UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS ¨ESPE¨

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA Y DE LA AGRICULTURA

INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA
BIOLOGÍA MOLECULAR I

Jesús Álvarez
Ruth Escobar
Michelle Hidrobo

4208
 Fundamento
Basado en PCR, técnica que utiliza gradientes de temperatura para la amplificación de un
segmento de ADN

Necesita de primers, la enzima polimerasa, el buffer de la enzima, MgCl2, dNTPs,

ADN molde y agua

Tiene tres etapas que forman un ciclo el cual se repite: denaturación, hibridación y
extensión
 Cuantificación de la
Combina la amplificación y la
fluorescencia de una
detección en un mismo paso
molécula reportera (sonda)

Esta sonda lleva adherida una

Basado en la utilización de
molécula fluorescente y otra
PCR en tiempo real otro fragmento de ADN
molécula que inhibe esta
(sonda) complementario
fluorescencia ("quencher")

Alta especificidad, amplio

Se utiliza para cuantificación rango de detección y rapidez
absoluta o relativa en la visualización del
producto
 Tipos de sonda

SybrGreen Sonda TaqMan

Se une a cualquier ADN de doble hebra Tiene un reportero fluorescente en el extremo 5´ y un

quencher en el extremo 3’

Ventajas: Simple, de rápida optimización

Ventajas: Alta especificidad,
Desventaja: Inespecífica
Desventaja: Costos y optimización
Introducción
Métodos
 Variable Grupo de control (n = 30) Grupo PAH (n = 30) Valor P

Resultados Años
Género masculino)
41.21 ± 13.28
17
46.13 ± 17.41
15
> 0.05
> 0.05

Altura (cm 161,34 ± 17,78 163.57 ± 15.44 > 0.05

Peso corporal, kg 52.13 ± 19.36 57.21 ± 17.76 > 0.05
PAS, mmHg 116.53 ± 16.34 119.83 ± 13.51 > 0.05
Los dos grupos tenían una edad, DBP, mmHg 76,12 ± 8,22 77.91 ± 11.40 > 0.05
relación de género, MBP, mmHg 84.12 ± 9.81 87.14 ± 11.54 > 0.05
altura, SPAP, mmHg 27.37 ± 5.16 56.64 ± 18.81 <0.01 **
peso corporal DPAP, mmHg 11.56 ± 2.88 29.42 ± 13.25 <0.01 **
presión arterial diastólica (PAD) similares, mPAP, mmHg 15.52 ± 3.14 36.64 ± 15.24 <0.01 **

presión arterial media (PAM), RAP, mmHg 6.81 ± 2.31 6.74 ± 2.16 > 0.05
creatinina sérica (CRS), PVR, mmHg 18.92 ± 3.32 19.01 ± 3.12 > 0.05
ácido úrico sérico (AUA), CI, L / min • m 2.83 ± 0.61 2.89 ± 0.71 > 0.05
alanina transaminasa (ALT), FEVI,% 64.37 ± 16.51 66,12 ± 11,53 > 0.05
recuento de glóbulos blancos (WBC), FBG, mmol / L 4.91 ± 1.32 5,03 ± 1,67 > 0.05
porcentaje de neutrófilos (NEAU), sCR, mmol / L 61.45 ± 14.13 63.53 ± 17.32 > 0.05
glucosa en sangre en ayunas (FBG) WBC, × 10 9 / L 5,33 ± 1,35 6.12 ± 2.56 > 0.05
NEAU,% 60.19 ± 3.50 62.87 ± 8.72 > 0.05
ALT, U / L 20.47 ± 13.28 23.10 ± 19.92 > 0.05
sUA, mmol / L 0.32 ± 0.06 0.34 ± 0.09 > 0.05
NT-proBNP, pg / ml 53.15 ± 113.54 713.25 ± 413.5 <0.01 *
Niveles de expresión de miRNA en suero circulante

los grupos control y Figura A Las expresiones de miR-

PAH se detectaron el grupo de PAH es 509-5p y miR-509-1
mediante PCR significativamente fueron similares entre
cuantitativa en tiempo menor que el del grupo los dos grupos (P> 0.05)
real. de control (P <0,01). ( Figura B y C).
 Valor diagnóstico del suero circulante
miR-509-3p en PAH

De acuerdo con el
análisis ROC basado en la
expresión relativa

el AUC para el la sensibilidad y

especificidad
diagnóstico de PAH de fueron 80% y 60%,
factor único fue 0,694 respectivamente.

En resumen, la expresión
relativa de miR-509-3p
puede usarse para
diagnosticar PAH
Valor diagnóstico de la ecocardiografía en HAP

La ecocardiografía
• de HAP (SPAP ≥37
se realizó en el caso
mmHg)
de sospecha

ROC se trazó de
acuerdo con el • como el estándar
cateterismo de oro
ventricular derecho

el AUC resultante
fue 0,817 (P <0,01).
 Conclusiones

El suero puede
Cuando los dos Todos los
miR-509-3p en su valor usarse como un
métodos se resultados
suero circulante diagnóstico se índice de
combinaron, su necesitan un gran
fue un marcador aproximó al de la evaluación y un
valor de tamaño de
de diagnóstico ECOCARDIOGRAFÍ marcador
diagnóstico se muestra en los
para la PAH A. pronóstico para la
aumentó. ensayos clínicos,
PAH