“AÑO DEL DIALOGO Y RECONCILIACION NACIONAL”

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
Escuela Profesional de Tecnología Médica
Filial Chincha

MÉTODOS DE COLORACIÓN
SIMPLE Y COMPUESTO
Docente: Lic. TM Keyla Ríos Huarcaya.
Alumna: Raquel M. Vargas Ronceros
Ciclo: V
 ¿QUÉ ES UNA COLORACIÓN?

La coloración es un proceso por el cual las

moléculas de un colorante se absorben a
una superficie. El uso de colorantes
permite cambiar el color de las células de
los microorganismos y poder realizar la
observación en microscopio óptico. Dado
que las bacterias son casi incoloras, no
presentan contraste con el medio en el
cual se encuentran suspendidas y no
pueden observarse claramente sin algún
tratamiento previo.
 De acuerdo a la reacción que ocurre, existen diferentes tipos de tinción:

 Tinciones simples.
 Tinciones diferenciales.
 Tinción de Gram.
 Tinción de acido-alcohol resistente (Ziehl-
Neelsen).
 Tinciones especificas.
 Tinción esporas de Wirtz-Cortitlin.
 Tinción de flagelos de Leifson.
 Tinción negativa.
 COLORACIÓN SIMPLE

La tinción simple se basa en la afinidad del colorante por los componentes

celulares. La tinción puede ser uniforme o presentar algunos gránulos en su
interior. Utiliza un solo colorante (violeta de genciana, azul de metileno, fuscina
diluida).La tinción simple se utiliza para destacar el microorganismo completo para
que se vean las formas y las estructuras celulares básicas. En las tinciones simples
se usa un único reactivo, que preferentemente es de tipo básico y contiene un
cromógeno (compuesto que da color al tinte) con carga positiva, ya que la pared
celular de las bacterias posee componentes con carga negativa que atraen y
enlazan el cromógeno. Se utilizan solamente para incrementar el contraste; todas
las células absorberán el colorante y quedarán teñidas del mismo color. Por tanto,
la tinción simple mejora la observación de la célula completa.
 COLORACIÓN COMPUESTA

Se utilizan para mostrar las diferencias entre bacterias; se denominan

compuestas porque se emplea más de un colorante. Las más utilizadas en
microbiología sonde Gram y Ziehl-Neelsen

COMPONENTES DE GRAM Y ZIEHL-NEELSEN

 COLORANTE PRINCIPAL O PRIMARIO; básico que a las células cargadas

negativamente las colorea.
 MORDIENTE: permite al colorante actual con más intensidad y que se fije
a las células (sales metálicas, solución yodada o lugol, tanino y fenol).
 AGENTE DE COLORANTE: disolvente orgánico como el alcohol, un ácido o
alcohol acetona.
 CONTRACTOR O COLORANTE SECUNDARIO; Colorante básico de
distinto color que el primer colorante.
 Hans Christian Gram

De origen danés, nació el 13 de septiembre de 1853.

En 1882 Paul Ehrlich publicó un método para colorear el bacilo de la
tuberculosis: esta publicación fue un aliciente para que Gram comenzara
sus experimentos con la coloración de las bacterias.

Mientras se encontraba en uno de sus viajes en Berlín, intentó establecer la diferencia entre dos
bacterias causantes de neumonía: Klebsiella pneumoniae y el Neumococo. El proceso de
coloración de bacterias fue el siguiente: añadir violeta de genciana, fijación con yodo en una
solución de yoduro de potasio, y finalmente, realizar un lavado con etanol. De este modo,
observó que algunas bacterias se teñían de morado, y las denominó Bacterias Gram positivas.
Este descubrimiento se llevó a cabo de forma accidental.

Unos años más tarde, el científico alemán Carl Weigert amplió este descubrimiento añadiendo
safranina después del procedimiento de Gram, y observó que algunas bacterias no se teñían y
otras se teñían de rojo. Estas últimas fueron llamadas Bacterias Gram negativas.
FUNDAMENTO DE LA TINCIÓN DE GRAM

 La afinidad gram positiva o negativa depende de la composición química

de la pared celular en la parte de su estructura física.
 Después de las primeros 4 pasos, al observar al microscopio todo se ve
violeta.
 Luego del decolorante algunas conservan su color mientras que otras se
decoloran.
 Las violetas son Gram positivas, las que pierden su color son gram
negativas, pues los decolorantes orgánicos utilizados abren poros de la
membrana externa de las bacterias gram negativas (principalmente de
lipoproteínas y lipopolisacáridos), permiten la salida del colorante
principal; al agregar el contracolor como la safranina éstos quedan rojos.
TÉCNICA PARA GRAM

1.Ya fijo el extendido cubrir la superficie con cristal violeta o con

violeta de genciana (colorante primario) por un minuto.
2.Lavar con abundante agua
3.Cubrir con lugol (mordiente) durante 1 minuto
4.Lavar con abundante agua
5.Inclinar el portaobjeto y dejar gotear al alcohol de
acetona(decolorante) hasta que deje de perder color
6.Lavar con agua
7.Cubrir el preparado con fucsina básica (contracolor) por 1 min
8.Lavar con agua
9.Dejar secar el preparado al aire10.Observar con objetivo
de inmersión
 FUNDAMENTO DE LA COLORACIÓN DEZIEHL-NEELSEN

Manifiesta la capacidad de resistir a la

decoloración gracias al alto contenido
de lípidos complejos (ácidos micólicos)
y ceras que poseen algunos
microorganismos en su pared celular.
Los que resisten la decoloración
se llaman ácido alcohol resistentes AAR
y se ven rojos mientras que se tiñen azul
son los no ácido alcohol reisistentes (no
AAR).
TÉCNICA

1.Ya fijo con la superficie cubierta con carbol fuscina como colorante
principal (fucsina)+ un primer mordiente (ácido fénico o carbólico)
2.Calor por 5 min con un mechero encendido hasta que haya vapor(calor
mordiente físico o segundo mordiente)
3.Lavar con abundante agua
4.Decolorar con el ácido alcohol (decolorantes: ácido sulfúrico al 3% en el
alcohol etílico al 95%).
5.Lavar con abundante agua
6.Cubrir el preparado con azul de metileno (contracolor) por 1 min
7.Lavar con agua
8.Dejar secar el preparado al aire.
9.Observar el preparado con objetivo de inmersión.