan oxígeno molecular son
llamados aeróbicos. Estos se clasifican en aeróbicos obligados que son los que requieren oxígenos
molecular para vivir, y los aeróbicos facultativos los cuales utilizan el oxígeno molecular cuando está
presente, pero en su ausencia continúan su crecimiento por la vía de fermentación o respiración
anaeróbica, un ejemplo es Escherichia coli. Por otro lado tenemos los anaeróbico obligados que
necesitan ausencia de oxígeno molecular para crecer y donde este generalmente es tóxico, un ejemplo
es el género Clostridium. Estos microorganismos obtienen el átomo de oxígeno molecular del agua.
También se observan microorganismos anaeróbicos aerotolerantes los cuales no utilizan el oxígenos
molecular para su crecimiento, pero pueden tolerarlo. Los microaerofílicos sólo pueden crecer en
concentraciones de oxígeno molecular menor a las encontradas en el aire.
Macronutrientes
Fuente de - CO2
carbono - Compuestos Carbohidratos, azúcares,
orgánicos proteínas, aminoácidos,
lípidos, ácidos grasos,
glicerol
Fuente de - Inorgánica NH4, NO3-, N2
nitrógeno - Orgánica Proteínas, peptonas, aa,
bases púricas y
pirimídicas, urea
Fuente de - Inorgánica Fosfatos
fósforo - Orgánica Esteres del ácido
fosfórico
Fuente de - Inorgánica Sulfuros y sulfatos
azufre - Orgánica Aminoácidos sulfurados,
vitaminas
Tipos nutricionales Fuente de Fuente de Ejemplos
energía C
Cianobacterias,
Fotoautótrofos Luz CO2 bacterias
púrpuras y
verdes
Compuestos Algunas
Fotoheterótrofos Luz orgánicos bacterias
púrpuras y
verdes
Compuestos Algunas
Quimioautótrofos o inorgánicos CO2 Eubacterias y
litótrofos ej.: H 2, NH3, muchas Archaea
NO2-, H2S
La mayoría
Quimioheterótrofos Compuestos Compuestos Eubacterias,
o heterótrofos orgánicos orgánicos algunas Archaea
FACTORES ORGANICOS DE
CRECIMIENTO
• Fuente de carbono
• Fuente de nitrógeno
• Micro nutrientes
• Suplementos
• Colorantes e indicadores
1. FUENTES DE CARBONO
• 1.1. Carbohidratos.
• Monosacáridos.
• Dextrosa. Presente en jugos de frutas. Hidrólisis de lactosa,
sacarosa, almidón.
• Oligosacáridos.
• Lactosa (suero de leche)
• Sacarosa.
• Dextrina.
• Polisacáridos.
• Almidón
• agar
• 1.2. alcoholes.
• Glicerol.
• Etanol
• metanol
FUENTE DE CARBONO
• 1.3 Lípidos.
• 1.4 hidrocarburos
2. FUENTES DE NITRÓGENO
• Nitratos
• Sales de amonio
• Hidrolizados. Peptonas. Digeridos,
extractos.
FUENTES DE NITRÓGENO
• 1) Hidrolizados de proteínas (Peptonas)
son obtenidas por hidrólisis ácida o enzimática de
distintas fuentes proteicas como carne de diferentes
órganos y animales, pescado, caseína, gelatina, harina
de soja, algodón, girasol, etc..
Mediante ajuste de la relación enzima-sustrato y
variando tiempo de hidrólisis es posible variar el tamaño
de la cadena de polipéptidos.
• 2) Extracto de carne, que se obtiene por extracción
acuosa y concentración posterior variando su tipo de
acuerdo a la calidad de carne, tiempo de extracción y
temperatura de la misma.
FUENTES DE N
• 3) Extracto de levadura, puede ser obtenida
mediante autólisis o plasmólisis de la levadura, es
básicamente una mezcla de aminoácidos, péptidos,
vitaminas solubles en H2O y carbohidratos.
• 4) Extracto de malta, que es el extracto soluble en
H2O de la malta de la cebada
• 5) "Cornsteep", el agua de maceración de la industria
del maíz tiene mucha importancia por su utilización
como componente esencial de los medios para la
producción de varios antibióticos y enzimas.
• Deben considerarse los costos, la disponibilidad y el
problema de impurezas que puede acompañar a las
distintas materias primas utilizadas.
3. MICRONUTRIENTES
Según la cantidad pueden ser:
• Macronutrientes. En cantidades de gr/l. C, O2, H2, N2, P,
S, K, Na, Ca, Mg
• Micronutrientes.oligoelementos, en mg/l o µg/l
• Son activadores enzimaticos. Fe, Cu, Zn, Mn, Mo, Co, B.
• Se usan sales como: NaCl, KH2PO4, NH4(SO4), MnSO4,
ZnSO4, CaCl2
• El Na en altas concentraciones inhibe el crecimiento
de algunos m.o y favorece a otros. Ejplo. Agar manitol
salado (7.5% de ClNa) se usa para el crecimiento de
staphilococcus.
• Agar streptococcus KF (6.5% ClNa) para crecimiento de
streptococcus
4. SUPLEMENTOS
A. inhibidores.
• Antibióticos. Como penicilina, estreptomicina,
cloranfenicol (amplio espectro).
• Ejm. Agar saboraoud-glucosa. Contiene cloranfenicol.
• Fungicidas: fungizona, amphotericina (mohos y
levaduras).
• Metales pesados.
• Ejmplo. Agar sulfito-bismuto. Contiene Bi y colorante
verde brillante e inhiben a bacterias Gram (+) y mayoría
de Gram (-), excepto a salmonella.
• Compuestos orgánicos inhibidores.
• Agar salmonella-shigella. Contiene altas concentraciones
de sales biliares y citrato de sodio que inhibe a las Gram
(+) y mayoría de gram(-) incluyendo a las coliformes,
excepto salmonella y shigella.
SUPLEMENTOS
B. factores de crecimiento.
• Compuestos orgánicos que se
suministran en bajas concentraciones.
• No son sintetizados por los m.o. que se
desea favorecer, pero son necesarios
para su desarrollo.
• Vitaminas, aminoácidos, ácidos grasos.
SUPLEMENTOS
C. colorantes e indicadores.
• Indicadores de reacción, indicadores de potencial oxido-
reductor, indicadores selectivos.
• Indicadores de la reacción del medio.
• Verde malaquita:
• pH muy ácido: amarillo
• pH =2 : verde
• pH = 11.5: azúl
• pH = 14: incoloro
• Rojo-fenol.
• pH = 7.8: azúl
• pH =7.8: púrpura.
• pH = 7.4: rojo
• oH = 7.0: naranja
• pH =6.5: amarillo.
• Para indicar producción de acidos; láctico, cítrico, acético
SUPLEMENTOS
Indicadores del potencial de oxido-reducción.
• Azul de metileno:
• Medio oxidante: azul
• Medio reductor: incoloro
Indicadores selectivos.
• Verde malaquita, cristal violeta: inhiben bacterias
gram(+)
• Colorantes básicos: inhiben bacterias.
Ejemplo. Agar Mc-Conkey. Contiene sales biliares y cristal
violeta que inhibe a las gram(+)
• Agar EMB. Para determinación de coliformes fecales.
Contiene eosina y azul de metileno que inhiben gram(+)
y facilita el desarrollo de enterobacterias.
PREPARACIÒN
Para su preparación se deben tener en cuenta los
siguientes aspectos:
Finalidad.
•Elección de componentes necesarios para
lograr el crecimiento y la formación de
productos deseados.
Tener en cuenta:
•Requerimientos nutricionales del m.o.
•Aspectos específicos del proceso
•Disponibilidad de las materias primas.
REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES
Están determinados por
Macronutrientes:
• Heterotrofos, autotrofos.
• Aerobio o anaerobio. En la ausencia del O2 , el NO3 o SO4 son
utilizados como aceptores de electrones por algunas bacterias.
• Tipos de fuentes de N: inorgánico u orgánico.
• P y el S: Suministrados en P04 y S04 (aminoácidos azufrados).
• K y Mg. El primero suele unirse al RNA, de manera que sus
requerimientos aumentan la velocidad de crecimiento.
Micronutrientes son 2 categorías:
• a) Los frecuentemente esenciales: Ca, Mn, Fe, Co, Cu y Zn.
• b) los raramente esenciales: B, Na, Al, Si, Cl, V, Cr, Ni, As, Se, Mo,
Sn.
Factores de crecimiento; ciertos aminoácidos y vitaminas del
grupo B como tiamina, riboflavina, ácido pantotético, niacina, etc.
OTROS AGREGADOS
Requeridos por los m.o. de manera específica
según el proceso considerado.
Ejemplo:
• Los precursores, constituyen la base de una
molécula a sintetizar. Ejemplo. ácido fenil acético
para la penicilina.
• El sulfato, en fermentación alcohólica, favorece
la formación de glicerol.
• La producción de ácido cítrico debe considerar la
influencia negativa que para el proceso tiene un
exceso de hierro en su composición.
COSTO
Bolsas
INCUBACIÓN DE MICROORGANISMOS ANAEROBIOS
Preincubación de los medios en
anaerobiosis
Bolsas
Contenedores
INCUBACIÓN DE MICROORGANISMOS ANAEROBIOS
Estufas
Jarras
OBTENCION DE CULTIVOS PUROS
1. Siembra en superficie. Extensión y estría.
• Aplicando logaritmos: X = 2n Xo
• Log X = log Xo + n log 2
E. Coli Glucosa-sal 17
• Xo = 1000
• X = 100 000
• T = 4 horas
• g =? g = t/n
• n = 3.3 log X/Xo , n = 3.3 log 100000/1000
• n = 6.6 generaciones
• g =T / n
• g = 240/6.6 = 36,36 minutos
TASA DE CRECIMIENTO
Yx/O2= -X/O2
Yp/s = - P/S
m S
K sx x [S ]
Ejemplo
Una cultivo de microorganismos BATCH en crecimiento, en
sustrato de glucosa, dio los siguientes datos.
Rpta. a)
ln X
ln X
t t (h)
y ln X ln 37.5 ln 5.1
tg m m 0.1 h 1
x t 36 16
b) Rpta.
Calcular la variación de sustrato por el crecimiento celular.
41 1.25
y 0.40 gr de células / gr de sustrato
0.63 100
c) Rpta.
X max X 0 Y .S 0
X max 1.25 0.4(150)
g células
X max 60.25
lt
MODELO LOGISTICO
dX = m(Yx/s.So + Xo – X) . X
dt (Ks.Yx/s + Yx/s.So +Xo-X)22
MODELOS ESTRUCTURADOS.
Identificación.
• En las dos superficies laterales, sin trabajar, de la cámara de conteo
están impresas las siguientes indicaciones: El sistema de la red de
conteo, El nombre y la marca registrada del fabricante, La
profundidad de la cámara en milímetros , La superficie del cuadrado
más pequeño en mm2
•Cuadrado de 3 x 3 mm, con separación
entre dos líneas consecutivas de 0.25 mm. CÁMARA DE
•El área sombreada y marcada L es 1 mm2. NEUBAUER
•La depresión central está hundida 0.1 mm
respecto a la superficie.
•El volumen comprendido entre la
superficie L y el cubreobjetos es de 0.1
mm3 (0.1 microlitro)
•Los cuadrados L están subdivididos en 16
cuadraditos de 0,0025 mm2 cada uno.
•El cuadrado del centro está dividido en 5
cuadrados por lado con una longitud lateral
de 0,2 mm, y superficie de 0,04 mm2.
10 mL de inóculo
6 tubos positivos
(com crescimento
bacteriano)
1 tubos positivos
0,1 mL de inóculo
D. PESO SECO.